Для определения общего микробного числа омч используют следующие методы посева
Обновлено: 05.10.2024
Для определения общей обсемененности поверхностей контролируемых предметов взятие смывов производят по методике, описанной выше (п. 4.3), перед посевом в пробирку с тампоном добавляют 5 мл 0,1% пептонной воды или изотонического раствора хлорида натрия. Тампон тщательно отмывают, после чего 1,0 мл смывной жидкости помещают в чашку Петри и заливают расплавленным МПА. Чашки помещают в термостат при 30 град. C. Предварительный подсчет выросших колоний производят через 48 часов, окончательный - через 72 часа. Количество колоний, выросших на чашке, умножают на 10 для определения общего количества бактерий, содержащихся на поверхности исследуемого предмета.
Тесты онлайн по различным предметам и дисциплинам. Большая подборка полезных тестов онлайн включающая экзамен охранника, мигранта, по охране труда, в ГИМС, по русскому языку, литературе, а также для получения лицензии на оружие, психологические тесты и тесты для проведения профессионального отбора (профотбора) поступающих на службу в силовые структуры - такие как вооруженные силы РФ, в том числе в военные училища (проводят военкоматы), органы внутренних дел (полицию), в том числе институты МВД РФ, министерство по чрезвычайным ситуациям (МЧС).
Тесты онлайн разработаны специально для повышения своего уровня знаний, и подходят для людей различных профессий, а также учащихся различных учебных заведений, как средних так и высших. Многие учащиеся школ, СПТУ, колледжей, институтов, академий воспользовались нашими тестами онлайн, для подготовки к успешной сдачи экзаменов. Грамотно и удобно разработанный интерфейс тестов позволяет отлично подготовится и успешно сдать экзамены.
Для определения общего количества бактерий в воздухе закрытых помещений забирают две пробы (объемом по 100 л каждая) на чашки Петри с МПА при помощи любого прибора (чаще всего аппарата Кротова), либо седиментационным методом, расставляя чашки с питательной средой по принципу конверта. Чашки с посевом помещают в термостат на сутки, а затем на 48 ч оставляют при комнатной температуре. Экспозиция чашек с посевами на свету дает возможность подсчитать раздельно количество пигментных колоний (желтых, белых, розовых, черных, оранжевых и др.), количество спорообразующих бацилл, грибов и актиномицетов.
Подсчитывают количество колоний на обеих чашках, вычисляют среднее арифметическое и делают перерасчет на количество микроорганизмов в 1 м 3 воздуха. Количество каждой группы колоний (пигментных, беспигментных, плесеней, бацилл, актиномицетов) выражают в процентах по отношению к общему числу.
При определении микробного числа методом седиментации по Коху подсчитывают колонии выросшие на чашках Петри (площадь поверхности агара в чашке равна 75 см 2 ) и расчет ведут по правилу В.Л. Омелянского: на поверхность площадью 100 см 2 за 5 мин оседает такое количество микробов, которое содержится в 10 л воздуха.
где Х - количество микробов в 1 м 3 ; А - количество колоний на агаре в чашке Петри.
Результаты получаются заниженными примерно в 3 раза по сравнению с данными, получаемыми при использовании аппарата Кротова.
Определение стафилококков
Отбор проб воздуха проводится с помощью аппарата Кротова в количестве 250 л на 2—3 чашки с желточно-солевым агаром и на чашку с кровяным агаром. Чашки инкубируют при температуре 37°С в течение 48 ч. Изучают культуральные признаки всех видов колоний, из подозрительных готовят мазки и окрашивают по Граму.
Подсчитывают количество выросших колоний стафилококков и определяют число микробов в 1 м 3 воздуха.
При возникновении внутрибольничных инфекций стафилококковой этиологии проводят исследования, направленные на выявление источников и путей распространения инфекции: путем фаготипирования определяют идентичность стафилококков, выделенных из объектов окружающей среды, а также от больных и обслуживающего персонала.
Определение стрептококков
Отбор проб воздуха при исследовании на наличие α- и β-гемолитических стрептококков производят с помощью аппарата Кротова на чашки с кровяным агаром. Забирают 200—250 л воздуха, чашки с посевами выдерживают в термостате 18—24 ч и затем еще 48 ч при комнатной температуре (после предварительного просмотра и учета). Подсчет количества выросших колоний проводят на 1 м 3 с последующим контрольным микроскопированием и выборочным пересевом колоний на кровяной агар или сахарный бульон.
Определение патогенных микроорганизмов.
Ввиду малой концентрации патогенных микроорганизмов в воздухе закрытых помещений, их выделение является достаточно трудной задачей. По эпидемиологическим показаниям в воздухе определяют наличие сальмонелл, микобактерий, вирусов и т.д.
При исследовании внутрибольничных инфекций определяют в воздухе присутствие стафилококков, стрептококков, синегнойной палочки, сальмонелл, протеев и др. Отбор проб воздуха производят с помощью ПАБ-1 в объеме не менее 1000 л. Посев производят на соответствующие элективные среды. Если используется жидкая среда как улавливающая жидкость, то пробирку с жидкостью помещают в термостат на сутки для подращивания (получение накопительной культуры), а затем высевают на элективную среду.
При исследовании воздуха на наличие микобактерий туберкулеза используют среду Левенштейна-Иенсена, коринебактерий дифтерии – среду Клауберга.
Санитарно-микробиологическое исследование воды.
Микрофлора воды.
В воде формируются определенные биоценозы с преобладанием микроорганизмов, адаптировавшихся к условиям местонахождения. Количественный и качественный состав микрофлоры воды зависит от состава и концентрации минеральных и органических веществ, температуры, рН, скорости движения воды, массивности поступления ливневых, фекально-бытовых и промышленных сточных вод. Количество микробов прямо пропорционально степени загрязненности водоемов. Особенно богаты микроорганизмами пруды, ручьи, озера густо населенных районов. В закрытых водоемах (озера, пруды) наблюдается определенная закономерность в распределении бактерий. Состав микроорганизмов различен на поверхности воды и на дне водоемов. Наиболее обильно заселена микроорганизмами вода на глубине 10-100 см. В более глубоких слоях их количество значительно снижается. Ключевые воды и воды артезианских колодцев наиболее чисты.
Микрофлора воды активно участвует в процессе самоочищения от органических отходов. Утилизация органических отходов связана с деятельностью постоянно обитающих в воде микроорганизмов, т.е. составляющих аутохтонную микрофлору. В пресных водоемах находятся различные бактерии: палочковидные (псевдомонады, аэромонады и др.), кокковидные (микрококки), извитые и нитевидные (актиномицеты). На дне водоемов, в иле увеличивается количество анаэробов. При загрязнении воды органическими веществами появляется большое количество непостоянных (аллохтонных) представителей микрофлоры воды, которые исчезают в процессе самоочищения воды.
Вода – фактор передачи возбудителей многих инфекционных заболеваний. Вместе с загрязненными ливневыми, талыми и сточными водами в озера и реки попадают представители нормальной микрофлоры человека и животных (кишечная палочка, цитробактер, энтеробактер, энтерококки, клостридии) и возбудители кишечных инфекций (брюшного тифа, паратифов, дизентерии, холеры, лептоспироза, энтеровирусных инфекций, криптоспоридиоза и др.). Некоторые возбудители могут даже размножаться в воде (холерный вибрион, легионеллы).
Исследование воды
Поскольку вода используется при производстве любого вида продукции, а также непосредственно в пищу, соответствие ее качества санитарно-микробиологическим показателям чрезвычайно важно. Водным путем могут передаваться кишечные инфекции - холера, брюшной тиф и паратифы, сальмонеллез, дизентерия, гепатит А, а также лептоспирозы, сибирская язва, туляремия, различные грибковые заболевания. В связи с этим основной целью санитарно- микробиологического исследования воды является определение наличия в воде патогенной и условно-патогенной микрофлоры, и, следовательно, источника этого попадания, а также предупреждение распространения инфекционных заболеваний среди населения.
Исследованию подлежит вода централизованного водоснабжения, колодцев, открытых водоемов, бассейнов, сточные воды.
Санитарно-микробиологическое исследование воды проводится в следующих случаях:
1) при выборе источника централизованного хозяйственно- питьевого водоснабжения и периодическом контроле этого источника;
2) при контроле эффективности обеззараживания питьевой воды централизованного водоснабжения;
3) при наблюдении за подземными источниками централизованного водоснабжения, за такими как артезианские скважины, почвенные воды и т.д.;
4) при определении состояния и степени пригодности воды источников индивидуального водопользования (колодцев, родников и т.д.);
5) при наблюдении за санитарно-эпидемиологическим состоянием воды открытых водоемов: водохранилищ, прудов, озер, рек;
6) при контроле эффективности обеззараживания воды плавательных бассейнов;
7) при проверке качества и степени очистки сточных вод;
8) при определении очага водных вспышек инфекционных болезней.
При санитарно-микробиологическом исследовании воды определяются различные показатели в зависимости от поставленной задачи и характера исследуемого объекта (табл. 3)
Наиболее точный показатель неблагополучности исследуемого объекта — это наличие патогенных микроорганизмов. Однако потенциально опасные для человека микроорганизмы составляют ничтожную часть микрофлоры окружающей среды. Выделение патогенных микроорганизмов из объектов окружающей среды затруднено из-за заселенности их большим количеством сапрофитов, которые препятствуют росту патогенной микрофлоры на питательных средах. Определенные трудности связаны и с необходимостью использования сложных и трудоемких методов исследования. Серьезно осложняет процесс анализа неравномерное распределение патогенных микроорганизмов в окружающей среде.
Выделение одного возбудителя далеко не всегда свидетельствует о присутствии патогенов других видов. Кроме того, в условиях внешней среды происходят генетические процессы (мутация, трансформация, трансдукция и др.), которые приводят к изменению исходных и формированию новых признаков патогенных микроорганизмов. В последнее время ситуация в значительной мере осложняется возрастающей ролью условно-патогенных микроорганизмов в возникновении массовых заболеваний.
Присутствие того или иного патогенного микроорганизма можно ориентировочно установить путем прямой микроскопии (обычной или люминесцентной). Достаточно быстро и эффективно патогенные микроорганизмы выделяют при посеве исследуемого материала на накопительные, элективные и дифференциально-диагностические среды. Один из классических методов—заражение лабораторных животных с последующим выделением патогенного микроорганизма. Широко применяются разнообразные методы иммунодиагностики, полимеразная цепная реакция (ПЦР), гибридизация нуклеиновых кислот, реакция нарастания титра фага (РНТФ) и др. В определенной степени перспективен и автоматизированный метод мультисубстратного тестирования. К сожалению, даже современные методы не гарантируют успеха при незначительном содержании патогенов в исследуемых объектах.
Поэтому исследования на патогенную микрофлору в санитарной микробиологии проводят только по эпидемическим показаниям, и санитарно-микробиологические исследования, как правило, имеют целью не обнаружение патогенов, а поиск косвенных показателей неблагополучия объектов внешней среды, тем более что в обыденной практике чаще всего решается лишь вопрос о потенциальной вероятности заражения исследуемых объектов.
Определение общего микробного числа (ОМЧ) изучаемого объекта — наиболее часто используемый метод. ОМЧ — это цифровой показатель содержания микроорганизмов в единице массы или объема исследуемого объекта. Предполагается, что вероятность проникновения в исследуемый субстрат потенциально опасных микроорганизмов будет тем выше, чем больше окажется общая обсемененность. Кроме того, высокое ОМЧ может свидетельствовать о загрязнении объекта органическими веществами. Однако необходимо помнить, что существует ряд ограничений, не позволяющих считать этот показатель универсальным. Некоторые объекты могут содержать микрофлору, активно вытесняющую и убивающую патогенные микроорганизмы.
В этом случае микробное число может изменяться сравнительно мало, и первоочередное значение будут иметь массивность заражения и его давность. Во многих пищевых продуктах имеется обильная специфическая микрофлора, участвующая в их изготовлении (например, в кисломолочных продуктах). Такие продукты могут (и должны) иметь значительное микробное число, но при этом не представляют опасности для здоровья. Напротив, встречаются объекты, сравнительно скудно обсемененные микроорганизмами, но при этом подвергающиеся избирательному загрязнению патогенной микрофлорой (например, предметы обихода, загрязненные выделениями больных). Кроме того, для многих объектов характерны крайне неравномерная микробная обсемененность и постоянный взаимообмен микрофлорой с окружающей средой.
Таким образом, показатель общей обсемененности микроорганизмами является критерием не для всех объектов окружающей среды и служит основанием только лишь для приближенных оценок. Тем не менее этот показатель имеет определенную сравнительную ценность и поэтому достаточно широко используется в практике санитарно-микробиологических исследований. Определение общего микробного обсеменения осуществляется разными способами.
Для прямого подсчета микроорганизмов используют специальные счетные камеры Петрова-Гаузера или Гельбера. Можно пользоваться гематологическими счетными камерами. При этом для облегчения счета часто применяют красители (например, эритрозин) или флюорохромы (акридиновый оранжевый и др.). Существуют фотоэлектрические или электронные счетчики для автоматического подсчета микроорганизмов в камерах. Можно также использовать метод Разумова, заключающийся в осаждении микроорганизмов из определенного объема жидкости на мембранные фильтры и дальнейшем подсчете под микроскопом в падающем свете осевших клеток. Ряд методов основан на определении числа частиц в струе газа или жидкости; эти методы позволяют существенно повысить продуктивность исследований.
Хорошо известны импакторы, осаждающие частицы определенных размеров на улавливающие пластинки, которые затем исследуют микроскопически или фотометрически. При помощи проточных цитофлуориметров анализируют клетки в суспензии в свободной струе жидкости, пересекающей луч света (измеряются интенсивность флуоресценции, а также рассеяние света под различными углами). Использование при этом ДНК-специфичных красителей, избирательно окрашивающих живые клетки и клетки с поврежденной мембраной (4,6-диамидино-2-фенилиндол или флуоресцин диацетат и пропидий йодид соответственно), делает возможным не только прямой количественный подсчет клеток микроорганизмов, но и определение процентного содержания жизнеспособных клеток, что особенно важно при санитарных исследованиях. Разработаны и другие автоматизированные методы подсчета клеток (электростатические, фотоэлектрические и другие счетчики).
К сожалению, даже использование современной техники не позволяет считать метод прямого подсчета микроорганизмов идеальным. Часто микроорганизмы образуют более или менее крупные скопления, не всегда удается добиться полной гомогенизации исследуемых объектов, значительно осложняют подсчет примеси (особенно растительные остатки), невозможно подсчитать количество вирусных частиц и т. п. Обычно методы прямого подсчета применяют в экстренных случаях при необходимости срочного ответа о количестве микроорганизмов (аварии в системах водоснабжения и пр.).
Другим широко используемым способом оценки микробной обсемененности является количественный высев на питательные среды. В этом случае под общим микробным числом понимают количество колоний, вырастающих на МПА в чашках Петри после определенного срока инкубации при той или иной температуре из 1 мл (для твердых субстратов — 1 г) исследуемого материала. Таким образом, чаще всего учитываются мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы (МАФАМ), способные расти на МПА. Естественно, что получаемые при использовании этого метода цифры, как правило, значительно уступают величинам, устанавливаемым при прямом подсчете. В этом случае не учитываются мертвые, а также потерявшие способность к размножению микроорганизмы. Кроме того, не всегда оказывается возможным проведение полной десорбции микроорганизмов с частиц субстрата.
Если проба недостаточно гомогенизирована, то ряд колоний может образовываться не из отдельных клеток, а из их скоплений. Наконец, не существует универсальных питательной среды и режима инкубации, которые были бы пригодны абсолютно для всех микроорганизмов. Оценивается общая обсемененность только количественным методом без качественного состава микроорганизмов. Малая обсемененность не гарантирует безопасность в отношении золотистого стафилококка. Однако, несмотря на приведенные выше ограничения, не вызывает сомнения целесообразность и необходимость использования метода для сравнительных целей. Этот метод широко используется для санитарной оценки воды, почвы, хотя при этом значительное количество почвенных и водных микроорганизмов не учитывается (выпадают из учета анаэробы, грибы, серные, азотфиксирующие, нитрифицирующие и другие бактерии). При необходимости для учета этих микроорганизмов используют соответствующие питательные среды.
Достаточно редко применяется титрационный метод определения ОМЧ. При этом используются жидкие питательные среды. После инкубации учитывают появление роста и определяют предельное разведение, содержащее жизнеспособные микроорганизмы, а отсюда и количество последних в исследуемом материале. Этому методу свойственны те же недостатки, что и описанному выше обычному количественному высеву. Метод имеет некоторые преимущества лишь при исследовании объектов, микрофлора которых достаточно однородна; тогда используют среды наиболее пригодные для развития преобладающих видов микроорганизмов.
В последнее время активно разрабатываются автоматизированные системы, позволяющие давать быструю количественную оценку степени микробного загрязнения объектов окружающей среды. Достаточно широко используются измерительные системы для полностью автоматического обнаружения микробной контаминации (например, BACTERIA TRACER). Действие таких систем основано на принципе регистрации относительного изменения электрического сопротивления питательной среды, происходящего под действием процессов роста и жизнедеятельности микроорганизмов. Рост микроорганизмов приводит к изменению концентрации ионов в питательной среде и на измерительных электродах и тем самым к изменению электрического сопротивления в заданном интервале времени. Благодаря непрерывной регистрации и полной автоматизации степень микробного загрязнения можно определить уже через несколько часов.
Необходимо отметить, что для характеристики объектов, имеющих специфическую микрофлору, размножение которой связано с технологией производства, определение ОМЧ не применяют.
Читайте также: