Двухфазная среда для посева крови на стерильность

Обновлено: 05.10.2024

Микробиологический посев крови на стерильность позволяет вырастить микроорганизмы на специализированных питательных средах (для аэробов и анаэробов) с последующей их идентификацией с помощью масс-спектрометра. Антибиотикочувствительность ставится диско-диффузионным методом с учетом рекомендаций по антибиотикорезистентности возбудителей к антибактериальным препаратам.

В каких случаях обычно назначают посев крови на стерильность?

Заражение крови или септицемия может быть осложнением локального гнойного процесса из-за прорыва микроорганизма в кровяное русло, например, при пневмонии или остеомиелите. Сопровождается стойкой температурной реакцией и может осложниться инфекционно-токсическим шоком.

Проникновению бактерий в кровяное русло и развитию бактериемии способствуют:

внутривенная катетеризация
катетеризация мочевого пузыря
любые инвазивные процедуры
операционные вмешательства
снижение иммунитета
иммуносупрессивная терапия

Посев крови на стерильность необходим врачам специалистам при проявлении у пациента признаков сепсиса.

Что именно определяется в процессе анализа?

Гемокультивирование позволит выделить причинную бактериальную культуру септического состояния и её чувствительность к антибиотикам различных групп.

Что означают результаты теста?

У здорового человека кровь является стерильной.

Обычный срок выполнения теста:

Нужна ли специальная подготовка к анализу?

Специальная подготовка не требуется. Взятие крови производится на пике лихорадки перед началом антибиотикотерапии или через 12-24 часа после последнего введения препарата больному.

Взятие биоматериала проводится до начала антибактериальной терапии или непосредственно перед введением очередной дозы препарата.

Посев крови на стерильность - анализ, который необходим для выявления инфекции в кровяном русле и идентификации её возбудителя. В нормальных условиях кровь обычно стериально, но при некоторых инфекциях возможно появление бактерий в крови - бактериемия или грибов фунгемия. В случае возникновения общей воспалительной реакции организма на попадание микроорганизмов в кровянное русло развивается так называемый сепсис (септицемия) - заражение крови.

Заражение крови обычно происходит в случае распространения инфекции с какого-либо органа на кровяное русло. Чаще всего подобное осложнение возможно в случае агрессивной тяжелой первоначальной инфекции, а также при состояниях, сопровождающихся подавлением иммунитета. Высокому риску развития септицемии подвергаются ВИЧ-инфицированные или страдающие лейкемией лица, а также принимающие химиопрепараты.

Бактерии и грибы могут также попасть в кровяное русло непосредственно через внутривенный катетер или хирургический дренаж. Внутривенный прием наркотических средств также способствует проникновению в кровь инфекции.

Симптомы септицемии - повышение температуры, лихорадка, учащенное дыхание, тахикардия (учащенное сердцебиение), спутанность сознания, редкое мочеиспускание. По мере прогрессирования инфекции развиваются более тяжелые проявления, среди которых резкое снижение артериального давления - септический шок, формирование множества крошечных сгустков крови в мелких кровеносных сосудов - так называемый ДВС-синдром (синдром диссеменированного внутрисосудистого свёртывания), выход из строя одного или нескольких органов.

Обычно для проведения анализа используют два или три образца крови, взятой из разных вен. Это необходимо, чтобы увеличить вероятность обнаружения бактерий или грибов. Несколько образцов крови помогают дифференцировать микроорганизмы, которые присутствуют в кровяном русле, от бактерий, попадающих в образец в процессе забора материала.

Данный анализ позволяет выявить бактерии и грибы в кровяном русле, а также идентифицировать вид микроорганизма. Анализ помогает диагностировать сепсис (септицемию).

Культуральное исследование крови необходимо производить всем тяжелобольным с лихорадкой, ознобом, в случае подозрения на эндокардит, внутрисосудистую инфекцию или иммуносупрессию.
Причиной сепсиса или бактериемии, особенно у ослабленных больных, могут быть любые микроорганизмы, включая условно-патогенные и даже сапрофитные виды. Если обнаружение в крови патогенных микроорганизмов практически всегда свидетельствует об их этиологической значимости, то находки условно-патогенных и сапрофитических видов могут быть следствием контаминации крови в процессе ее взятия или случайного загрязнения посевов при дальнейшей работе с ними.

Метод определения

Посев на питательные среды.

Выделяемые микроорганизмы: аэробы (стрептококки, стафилококки, энтеробактерии, неферментирующие, энтерококки), анаэробы (Actinomyces, Bacteroides, Clostridium, Eubacterium, Fusobacterium, Gemella, Peptostreptococcus, Porphyromonas, Prevotella, Propionibacterium, Veilonella).

Два шага в одной процедуре, включающей инокуляцию материала и одновременное выделение изолированных колоний на поверхности плотной фазы.

HiSafe Blood Culturing System & HiCombi Dual Performance Medium

Система для выделения гемокультур HiSafe и HiCombi

Одним из важнейших материалов, поступающих для исследования в микробиологическую лабораторию, является кровь. Известно, что в норме кровь стерильна, поэтому выделение гемокультуры имеет принципиальное значение для диагностики, в частности, таких состояний, как эндокардит, тифо-паратифозные заболевания и сальмонеллезы, пневмония, осложненный нагноением тромбофлебит, инфекции, связанные с пластикой сосудов и др. (1). Ввиду того, что концентрации микроорганизмов в крови при бактериемиях, как правило, невысоки, для посева необходимо брать достаточно большое количество крови. Естественная бактерицидная/бактериостатическая активность крови, наряду с предшествующей антибиотикотерапией, могут быть причиной отрицательного или несвоевременно полученного положительного результата исследования на гемокультуру (2). Соответственно, для инактивации бактерицидных свойств крови и обеспечения роста бактерий в качестве нетоксичного антикоагулянта можно применять такое вещество, как SPS (натрия полианетолсульфонат) (3, 4, 5). SPS подавляет активность стрептомицина (6), полимиксина В, канамицина и гентамицина. Полезность SPS для выделения гемокультур первыми показали Van Haebler и Miles.

Система для выделения гемокультур HiSafe предназначена для быстрого, эффективного и простого выделения гемокультур и их предварительной идентификации. Все питательные среды, входящие в систему ХайСейф (смотри ниже), специально разрабатывались для выращивания разнообразных клинически значимых микроорганизмов, как неприхотливых, так и прихотливых видов.

Методика

Кровь у больного берут (предпочтительно до назначения антимикробной терапии) стерильным инструментом и асептично переносят во флакон системы HiSafe, содержащий соответствующую питательную среду (выбор среды зависит от свойств предполагаемого возбудителя). Засеянные флаконы инкубируют в термостате и отмечают появление мутности, изменение цвета среды, гемолиза и/или газообразования.

Взятие материала

Кровь берут предпочтительно до назначения антимикробной терапии. Если антибиотики уже назначены, кровь берут непосредственно перед очередным введением антибиотика.
Кровь берут натощак, так как хилезная кровь может маскировать рост в жидкой среде.
Кровь берут в определенные промежутки времени, особенно рекомендуется это делать при появлении симптомов лихорадки.
Может потребоваться многократное взятие крови (2-3 раза) в определенные промежутки времени.
Руки персонала должны быть чистыми и сухими. Поскольку имеется опасность заражения персонала такими инфекциями, как гепатит В и ВИЧ-инфекция, оператору следует пользоваться стерильными перчатками.
Место инъекции дезинфицируют, тщательно обрабатывая его тампоном, смоченным 70%-ным раствором изопропанола или этанола и 2%-ным раствором иода. Перед введением иглы кожа должна высохнуть.
Используя стерильную (лучше одноразовую) иглу, у больного берут следующее количество крови:

Для чего нужно проверять кровь на стерильность? Ответ на этот простой, казалось бы, вопроси обусловливает важность темы данного занятия не только для специалистов бактериологической службы больницы, но и для всего ее среднего медперсонала. А в преддверии сезонных респираторных заболеваний она особенно актуальна.

Дело в том, что в современной диагностической практике анализ крови на стерильность проводят для того, чтобы узнать о наличии бактериемии. Сдавать кровь на стерильность врачи рекомендуют непосредственно перед процессом терапии, остерегаясь получить неправильный результат.Показанием к проведению такого анализа может служить определение в крови патогенных микроорганизмов.

Примерами последних могут быть стрептококки, синегнойные палочки, золотистые стафилококки, дрожжевые грибы и энтеробактерии. Например, для обнаружения заражения эпидермальным стафилококком необходимо провести многократное тестирование.

Такие виды исследований очень важны для больных людей с низким иммунитетом. К примеру, зараженные ВИЧ-инфекцией пациенты могут быть обладателями микобактерий туберкулеза.

В большинстве случаях анализ делают в тех случаях, когда у пациента уже длительное время держится и не спадает высокая температура, причем происходит это без особых на то причин. Помимо всего, анализ назначают при подозрении на сепсис или менингит.

Проведение этого анализа помогает определить бактерии, содержащиеся в составе крови. Это могут быть как опасные, так и условно-патогенные бактерии, которые также могут оказаться причиной болезни. Помимо того, что проведением анализа можно установить наличие определенной бактерии, можно определить и стадию, на которой находится заболевание.

Если посев крови проводится с целью определения чувствительности организма к разнообразию антибиотиков, то анализ поможет установить тип возбудителя и назначить подходящие антибиотики для проведения лечения. В данном случае анализ поможет определить неэффективное использование предыдущих антибиотических препаратов; наличие менингита или сепсиса, а также гнойничковое поражение кожи.

Перед проведением анализа необходимо придерживаться самых стандартных правил – пару дней не пить алкоголь, не употреблять жирную пищу, постараться отказаться от курения, хотя бы за пару часов до проведения анализа. Прием лекарственных препаратов назначается после проведения анализа.

Во время проведения анализа отдельное внимание стоит обратить на тот факт, что в 3% случаях эпидермальный стафилококк (загрязненная микрофлора кожи) может выступить в качестве гемокультуры. Именно поэтому его клиническое значение определяется только после многократных исследований.

Во время исследования необходимо произвести забор крови из вены у локтевого сгиба. У детей младшего возраста забор крови производится из пальца, пятки, мочки уха в меньшем количестве. Кровь для проведения анализа берут только после тщательной обработки кожи, соблюдая все правила асептики, используя одноразовый стерильный шприц.

Посев на питательные среды стерильного материала (кровь или другие, содержащие микробов жидкости у здоровых лиц) также лучше делать у постели больного, либо помещать в стерильную посуду, содержащую вещества, препятствующие свертыванию крови 0,3% раствора цитрата натрия, 0,1% раствор оксалата натрия). Обычно берут 5-10мл крови и засевают во флакон, содержащий 50-100 мл среды. Для этого используют для флакона с питательной средой (один для аэробов, другой для анаэробов). Посев крови производится на жидкие питательные среды – 10% желчный бульон, 1% сахарный бульон, двухфазную среду, а также жидкие и полужидкие среды для культивирования анаэробов в разведении 1:10. Флаконы с питательной средой получают в лаборатории, переливание крови из шприца во флакон необходимо производить над пламенем спиртовки, предварительно сняв иглу. Флакон с посевом направляется в лабораторию, а в вечернее и ночное время помещают в термостат.

Важным моментом является тот факт, что чем раньше произвести посев от начала болезни, тем больше возможность получить положительный результат, и наоборот, чем позднее, тем меньше шансов. При нормальной температуре получения положительного результата бывает очень редко.

Техника посева позволяет увидеть, как растут колонии, а также провести с образцовыми цепочками микроорганизмов тесты, позволяющие окончательно определить их тип.

Кровь для бактериологического посева необходимо сдавать до начала лечения антибиотиками, поскольку употребление антибиотиков может отсрочить или предотвратить рост бактерий, что приведет к ложноотрицательному результату. У пациентов с периодическим повышением температуры тела кровь нужно брать в период, когда температура растет или сразу же после прохождения пика температуры. Именно в это время в крови находится максимальное количество бактерий. Во многих лабораториях специалисты рекомендуют сдать второй образец крови не позднее, чем через один час после первого, для того, чтобы увеличить шансы обнаружения бактерий.

При бактериологическом посеве нужно придерживаться асептической техники, чтобы исключить возможность бактериального загрязнения крови. Если образец взят согласно правилам, в бутылку с питательной средой попадут только те микроорганизмы, которые находится в крови больного.

Правила взятия крови для бактериологического посева:
Кровь следует брать из периферической вены, без использования катетера, чтобы исключить загрязнение.
Процедура выполняется в стерильных перчатках. Место венепункции смазывается антисептиком.
Также антисептиком дезинфицируется и крышка бутылки с питательной средой.
Кровь берется стерильным шприцем.
В бутылку кровь вносится через резиновую пробку. Снимать пробку с бутылки нельзя.
Культура крови снабжается этикеткой с данными о пациенте.

Результаты бактериологического посева крови делятся на следующие три группы:
– роста бактерий нет;
– чистый рост бактерий;
– смешанный рост бактерий.

Отсутствие роста бактерий: нормальный результат, означающий, что кровь пациента стерильна.

Чистый рост бактерий: результат, означающий, что имеется рост одного вида бактерий, который был выделен из культуры. Получения такого результата следует ожидать, когда у пациента сепсис.

Смешанный рост: результат указывает на то, что из культуры было выделено более одного вида бактерий. Такое инфицирование крови случается редко. Чаще всего, смешанный рост бактерий является подтверждением того, что питательная среда была загрязнена.

Слушателям школы практического мастерства был продемонстрирован и дипстрик – полуавтоматическое устройство, правильно пользоваться которым может даже неквалифицированный медицинский персонал или пациенты в амбулаториях, стационарах и даже домашних условиях. Применение Дипстрика позволяет повысить безопасность бактериологического анализа мочи, так как в лабораторию вместо них поступают посевы в закрытых контейнерах.

Система Signal, основанная на манометрическом методе, уже более 20 лет успешно применяется в Европе для тестирования крови на стерильность

Читайте также: