Идентификация бактерий посевом на триаду хейберга
Обновлено: 05.10.2024
В лабораторной практике идентификация видов и биоваров энтеробактерий проводится по их фенотипическим признакам. Основным и наиболее сложным разделом идентификации является изучение биохимических свойств бактерий. Повсеместно за рубежом и во многих лабораториях нашей страны биохимическая идентификация бактерий осуществляется микрообъемной технологией. При этом используются специальные микрообъемные тест-системы для автоматических бактериологических анализаторов или различные коммерческие тест-системы биохимической идентификации бактерий для визуального учета. Микрообъемная технология наиболее экономична, проста, пригодна для автоматизации и стандартизации исследований.
Автоматические бактериологические анализаторы для микрообъемной биохимической идентификации бактерий и определения их чувствительности кантибиотикам производятся фирмой "Bio Merieux" (Франция): "Vitek-2" - полностью автоматизированная система для идентификации 99 видов энтеробактерий и неферментирующих бактерий; полуавтоматические системы "АТВ Expression" и "Mini API" на основе тест-системы "ID 32E" для идентификации за 24 ч 99 видов энтеробактерий и тест-системы "Rapid ID 32Е" для идентификации за 4 ч 73 видов энтеробактерий. Компания "Dade AG" (США) выпускает автоматические бактериологические анализаторы "Walk-Away-40", "Walk-Away-96" и полуавтоматический бактериологический анализатор "Auto SCAN-4". Применяются автоматические анализаторы других фирм: Quantum II, Cobas Micro. Указанные приборы имеют высокую стоимость, что ограничивает их применение.
Коммерческие микрообъемные тест-системы по устройству представлены двумя группами: содержащими субстрат реакции в питательной среде или в шаблоне-носителе. Результаты биохимических тестов учитываются визуально, вид микроорганизма устанавливается с помощью таблицы идентификации, кодов (профилей) или компьютерных программ.
Среди тест-систем, основанных на принципе "субстрат в питательной среде" широко используются: API 20E "Bio Merieux" (Франция); Enterotest I и Enterotest 2, Enterotest 16, Entero-Screen (АО "Lachema", Чехия), мультимикротесты ММТЕ I и ММТЕ 2 (НПО "Аллерген" г. Ставрополь); ПБДЭ (НПО "Диагностические системы" г. Нижний Новгород); "РАПИД-ЭНТЕРО - 200" и "РАПИД-ЭНТЕРО - 50" (НИИЭМ имени Пастера, отдел новых технологий, г. Санкт-Петербург).
К системам типа "субстрат в шаблоне носителя" относятся коммерческие тест-системы Micro - ID, Minitek, в которых субстрат и индикатор находятся на бумажных дисках, которые вносят в лунки планшетов с суспензией бактерий.
Тест-система API 20E "Bio Merieux" (Франция) предназначена для биохимической идентификации энтеробактерий и других грамотрицательных палочек в течение 18 - 24 ч. Состоит из прозрачной полимерной пластинки с 20 микропробирками объемом 0,25 мл, содержащими дегидратированные субстраты для определения 20 тестов: β-галактозидазы, аргининдигидролазы, лизиндекарбоксилазы, орнитиндекарбоксилазы, уреазы, триптофандезаминазы, желатиназы; образования индола, сероводорода, ацетоина; ферментации цитрата, глюкозы, маннитола, инозитола, сорбитола, амигдалина, рамнозы, сахарозы, мелецитозы, арабинозы. Дополнительно вне панели определяют цитохромоксидазу, окисление и ферментацию глюкозы, подвижность. В состав комплекта входят также реактивы для определения индола, триптофандезаминазы, ацетоина, нитритов, оксидазы. Для исследования берут изолированную колонию со среды первичного посева, ставят пробу на оксидазу, готовят из колонии суспензию бактерий определенной мутности по шкале Мак-Фарланда. Вносят во все микропробирки по 100 мкл суспензии бактерий, затем добавляют по 50 мкл вазелинового масла в микропробирки с тестами на уреазу, лизиндекарбоксилазу, орнитиндекарбоксилазу, аргининдигидролазу, сероводорода. Посевы инкубируют при 36 °С в течение 18 - 24 ч, после чего добавляют реактивы на ацетоин, индол, триптофандезаминазу, нитриты. Результаты учитывают визуально, заполняют бланки с кодами цифрового профиля. Идентификацию проводят по кодам или идентификационной таблице. Если на панели нет ферментации глюкозы и менее двух положительных прочих тестов, ставят ОФ тест, определяют подвижность и продлевают наблюдение еще 24 ч для выявления неферментирующих бактерий.
Тест-система Rapid 20E (Bio Merieux) предназначена для биохимической идентификации энтеробактерий и других грамотрицательных палочек в течение 4 ч. Состоит из прозрачной полимерной пластинки с 20 микропробирками, содержащими дегидратированные субстраты для определения 20 тестов: β-D-галактозидазы, лизиндекарбоксилазы, орнитидекарбоксилазы, уреазы; образования индола, ацетоина; ферментации цитрата, эскулина, маннитола, арабинозы, ксилозы, адонитола, рамнозы, целлобиозы, мелецитозы, сахарозы, трегалозы, рафинозы, глюкозы. Исследования проводят так же, как тест-системой API 20E. Результаты учитывают через 4 ч инкубации при 36 °С. Вид бактерий идентифицируют по кодам.
Тест-система Enterotest 1 и 2 (АО "Lachema") предназначена для определения биохимической активности и идентификации наиболее важных энтеробактерий в течение 18 - 24 ч. Состоит из двух полимерных планшетов 8,5 х 12,5 см содержащих по 96 ячеек с высушенными питательными средами с субстратами для определения 23 биохимических тестов. Enterotest 1 для родовой идентификации позволяет определять 12 тестов: уреазу, β-D-галактозидазу, липазу, фенилаланиндезаминазу, орнитиндекарбоксилазу, лизиндекарбоксилазу; образование индола, сероводорода, ацетоина; ферментацию маннитола, цитрата, инозитола. Enterotest 2 для видовой идентификации определяет 11 тестов: ферментацию адонитола, эскулина, малоната натрия, рамнозы, целлобиозы, сахарозы, сорбитола, глюкозы, дульцитола, трегалозы и аргининдигидролазу. Имеются также среда и реактивы для определения вне планшетов оксидазы и О/Ф теста с глюкозой, а также набор реактивов для тестов в планшетах. Исследуемую чистую культуру-колонию со среды первичного посева (Мак-Конки агара, Эндо или других) изучают на оксидазу с помощью полосок окси-тест и ставят О/Ф тест на ферментацию глюкозы (в пробирках). Из изолированной колонии готовят суспензию в физиологическом растворе, равную степени № 1 по шкале мутности Мак-Фарланда. Делают высев суспензии для проверки чистоты культуры на кровяной агар. По 100 мкл суспензии бактерий вносят во все 23 лунки двух планшетов, заливают вазелиновым маслом лунки тестов на лизин, индол, сероводород, орнитин, уреазу, аргинин. Инкубируют планшеты в пакете из полиэтилена при 35 - 37 °С в течение (18 - 24) ч. Затем вносят в лунки реактивы на индол, ацетоин, фенилаланин. Учитывают визуально все результаты тестов, в том числе О/Ф теста. Идентификацию проводят с помощью идентификационных таблиц.
Система Enterotest 16 (АО "Lachema") предназначена для идентификации наиболее значимых в медицине энтеробактерий в течение 18 - 24 ч. Состоит из двух рядов (по 8 лунок) стрипированного 96-луночного планшета. В лунках содержатся вышеуказанные среды для определения 16 тестов: уреазы, фенилаланиндезаминазы, лизиндекарбоксилазы, орнитиндекарбоксилазы; образования индола, сероводорода; ферментации цитрата, эскулина, малоната, инозитола, адонитола, целлобиозы, сахарозы, сорбитола, маннитола, трегалозы. Имеются дополнительно идентификационные полоски Микро-Ла-Тест: ОКСИ тест - для выявления цитохромоксидазы, ОНП тест - на бета-галактозидазу, КОЛИ тест - на β-D-глюкуронидазу, ВП тест - на ацетоин; набор реактивов. Исследуют изолированные колонии со сред первичного посева (Эндо, Мак-Конки). Предварительно ставят тест на цитохромоксидазу с полоской ОКСИ тест и О/Ф-тест с глюкозой. Из изолированной колонии со среды Эндо или Мак-Конки готовят суспензию на физиологическом растворе степени № 1 по шкале Мак-Фарланда. Проводят контрольный высев суспензии на чистоту на кровяной агар. Вносят по 100 мкл суспензии бактерий в лунки двух рядов стрипов (16 лунок), добавляют вазелиновое масло в необходимые лунки, вносят полоски ОНП тест, КОЛИ тест, ВП тест в пробирки с суспензией бактерий, инкубируют при 35 - 37 °С в течение 18 - 24 ч. Учитывают все тесты и заносят в бланки. Идентификацию проводят с помощью идентификационных таблиц или книг кодов.
Система мультимикротестов Entero-Screen (АО "Lachema") предназначена для ускоренной идентификации сальмонелл в пищевой промышленности и санитарно-эпидемиологической службе, для идентификации наиболее часто встречающихся энтеробактерий в моче или другом клиническом материале в течение 4 ч. Система представляет собой стрипированный полимерный планшет из 96 лунок, содержащий в каждом из 12 стрипов (по 8 лунок) вышеуказанные среды для 8 ключевых тестов: уреазы, лизиндекарбоксилазы, орнитиндекарбоксилазы, фенилаланиндезаминазы; образование индола, ацетоина; ферментации глюкозы, сахарозы. Дополнительно имеются бумажные полоски: 0X1 test - на цитохромоксидазу, SALM test - на обнаружение сальмонелл, COLI test - на обнаружение Е.coli, PYR test - на выявление пирролидониламидазы.
Для исследования системой Entero-Screen используют чистую культуру, выросшую на среде Эндо, Мак-Конки агаре или агаре с кровью барана. Проводят микроскопию с окраской по Граму и тест на оксидазу (OXI test). Готовят суспензию 3-й степени мутности по Мак-Фарланду. Высевают часть суспензии для проверки чистоты культуры на неселективную среду (24 ч, 37 °С). Вносят по 100 мкл суспензии бактерий во все лунки стрипа, добавляют парафиновое масло в лунки с лизином, орнитином, мочевиной, глюкозой, средой на индол. Инкубируют в течение 4 ч при температуре 35 - 37 °С. Добавляют реактивы на индол, ацетоин, фенилаланиндезаминазу. Учитывают результаты и идентифицируют культуры по таблице идентификации. Идентификацию бактерий из мочи дополняют использованием COLI test. COLI test основан на выявлении β-D-глюкуронидазы по расщеплению 4-метилумбеллиферрил-Д-глюкуронида с высвобождением 4-метилумбеллиферрона, который дает голубую флюоресценцию в УФ лучах. Из исследуемых бактерий готовят суспензию на физиологическом растворе в объеме 1 мл мутностью № 3 по Мак-Фарланду; помещают полоску COLI test в пробирку с суспензией, инкубируют 4 ч при 37 °С, учитывают результат в темной комнате при УФ облучении по появлению голубой флюоресценции суспензии (положительный результат). Затем в пробирку с суспензией добавляют 4 капли реактива на индол (при положительной реакции появится красное кольцо). Положительный тест COLI test имеют около 95 % штаммов Е.coli, положительный тест на индол повышает возможность идентификации Е.coli.
Системы мультимикротестов ММТЕ 1 и ММТЕ 2 (НПО "Аллерген" г. Ставрополь) предназначены для идентификации наиболее распространенных энтеробактерий в течение 18 - 24 ч. Они представляют собой прозрачные полистироловые 96-луночные планшеты, в лунки которых помещены субстратно-индикаторные среды, стабилизированные поливиниловым спиртом и стерилизованные ультрафиолетовым облучением. Система ММТЕ 1 для родовой идентификации позволяет определять 12 тестов: образование индола, сероводорода; наличие лизиндекарбоксилазы, орнитин-декарбоксилазы, уреазы, фенилаланиндезаминазы; ферментацию маннитола, цитрата, малоната, сахарозы, лактозы, сорбитола. ММТЕ 2 дополняет ММТЕ 1 и служит для видовой идентификации по дополнительным 12 тестам: наличие аргининдигидролазы, β-D-галактозидазы, нитратредуктазы; ферментации инозитола, дульцитола, арабинозы, рамнозы, мальтозы, адонита, раффинозы, глюкозы, салицина. В состав набора входят также реактивы для соответствующих тестов. Выделяют чистую культуру на среде Эндо или кровяном агаре. Ставят тест на ферментацию глюкозы (О/Ф тест) на среде Хью-Лейфсона. Из чистой 24 ч культуры грамотрицательных бактерий готовят суспензию мутности № 2 по шкале Мак-Фарланда. Делают контрольный высев суспензии на кровяной агар для проверки чистоты культуры и дополнительных тестов. Вносят по 150 мкл суспензии в каждую лунку систем, добавляют вазелиновое масло в лунки на индол, сероводород, уреазу, лизин, орнитин, аргинин. Инкубируют посевы при 35 - 37 °С в течение 18 - 24 ч. Затем вносят в соответствующие лунки реактивы на индол, фенилаланиндезаминазу, нитриты. Учитывают все тесты, включая О/Ф тест. Идентификацию проводят по таблице идентификации. Разработана компьютерная программа идентификации.
Общим, недостатком всех рассмотренных тест-систем (API 20E, Rapid 20E, Enterotest I и Enterotest 2, Enterotest 16, Entero-Screen, MMTE 1 и ММТЕ 2), является необоснованный перерасход тест-систем, ввиду отсутствия предварительного отбора культур по тесту ферментации глюкозы или позднего учета О/Ф теста с глюкозой (уже после использования тест-систем).
Система ПБДЭ - пластина биохимическая, дифференцирующая энтеробактерии (НПО "Диагностические системы", г. Нижний Новгород) предназначена для биохимической идентификации энтеробактерий в течение 18 - 24 ч, представляет собой полимерную пластину с 20 лунками, содержащими высушенные среды с субстратами для 20 тестов: выявление уреазы, β-D-галактозидазы, лизиндекарбоксилазы, орнитиндекарбоксилазы, аргининдигидролазы; образования сероводорода, индола, ацетоина; ферментацию глюкозы, сахарозы, маннита, малоната, цитрата, цитрата натрия с глюкозой, инозитола, сорбитола, арабинозы, мальтозы. Пластина помещена в полимерный пенал. Исследуемую колонию со среды первичного посева отсевают на скошенный МПА, микроскопируют при окраске по Граму отсевают в пробирки со средой Олькеницкого и полужидким МПА (на подвижность).
Чистую культуру бактерий со скошенного МПА суспензируют в физиологическом растворе и вносят по 100 мкл суспензии во все лунки пластины, добавляют в соответствующие лунки вазелиновое масло. Пластину в пенале инкубируют при 35 - 37 °С в течение 18 - 24 ч. Затем добавляют реактивы в соответствующие лунки и учитывают результаты. Результаты вносят в кодовую карточку. Идентификацию проводят по каталогу кодов.
Тест-система "РАПИД-ЭНТЕРО - 200" (НИИЭМ имени Пастера, отдел новых технологий, г. Санкт-Петербург) предназначена для быстрой 4 ч биохимической идентификации наиболее часто встречающихся в медицинской практике видов энтеробактерий - возбудителей гнойно-септических и острых кишечных инфекций. Тест-система рассчитана на исследование 200 культур бактерий.
Комплект состоит из флаконов с полимерными капельницами, содержащих по 22 мл жидких дифференциальных сред; флаконов с капельницами, содержащих по 22 мл реактивов, и стерильных полистироловых 96-луночных планшетов длямикротитрования однократного применения с крышками. Тест-система обеспечивает постановку 13 тестов: выявление уреазы, триптофандезаминазы, индола, эскулина, лизиндекарбоксилазы, орнитиндекарбоксилазы, нитратредуктазы; ферментации лактозы, сахарозы, маннитола, маннозы, арабинозы, адонитола. Исследованию подлежат чистые культуры, выросшие из отсевов колоний со сред выделения на секторах питательного агара (или питательного агара с желчью). Предварительно определяют их возможную принадлежность к семейству энтеробактерий экспресс- тестом на цитохромоксидазу, тестом "тяжа" на грамотрицательные бактерии, ферментацию глюкозы на среде Клиглера. На среде Клиглера учитывают также газообразование при ферментации углеводов и образование сероводорода. Дальнейшему исследованию подлежат грамотрицательные, оксидазонегативные, ферментирующие глюкозу бактерии. Дифференциальные среды во флаконах готовы к немедленному использованию. Для их применения срезают ножницами с соблюдением стерильности верхний закрытый край полимерной капельницы и закрывают отверстие съемным колпачком капельницы. При исследованиях среда из флакона выдавливается по каплям путем надавливания пальцами на эластичные стенки капельницы. Дифференциальные среды вносят в планшеты по 4 капли (100 мкл) в лунку. Среды для одной культуры размещают в одном горизонтальном ряду из 12 лунок в постоянной последовательности (в одной лунке с маннитом содержится и субстрат на нитратредуктазу).
Количество рядов соответствует количеству культур, плюс один ряд контрольный (без посева). Агаровую культуру изучаемых бактерий вносят по полной стандартной петле в каждую лунку со средой и размешивают. Петлю прожигают только в начале и конце посева на весь ряд. На поверхность сред с мочевиной, лизином и орнитином после посева вносят по 2 капли стерильного вазелинового масла. Закрытые крышками планшеты инкубируют при 37 °С. Предварительный учет результатов на среде с мочевиной проводят через 2 мин. и через 1 ч, на среде с лизином - через 2 ч. Через 4 ч после посева добавляют в лунки реактивы на триптофандезаминазу, индол, нитратредуктазу и окончательно учитывают результаты визуально по изменения окраски сред. Результаты вносят в бланки регистрации. Идентификацию культур проводят по таблице идентификации.
Специфичность (достоверность) идентификации энтеробактерий тест-системой составляет 97,6 ± 0,6 %. Диагностическая чувствительность: идентификация 96 ± 0,5 % изолятов энтеробактерий. Это единственная отечественная тест-система ускоренной идентификации энтеробактерий. Она наиболее экономична, обеспечивает большой объем исследований, проста и надежна в использовании. Стоимость одного исследования существенно дешевле, чем всеми другими тест-системами.
Выпускается также вариант тест-системы "РАПИД-ЭНТЕРО-50" на 50 исследований.
Для идентификации редких видов энтеробактерий, не предусмотренных тест-системами, применяют дополнительные тесты в соответствии с видовой характеристикой энтеробактерий, указанной в определителе бактерий Берджи (см. Приложение).
61. Холерные вибрионыбиологические свойства, биовары. Классификация вибрионов по Хейбергу. Факторы патогенности. Токсины и их характеристика. Патогенез и иммунитет при холере. Роль экосистемного механизма в распространении холеры. Вибрионосительство. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и терапия холеры.
Семейство Vibrionaceae объединяет подвижные, изогнутые палочковидные бактерии, обладающие полярными жгутиками. Эволюционно происходят из водных бактерий, широко распространены в пресной и морской воде, у беспозвоночных и позвоночных хозяев. Патогенные для человека виды относят к родам Vibrio, Aeromonas и Plesiomonas.
Для рода Vibrio характерны короткие прямые или изогнутые грамотрицательные палочки, подвижные, не образующие спор и капсул, хорошо растущие на обычных средах. Они ферментируют углеводы с образованием кислоты без газа, чувствительны к вибриостатику О/129. Можно культивировать при температуре от плюс 18 до 37о С, рН 8,6-9,0.
От других родов семейства представители рода Vibrio дифференцируют по биохимическим тестам. Род насчитывает более 25 видов, из них основное значение имеет Vibrio cholerae- возбудитель холеры, а также V.parahaemolyticum, V.vulnificus.
Морфология. Холерный вибрион имеет один полярный жгутик, часто напоминает запятую (запятая Коха). Важный диагностический признак - подвижность (определяют микроскопией по методу висячей или раздавленной капли). Морфологически изменчивы. Хорошо окрашиваются водным фуксином Пффейфера и карболовым фуксином Циля.
Культуральные свойства. Факультативный анаэроб. Холерный вибрион неприхотлив к питательным средам. Хорошо размножается на 1% щелочной (рН 8,6-9,0) пептонной воде, опережая бактерии кишечной группы (среда обогащения), образует нежную голубоватую пленку и муть. Для подавления роста протея и некоторых других микроорганизмов используют пептонную воду с добавлением теллурита калия.
На плотных средах холерный вибрион образует гладкие стекловидные, прозрачные с голубоватым оттенком дисковидные колонии вязкой консистенции. Используют щелочной агар, желчно - солевой агар, щелочной агар с кровью, наилучшей является TCBS - агар (агар с тиосульфатом, цитратом, солями желчных кислот и сахарозой).
Биохимические свойства. Холерный вибрион сбраживает с образованием кислоты без газа многие углеводы (глюкозу, сахарозу, маннозу, маннит, лактозу, левулезу, гликоген, крахмал). По отношению к трем сахарам (триада Хейберга) - сахарозе, маннозе и арабинозе вибрионы делят на восемь биохимических групп, холерный вибрион относится к первой группе (разлагает сахарозу и маннозу).
Холерный вибрион разлагает желатин, казеин, свертывает молоко и разлагает белковые препараты до индола и аммиака.
Антигенная структура. У холерных вибрионов выделяют термостабильные О- антигены и термолабильные Н- антигены. По структуре О- антигенов выделено 139 серогрупп, биотипы Эль - Тор и классический объединены в 01 группу (типируются 01 - антисывороткой). Изоляты Эль - Тор отличаются гемолитическими свойствами (вызывают гемолиз эритроцитов барана), способностью агглютинировать куриные эритроциты, резистентности к полимиксину, чувствительности к фагам.
О- антиген 01 группы неоднороден и включает общий А- компонент и два типоспецифических - В и С. Соответственно их наличию серовар Огава имеет сочетание АВ, Инаба - АС, Хикоджима - АВС.
Не типируемые основной 01 сывороткой (т.е. не относящиеся к 01 группе) вибрионы называются неагглютинирующими (НАГ) вибрионами- холероподобными или парахолерными. Они имеют общий с холерным вибрионом Н- антиген, но отличаются по О- антигену.
По Н- антигену выделяют группы А и В, холерные вибрионы входят в группу А. Вирионы группы В (биохимически отличающиеся от холерных) имеют неоднородную структуру О- антигена и подразделяются на шесть серологических подгрупп.
Факторы патогенности холерного вибриона.
1. Подвижность (жгутики) и хемотаксис.
2. Ферменты способствуют адгезии и колонизации, взаимодействию с эпителиальными клетками- муциназа (разжижает слизь), нейтаминидаза (взаимодействие с микроворсинками, создание посадочной площадки), лецитиназа и другие.
3. Эндотоксин - термостабильный липополисахарид, схожий по структуре и свойствам с другими эндотоксинами грамотрицательных бактерий.
4. Экзотоксин - холероген - главный фактор патогенности, термолабильный белок. Синтез холерогена - важнейшее, генетически детерминированное свойство холерного вибриона. Молекула холерогена состоит из двух фрагментов А и В. Собственно токсическую функцию выполняет пептид А1 фрагмента А. Молекула холерогена распознает рецептор энтероцита, проникает в мембрану клетки, активирует аденилатциклазную систему, накапливающийся циклический АМФ вызывает гиперсекрецию жидкости, Na+, HCO3-, K+, Cl- из энтероцитов. Это приводит к характерной для холеры диарее, обезвоживанию и обессоливанию организма.
5. У многих вибрионов, в т.ч. не относящихся к 01 группе, имеются различные энтеротоксины.
6. В патогенезе проявлений холеры имеет значение также фактор, повышающий проницаемость капилляров.
Некоторые особенности эпидемиологии. Холера - кишечная инфекция. Основной источник - человек (больной или вибрионоситель), загрязненная вода. Способ заражения - фекально - оральный. Индивидуальная восприимчивость к холере чрезвычайно вариабельна. Характерно большое количество скрытых (стертых) форм, вибрионосительство. Обнаружение возбудителя в воде напрямую связано с наличием больных или бактерионосителей. Холерные вибрионы 01 группы могут длительно находиться в водных экосистемах в виде некультивируемых форм.
Лабораторная диагностика. Холера относится к группе особо опасных инфекций, культивирование ее возбудителя требует соблюдения особого режима биологической безопасности. Основной метод диагностики - бактериологический, включает выделение и идентификацию возбудителя.
Материал для исследования - испражнения и рвотные массы, секционные материалы от погибших, пробы воды и смывы с объектов окружающей среды, пищевые остатки.
Для посева используют жидкие среды обогащения, щелочной МПА, элективные и дифференциально - диагностические среды (лучше TCBS). В качестве транспортной среды наиболее удобна 1% пептонная вода. Подозрительные стекловидные прозрачные колонии пересевают для получения чистой культуры, которую идентифицируют по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам, подвижности, антигенным свойствам, фаготипируют.
Для ускоренной диагностики применяют иммунолюминесцентный метод, биохимическую идентификацию с набором индикаторных дисков, для обнаружения холерных вибрионов в первичных материалах - РНГА с антительным диагностикумом, для выявления некультивируемых форм - ПЦР, для определения вирулентности и синтеза холерогена - биопробы на кроликах - сосунках, ИФА, ДНК- зонды (выявление фрагмента хромосомы, несущего оперон холерогена).
Специфическая профилактика. Имеются различные вакцины - убитая из сероваров Инаба и Огава, анатоксин холерогена, химическая бивалентная вакцина. Вакцины применяют только по эпидпоказаниям (низкая иммуногенность). Может проводиться антибиотикопрофилактика (превентивная терапия) тетрациклином и другими антибиотиками.
V.parahaemolyticus (парагемолитический вибрион) является галофилом, встречается в морской воде (Японского, Черного, Каспийского и других южных морей). При употреблении морских продуктов, не подвергнутых достаточной термической обработке, этот возбудитель вызывает у людей пищевые токсикоинфекции и дизентерия - подобные заболевания. Вызывает гемолиз на кровяном агаре с повышенной концентрацией хлористого натрия (на 7% NaCl - штаммы с энтеропатогенными свойствами).
V.vulnificus - наиболее патогенный вид для человека из нехолерных вибрионов. Выявляют в морской воде и ее обитателях. Вызывает раневые инфекции, септицемии и другие заболевания. Ферментирует сахарозу и лактозу, на TCBS - агаре образует желтые колонии.
и вЊ v.�.�..�> 0�| �х форм сальмонеллезов связано с увеличением количества иммунодефицитных состояний, что имеет особое значение при ВИЧ- инфекции.
Отдельную проблему представляют госпитальные штаммы сальмонелл (чаще отдельные фаговары S.typhimurium), вызывающие вспышки внутрибольничных инфекций преимущественно среди новорожденных и ослабленных детей. Они передаются преимущественно контактно- бытовым путем от больных детей и бактерионосителей, обладают высокой инвазивной активностью, часто вызывая бактеремию и сепсис. Эпидемические штаммы характеризуются множественной лекарственной устойчивостью (R- плазмиды), высокой резистентностью, в том числе к действию высоких температур.
Эпидемиологические особенности. Характерно повсеместное распространение. Основные резервуары сальмонелл - человек (возбудители брюшного тифа и паратифа А) и различные животные (остальные серотипы сальмонелл). Основные возбудители отличаются полипатогенностью. Основные источники заражения - мясные и молочные продукты, яйца, птице- и рыбопродукты. Основные пути передачи - пищевой и водный, реже - контактный. Характерна чрезвычайная множественность резервуаров и возможных источников инфекции. Основное значение имеют сельскохозяйственные животные и птицы.
Лабораторная диагностика. Основной метод - бактериологический. Исходя из патогенеза оптимальными сроками бактериологических исследований при гастроинтестинальных формах являются первые дни, при генерализованных формах - конец второй - начало третьей недели заболевания. При исследовании различных материалов (испражнения, кровь, моча, желчь, рвотные массы, пищевые остатки) наибольшая частота положительных результатов отмечается при исследовании испражнений, для возбудителя брюшного тифа и паратифов - крови (гемокультура).
Исследования проводят по стандартной схеме. Исследуемый материал засевают на плотные дифференциально - диагностические среды - высокоселективные (висмут- сульфит агар, агар с бриллиантовым зеленым), среднеселективные (среда Плоскирева, слабощелочной агар), низкоселективные (агары Эндо и Левина) и в среды обогащения. Для посева крови используют среду Рапопорт. На висмут- сульфит агаре колонии сальмонелл приобретают черный (реже- зеленоватый) цвет.Выросшие колонии пересевают на среды для первичной (среды Ресселя) и биохимической (сероводород, мочевина, глюкоза, лактоза) идентификации. Для предварительной идентификации используют О1- сальмонеллезный фаг, к которому чувствительно до 98% сальмонелл.
Для идентификации культур в РА используют поливалентные и моновалентные О-, Н- и Vi- антисыворотки. Сначала используют поливалентные адсорбированные О- и Н- сыворотки, а затем- соответствующие моновалентные О- и Н- сыворотки. Для идентификации возбудителей брюшного тифа и паратифов используют антитела к антигену О2 (S.paratyphi A), O4 (S.paratyphi B), O9 (S.typhi). Если культура не агглютинируется О- сывороткой, ее нужно исследовать с Vi- сывороткой. Для быстрого выявления сальмонелл используют поливалентные люминесцентные сыворотки.
Серологические исследования проводят для диагностики, а также выявления и дифференциации различных форм носительства. Применяют РА (реакцию Видаля) с О- и Н- диагностикумами и РПГА с применением поливалентных эритроцитарных диагностикумов, содержащих полисахаридные антигены серогрупп А,В,С,Д и Е и Vi- антиген.
Лечение - антибиотики (левомицетин и др.). Часто выявляют резистентные к антибиотикам штаммы. Необходимо определять антибиотикорезистентность выделенных культур.
Специфическая профилактика может применяться преимущественно в отношении брюшного тифа. Применяют химическую сорбированную брюшнотифозную моновакцину. Вакцинацию в настоящее время применяют преимущественно по эпидемическим показаниям.
Биохимические свойства холеры. Биовары холеры. Антигены холеры. Антигенная структура холеры. Схемы Хайберга. Серогруппы холеры.
Холерные вибрионы сбраживают с образованием кислоты многие углеводы (глюкозу, сахарозу, мальтозу, маннит, лактозу, гликоген, крахмал и др.). Ферментация маннозы, сахарозы и арабинозы (так называемая триада Хёйберга) имеет диагностическое значение.
По способности разлагать эти три углевода все вибрионы холеры разделяют на 6 групп. Холерные вибрионы разлагают только маннозу и сахарозу и принадлежат к 1-й группе Хейберга.
Бактерии холеры этой группы обладают плазмокоагулирующим (свёртывают плазму кролика) и фибринолитическим (разжижают свёрнутую сыворотку по Леффлеру) свойствами.
Холерные вибрионы свёртывают молоко и разлагают другие белки и их дериваты до аммиака и индола; H2S не образуют, восстанавливают нитраты и образуют индол (эту способность учитывают в нитрозоиндоловой реакции, также известной как холера-рот реакция).
Бактерии серовара Бенгал устойчивы к полимиксину и не проявляют гемолитической активности.
Таблица 18—4. Дифференциальные признаки возбудителей холеры
Антигены холеры. Антигенная структура холеры. Схемы Хайберга. Серогруппы холеры.
У холерных вибрионов выделяют термостабильные О- и термолабильные Н-Аг.
О-антигены. По структуре О-антигены выделяют 139 серогрупп; возбудители холеры относят к 01 группе. Принадлежность к ней отличает их от ходероподобных и парахолерных вибрионов.
Поэтому, несмотря на возможные биохимические различия, при исследовании на холеру обязательно проводят типирование 01-антисывороткой. О-Аг 01 группы холерных вибрионов неоднороден и включает А, В и С компоненты, разные сочетания которых присущи сероварам Огава (АВ). Инаба (АС) и Хикоджима (ABC).
Эти свойства используют в качестве эпидемиологического маркёра для дифференцирования очагов по возбудителям холеры, хотя иногда от одного больного можно выделить бактерии разных сероваров. R-формы, а также слизистые М-формы (с изменённой структурой О-Аг) не агглютинируются О-антисыворотками, для идентификации OR- и R-диссоциатов используют OR-антисыворотки.
Бактерии серовара холеры 0139 не агглютинируются видоспеиифической О1 и типоспецифическими Огава-, Инаба- и RO-сыворотками.
Поскольку холероподобные вибрионы также не агглютинируются 01-антисывороткой, их обозначают как неагглютинирующиесн (НАГ) вибрионы.
Н-антигены — общие антигены для большой группы бактерий, поэтому их разделяют на А и В группы. В группу А входят холерные вибрионы; в группу В — вибрионы, биохимически отличные от холерных. Вибрионы группы В имеют неоднородную структуру О-Аг, их разделяют на 6 серологических подгрупп, состав которых совпадает с разделением на 6 биохимических групп схемы Хайберга.
Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.
комп
1) исследуемый материал ЭКЗОТОКСИН С. PERFRINGENS
2) диагностические сыворотки с АНТИТОКСИНАМИ против c perfringens, c novyi, c septicum,c histolyticum (гиппериммунизация кроликов анатоксинами)
3) мыши индикатор
для серологической диагностики СИФИЛИСА — опр. противотрепонемных АТ в сыворотке крови
компоненты:
1) испытуемая сыворотка с ИММОБИЛИЗИНАМИ — противотрепонемными АТ
2) АГ — взвесь бледных трепонем (из яичка кролика)
3) комплемент — сыворотка морских свинок в рабочей дозе
КОМПЛЕКС АГ — АТ — КОМПЛЕМЕНТ
активация комплемента
потеря подвижности t. pallidum
ДИАГНОСТИКУМ 1 — специфический трепонемный (взвесь убитых Tr. pallidum)
ДИАГНОСТИКУМ 2 — неспецифичный кардиолипиновый антиген (высокоочищенный экстракт бычьего сердца)
сыворотка испытуемая
комплемент
инд
КОМПОНЕНТЫ ИНДИКАТОРНОЙ СИСТЕМЫ
1) 3% взвесь эритроцитов барана корпускулярный АГ — агглютиноген
2)гемолитическая сыворотка (иммунизация кроликов 50% взвесью эритроцитов барана. полученную инакт)
основной опыт + 2 контроля с отриц сыв и положит сывор
сифилис 1: серонегативный
чз 2-3 нед после твердого шанкра +
КОЛЬПРЕЦИПИТАЦИЯ:
ОПЫТ: в преципитирующую сыворотку (узкая преципитационная пробирка) насловить поеципитиноген
+ кольцо преципитации
значит есть АГ сибиреязвенной бациллы
Читайте также: