Посев кишечной палочки на среду клиглера
Обновлено: 05.10.2024
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Методы выделения и идентификации
энтерогеморрагической кишечной палочки E. coli O157:Н7
Дата введения 2001-02-04
1. РАЗРАБОТАНЫ Федеральным центром госсанэпиднадзора Минздрава России (Л.Г.Подунова, Н.С.Кривопалова, Р.С.Сорокина), Центром госсанэпиднадзора в Тульской области (Л.И.Шишкина, Т.А.Попова, А.Я.Сыпченко, Н.М.Корнеева), Государственным научным центром прикладной микробиологии (М.В.Храмов).
2. УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 4 ноября 2000 г.
3. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.
1. Область применения
1. Настоящие методические указания предназначены для бактериологических лабораторий центров государственного санитарно-эпидемиологического надзора, других учреждений системы здравоохранения Российской Федерации, осуществляющих бактериологическую диагностику острых кишечных инфекций с гемоколитом и развитием гемолитико-уремического синдрома, а также обследование контактных в очагах заболевания и контроль за качеством продовольственного сырья и пищевых продуктов.
2. Методические указания определяют методы обнаружения, выделения и идентификации энтерогеморрагической кишечной палочки Е. coli О157:Н7 и разработаны в связи с отсутствием в настоящее время нормативных документов по данному разделу бактериологических исследований.
3. Методические указания являются обязательными при контроле продуктов детского питания, молочных и мясных продуктов в ходе проведения противоэпидемических мероприятий при возникновении вспышек, а также осуществления санитарно-эпидемиологического надзора.
4. Настоящие методические указания созданы с целью унификации и дальнейшего совершенствования бактериологических методов выделения и идентификации энтерогеморрагической кишечной палочки Е. coli О157:Н7 в связи с регистрацией данной патологии на территории Российской Федерации, а также роста заболеваемости вспышечного характера и спорадической за рубежом.
2. Сущность метода
Методические указания содержат описание микробиологического исследования с целью выделения и идентификации энтерогеморрагической кишечной палочки Е. coli О157:Н7 из биоматериала от больных неосложненными диареями, острыми кишечными инфекциями с гемоколитом и развитием гемолитико-уремического синдрома, от контактных в очаге, а также пищевых продуктов, сырья.
Предлагаемый дифференциально-диагностический метод основан на использовании некоторых особенностей биохимических свойств данного микроорганизма: отсутствии фермента -D-глюкуронидазы и способности ферментировать сорбитол, а также на наличии у Е. coli О157:Н7 такого "маркера", как продукция веротоксинов (VT1, VT2).
Для осуществления возможности практического использования данной методики в течение короткого периода времени разработана отечественная питательная среда "Сорбитол Е. coli О157:Н7 агар" (ФС 42-0027-00) для выделения Е. coli О157:Н7 из клинического материала, объектов окружающей среды (разработчик - Государственный научный центр прикладной микробиологии, отделение "Питательные среды", г.Оболенск Серпуховского района Московской области), а также созданы диагностические сыворотки для реакции агглютинации и методика определения веротоксинов в клиническом материале.
Огромный интерес, проявляемый к острым кишечным инфекциям с гемолитико-уремическим синдромом (ГУС) со стороны научных центров и практического здравоохранения за рубежом и в нашей стране, закономерен.
Количество регистрируемых заболеваний острыми кишечными инфекциями с гемолитико-уремическим синдромом, как вспышечного характера, так и спорадических, ежегодно возрастает (США, Канада, Финляндия, Япония, Европа).
Этиологическим фактором этих заболеваний являются энтерогеморрагические кишечные палочки, продуцирующие веротоксины (шигаподобные токсины). Они представлены довольно большим разнообразием серологических вариантов, из которых Е. coil О157:Н7 имеет наибольшее эпидемиологическое значение в качестве причин неосложненных диарей и кровавого поноса с последующим развитием ГУС.
К настоящему времени биология эшерихии Е. соli О157:Н7, эпидемиология, патогенез и диагностика связанных с ней заболеваний достаточно изучены.
Первые сведения о выделении Е. coli О157:Н7 и регистрация данной патологии в нашей стране имели место в Тульской области, где диагностика острых кишечных инфекций с гемолитико-уремическим синдромом начата с конца 1996 года.
Результаты выделения Е. coli О157:Н7 из клинического материала от детей, больных ОКИ, сырья, пищевых продуктов (сырого мяса, молока) получены в 1997-99 гг.: установление этиологического фактора (Е. coli О157:Н7) случаев острых кишечных инфекций, осложненных гемолитико-уремическим синдромом, составило в Тульской области 43%, высеваемость Е. coli О157:Н7 из пищевых продуктов и сырья 1,96%; высеваемость культур от животноводов и доярок ферм - 9%.
Наибольшему риску подвержены дети до 5 лет и пожилые люди.
Естественным резервуаром бактерий Е. coli О157:Н7, патогенных для человека, служит крупный рогатый скот, овцы. Наиболее частый путь распространения этой инфекции - пищевой. Основным фактором передачи является сырая говядина, особенно мясной фарш, мясные полуфабрикаты, прошедшие недостаточную термическую обработку, сырое молоко. Отмечены случаи передачи возбудителя через воду.
3. Нормативные ссылки
3.18. МУ 04-723/3 от 17.12.84 г. Методические указания по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями.
3.19. Инструкция к применению "Набора реагентов для выявления веротоксина у эшерихий" (фирма "Seiken", Япония).
4. Методы забора, доставки проб клинического материала от больных и контактных
Важным условием выделения эшерихий Е. coli О157:Н7 из клинического материала является отбор и доставка его в лабораторию в возможно ранние сроки: оптимальными сроками являются 1-3 день от момента заболевания.
У больных интенсивность выделения возбудителя снижается, достигая 50% и более низкого уровня через 5-8 дней от начала заболевания. Гемолитико-уремический синдром обычно развивается спустя, как минимум, одну неделю после первых признаков диареи, и вероятность обнаружения возбудителя к этому времени существенно уменьшается.
Материалом для бактериологического исследования служат в первую очередь испражнения, моча.
Испражнения собирают в консервант, в качестве которого можно использовать фосфатно-буферную или глицериновую смеси. В случае доставки материала в течение 2 часов с момента забора нативные испражнения отбирают в стерильные флаконы.
При обследовании контактных лиц с целью выявления бактерионосителей возможно взятие материала ректальными тампонами, проволочными петлями.
Мочу после туалета наружных половых органов собирают в стерильную посуду. Перед посевом мочу центрифугируют и засевают осадок. В случае небольшого количества осадка засевают нативную мочу в среду обогащения двойной концентрации в равных объемах (приложение 1).
5. Методы подготовки пищевых продуктов
для бактериологического исследования
и схемы посева на питательные среды
Методы отбора проб, хранение и подготовка их к анализу регламентированы в действующих нормативных документах на конкретный вид продукта (раздел 3 "Нормативные ссылки").
Проведение испытаний различных пищевых продуктов устанавливает единый метод выявления в определенной навеске пищевого продукта колиформных бактерий в соответствии с ГОСТ Р 50474-93 "Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)". По классификации кишечных палочек Е. coli 0157:Н7 относится к энтерогеморрагическим, энтеропатогенным кишечным палочкам, поэтому выявление ее как патогена необходимо проводить в 25 г продукта. Возможно выявление Е. coli О157:Н7 в других объемах, регламентированных нормативной документацией на конкретный вид продукта, а также СанПиН 2.3.2.560-96 "Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов" (приложения 2, 3).
6. Проведение анализа
Принципы бактериологического исследования с целью выделения Е. coli О157:Н7 не отличаются от общепринятых для возбудителей острых кишечных инфекций и включают методы классического бактериологического исследования, основанные на выделении чистой культуры микроорганизма и последующей его идентификации по культурально-морфологическим, биохимическим, антигенным свойствам. Основным критерием отнесения штамма к группе энтерогеморрагических эшерихий являются данные, подтверждающие продукцию веротоксинов. Штаммы, не продуцирующие токсинов, не могут считаться возбудителями эшерихиозов у людей.
6.1. Посев клинического материала с целью выделения Е. coli О157:Н7 проводится на питательную среду Сорбитол Е. coli О157:Н7 агар (прямой посев) и в соотношении 1:5 в среды накопления, которыми могут служить бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью (ГОСТ Р 50474-93), GN Enrichment Broth асс. to HAJNA (Cat. N 10756, фирма "MERCK", Германия). При отсутствии нативного материала испражнения, забранные в консервант, засевают в среду обогащения двойной концентрации (приложение 1).
6.2. Посев пищевых продуктов для выявления БГКП (колиформных бактерий) в определенной навеске продукта проводится в соответствии с ГОСТ Р 50474-93. Дополнительной питательной средой для выявления Е. coli О157:Н7 является Сорбитол E. coli О157:Н7 агар (приложение 2), потому что плотная питательная среда, используемая для выделения колиформных бактерий (Эндо), не может быть использована для целенаправленного поиска E. coli О151:Н7, т.к. данный микроорганизм разлагает лактозу подобно другим эшерихиям.
Отличительным биохимическим свойством Е. coli О157:Н7 является отсутствие способности ферментировать сорбитол. Для выделения штаммов Е. coli О157:Н7 необходимо использовать Сорбитол Е. coli О157:Н7 агар или среды зарубежного производства: Fluorocult Е. coli О157:Н7 Agar (Cat. N 1.04036); Sorbitol MacConkey Agar (SMAC-agar) Cat. N 1.09207; Fluorocult HC Agar acс. to SZABO Cat. N 1.09206 (фирма "MERCK", Германия).
Характеристика роста Е. coli О157:Н7 на плотных питательных средах представлена в табл.1.
Характеристика роста Е. coli О157:Н7 на плотных питательных средах
Посев кала на патогенные эшерихии – метод микробиологической диагностики инфекций желудочно-кишечного тракта, вызываемых патогенными штаммами кишечной палочки.
Синонимы русские
Посев на энтеропатогенную кишечную палочку.
Синонимы английские
Escherichia coli Detection in Stool Samples, Shiga toxin-producing Escherichia coli.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Кал, ректальный мазок.
Метод исследования
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
- Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.
Общая информация об исследовании
Кишечные палочки - Escherichia coli - условно-патогенные микроорганизмы, обитающие в том числе в кишечнике человека. Большинство штаммов этой бактерии являются безвредными. Вирулентные кишечные палочки попадают в желудочно-кишечный тракт извне, как и возбудители других кишечных инфекций. Способность отдельных штаммов Е. coli вызывать заболевание связана с их способностью вырабатывать токсины, прикрепляться к стенке кишечника и внедряться в нее. Выделяют пять типов патогенных кишечных палочек, приводящих к развитию острых кишечных инфекций: энтеротоксигенные, энтеропатогенные, энтероинвазивные, энтерогеморрагические, энтероадгезивные.
Токсины энтеротоксигенных кишечных палочек способствуют избыточному выделению в просвет кишки воды и электролитов, развитию диареи и нарушений водно-электролитного баланса. Энтероинвазивные кишечные палочки внедряются в клетки слизистой оболочки толстой кишки, вызывают развитие в ней воспаления и образование эрозий. Энтерогеморрагические Е. coli вырабатывают шигаподобный токсин (токсин похожего действия продуцирует возбудитель дизентерии Shigella dysenteriae), который разрушает стенки мелких сосудов кишечной стенки, что приводит к появлению в кале крови и развитию ишемии и некроза стенки толстого кишечника. Энтероадгезивные кишечные палочки способны прочно прикрепляться к стенке кишечника и приводить к развитию длительной, но сравнительно легко протекающей кишечной инфекции.
Основным методом диагностики эшерихиозов является бактериологическое исследование. Биоматериал используют для посева на специальные питательные среды, и при отсутствии роста колоний микроорганизмов констатируется отрицательный результат посева.
Для чего используется исследование?
- Для верификации возбудителя острой кишечной инфекции.
Когда назначается исследование?
При развитии клинических проявлений острой кишечной инфекции (тошнота, рвота, схваткообразные боли в животе, частый, жидкий (водянистый), обильный стул, иногда с примесью слизи и крови);
при контакте пациента с лицом, у которого подтвержден диагноз "эшерихиоз".
Что означают результаты?
В норме патогенные эшерихии отсутствуют.
Отрицательный результат - нет роста - отсутствие роста микроорганизмов.
Положительный результат - есть рост - рост патогенного штамма Escherichia coli.
При обнаружении микроорганизма указывается серотип (ЭПЭ О 32) и чувствительность к а/б.
Важные замечания
- Интерпретация результатов данного исследования должна производиться исключительно специалистом в области медицины. При выявлении патогенных штаммов кишечной палочки необходимо обязательно проконсультироваться с врачом для решения вопроса о назначении лечения, в том числе при отсутствии выраженных симптомов заболевания.
- В отдельных рекомендациях признается целесообразным исследование как минимум трех образцов фекалий, собранных в разные дни, для верификации отрицательного результата у пациента с клиникой бактериальной кишечной инфекции.
Также рекомендуется
Посев кала на патогенную флору (диз. группа и тифопаратифозная группа) с определением чувствительности к антибиотикам
Посев кала на условно-патогенную флору с определением чувствительности к антибиотикам
Определение токсинов A и B Clostridium difficile
Анализ кала на яйца и личинки гельминтов, простейшие и их цисты (Parasep)
Кальпротектин в кале
Кто назначает исследование?
Инфекционист, педиатр, терапевт, врач общей практики, эпидемиолог, гастроэнтеролог.
Эшерихии. Эшерихиозы. Свойства эшерихий. Кишечная палочка. Escherichia coli. Морфология кишечной палочки. Культуральные свойства кишечной палочки.
Своё название бактерии получили в честь немецкого педиатра Т. Эшериха, впервые выделившего Escherichia coli из содержимого кишечника детей. Род образуют подвижные (перитрихи) прямые палочковидные бактерии размером 1,1-1,5x2,0-6,0 мкм. В мазках они располагаются одиночно или парами. У большинства штаммов существуют капсулы или микрокапсулы.
Температурный оптимум для роста эшерихий 37 °С. Эшерихии ферментируют углеводы с образованием кислоты или кислоты и газа, оксидаза-отрицательны и каталаза-положительны.
Эшерихии входят в состав микрофлоры толстой кишки теплокровных, пресмыкающихся, рыб и насекомых. Эшерихии — основная аэробная микрофлора кишечника, вызывающая, однако, обширную группу заболеваний человека, известных как эшерихиозы.
Эшерихиозы характеризуются не только клиническим полиморфизмом, но и создают особую эпидемиологическую ситуацию. Основное медицинское значение имеет кишечная палочка (Escherichia coli). Кишечные палочки рассматривают как санитарно-показательные микроорганизмы (СПМ) при анализе воды и пищевых продуктов.
Кишечная палочка. Escherichia coli
В настоящее время среди прочих энтеробактерии кишечная палочка — основной возбудитель эшерихиозов у человека.
Морфология кишечной палочки. Культуральные свойства кишечной палочки
Кишечная палочка имеют типичную для энтеробактерий форму и представлены короткими подвижными палочками с закруглёнными концами.
• На плотных средах бактерии образуют плоские выпуклые мутные S-колонии с ровными или слегка волнистыми краями (3-5 мм в диаметре) либо сухие плоские R-колонии с неровными краями.
• В жидких средах растут диффузно, вызывая помутнение среды и образование осадка (реже формируют поверхностную плёнку или пристеночное кольцо).
• На средах Хисса кишечная палочка может образовывать газ. На селективно-дифференциальных средах колонии принимают цвет, соответствующий окраске среды. На агаре Эндо лактоза-положительные эшерихии образуют фукс и ново-красные колонии с металлическим блеском, лактоза-отрицательные — бледно-розовые или бесцветные с тёмным центром. На среде Левина бактерии формируют тёмно-синие колонии с металлическим блеском, а лактоза-отрицательные — бесцветные, на среде Плоскирева — соответственно красные с жёлтым оттенком или бесцветные. На КА могут давать полный гемолиз.
Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.
Диагностика этиологии геморрагического колита и гемолитического уремического синдрома.
Escherichia coli (или просто E.coli) - грамотрицательные палочковидные бактерии. Названы в честь открывшего их в 1885 г. T. Escherich. Обычный обитатель кишечника. В организме человека E.coli выполняет полезную роль, подавляя рост вредных бактерий и синтезируя некоторые витамины. Но эти бактерии могут вызывать у человека острые кишечные заболевания эшерихиозы с фекально-оральным механизмом заражения.
E. Coli O157:H7 вырабатывает шига-токсин. Инкубационный период длится от 3 до 6 дней. В наибольшей степени восприимчивы к заболеванию дети раннего возраста, пожилые и ослабленные люди.
У детей эшерихиоз протекает в виде различной тяжести энтеритов, энтероколитов в сочетании с синдромом общей интоксикации и острой почечной недостаточностью. При средних и тяжёлых формах сопровождается повышением температуры, поносом, сепсисом.
У взрослых заболевание, вызванное эшерихией, напоминает по течению и клиническим симптомам острую дизентерию. Нередко развивается тромбоцитопеническая пурпура.
Выделяемые возбудители: E. Coli O157:H7.
Обращаем внимание на необходимость предварительного приобретения стерильной пробирки с питательной средой, используемой при взятии биоматериала, в любом медицинском офисе ИНВИТРО.
Исследование проводится до начала лечения антибиотиками. Кал должен быть свежесобранным. Наиболее ценными являются участки кала с примесью слизи и крови.
Читайте также: