Посев материала с подозрением на аспергиллез проводится на среду

Обновлено: 05.10.2024

Культуральные методы диагностики для постановки диагноза аспергиллез птиц используются в комплексе с: данными рентгенографических исследований, эндоскопии, цитологических и гистологических данных, анализов крови.

Для этого исследуют мазки из зоба, клоаки, посевы суспензированного помета, посевы с полученного при эндоскопии материала.

Культуральный метод — стадия бактериологических исследований. Для выявления и определения возбудителя инфекционного заболевания проводят посев материала от больной птицы на питательные среды. После выделения культуры (чистых образцов микроорганизмов) проводят дальнейшее лабораторное изучение свойств и определение возбудителя.

Что значит положительный результат бактериологического анализа помета (грибки выделены)

1. Птица больна: обнаруженные плесневые грибки выделяются из дыхательных путей птицы: легких, бронхов и воздушных мешков.
2. Птица живет в неблагоприятных условиях, в которых повышена концентрация спор грибков.

Положительный ответ лаборатории, проводившей анализ помета попугая суринамского амазона в Киеве.

Анализ выполнялся двумя методами: микроскопическим (образец рассматривается под микроскопом) и бактериологическим (производится посев на специальные микробиологические среды для выделения грибков). Дублирование исследования двумя разными методами значительно повышает шансы на обнаружение грибков в помете птиц.

Что значит отрицательный результат бактериологического анализа помета (грибки не выделены)

Бланк ответа лаборатории, выполнявшей бактериологический анализ помета попугая в Москве. В ответе указано: в исследуемом материале патогенных грибов не обнаружено.

Системные микозы у птиц могут вызываться не только грибками рода Aspergillus, но и грибками рода Mucor и другими грибками. Поэтому нельзя списывать на контаминацию материала выделение родов и видов грибков отличных от Aspergillus niger/flavus/fumigatus. Повторное выделение одного и того же вида грибков из исследуемого материала, полученного от птицы, может говорить о системном микозе, а не о случайном транзите грибковых спор через пишеварительный тракт птицы.

Откуда в исследуемых образцах могут появиться случайные споры грибков?

1. Контаминация спорами из окружающего воздуха. Споры грибков всегда находятся в воздухе вокруг нас.

Какие меры необходимо предпринимать для исключения этого фактора:

а. Пользоваться стерильными зондами и транспортными средами. Чем меньше время экспозиции зонда на воздухе, тем меньше вероятность обсеменения спорами грибков.

Предварительно, перед тем как стелить целлофановую пленку под жердочки, надо убраться в клетке, убрать в другое помещение корма. Но, если само помещение содержит большое количество спор грибков, то контаминация спорами из воздуха очень вероятна.

2. Контаминация спорами грибков, находящимися на зерне или на фруктах и овощах. 99% спор грибков в пищеварительном тракте птицы разрушается.

Контаминация — смешение, соединение, загрязнение. В лабораторной терминологии — попадание посторонних организмов в исследуемый материал с дальшейним влиянием на результат исследования.

На практике, чтобы в образец помета, пролежавшего на воздухе 15-20 минут, попало большое количество спор плесневых грибков, нужно чтобы их концентрация в воздухе была очень высокой. При таких концентрациях спор в воздухе помещения вероятность заражения птицы аспергиллезом очень велика. Поясню: если птица живет в помещении с очень высокой концентрацией спор грибков — она заболеет системным микозом с очень большой долей вероятности. Если из помета выделены споры грибков, то это говорит либо о том, что птица больна аспергиллезом, либо о том, что она живет в неблагоприятных условиях и может скоро заболеть.

Напомню! Плесень очень хорошо развивается под полами, под декоративными стеными панелями, между навесным потолком и основным потолочным перекрытием.

Является ли результат бактериологического анализа решающим для постановки диагноза аспергиллез птиц?

В силу своей неоднознаности, однократное выделение плесневых грибков из помета птицы не является основанием для постановки диагноза. Но если плесневые грибки выделяются из помета птицы в серии анализов и другие анализы также косвенно указывают на наличие системной грибковой инфекции — то культуральный метод служит дополнительным подтверждением наличия аспергиллеза у птицы.

Что лучше сдавать для анализа — мазки из зоба и клоаки или помет птицы?

Лучший вариант — посевы на питательные среды незамедлительно сразу после того, как мазок сделан или появился помет. В большинстве случаев посев нативных мазков от птицы — невозможен, поэтому мазок помещается в транспортную среду — контейнер, наполненный гелеобразной питательной средой, поддерживающей жизнедеятельность бактерий и грибков, но не их размножение. Обычно транспортные среды рассчитаны на хранение материала 24 или 48 часов, хотя есть и пролонгированные среды со сроком хранения до 96 часов. Транспортная среда механически разбавляет концентрацию возбудетелей в мазке и поэтому при посеве результат может быть ложноотрицательным. Также результат может быть ложноотрицательным и при превышении сроков хранения материала или при хранении патматериала при слишком высокой или слишком низкой температуре.

Поэтому предпочтительно сдавать свежий помет птицы. Кроме того, надо учитывать такой фактор: в помете всегда большее количество возбудителей, чем в мазке, и, соответвенно, большая вероятность их обнаружения.

Нет таких возбудителей болезней птиц, которые бы выделялись из клоаки и, при этом, не выделялись бы из помета.

Кроме того, это устраняет стресс и возможность травмирования птицы при процедуре взятия мазков. Многие владельцы птиц сталкивались с травмами клоаки их птиц или с перекусыванием птицами зонда во время взятия анализа.

Везти в лабораторию помет птицы нужно не нагревая его выше 36С и не замораживая.

Aspergillus spp. – это повсеместно встречающиеся плесневые грибы, которые в некоторых случаях приводят к развитию серьезных заболеваний человека. Чаще всего встречается легочный аспергиллез, однако также могут поражаться и другие органы (головной мозг, синусы, клапаны сердца). Как правило, предпосылкой для возникновения аспергиллеза является значимое нарушение иммунного ответа, которое может наблюдаться при злокачественных заболеваниях крови (лейкозы), после пересадки органов и тканей и при СПИДе. Диагностика аспергиллеза представляет собой трудную задачу и в большинстве случаев носит комплексный характер, при этом лабораторный методы играют ведущую роль. В настоящее время "золотым стандартом" диагностики аспергиллеза является посев на питательную среду (бактериологический, культуральный метод).

Расходный материал: тупфер без среды.
Хранение: при комнатной температуре.
Транспортировка: при комнатной температуре не более 5 часов.

Общие показания:

При наличии у пациента факторов риска инвазивной грибковой инфекции: онкогематологических заболеваний, лекарственной иммуносупресии, ВИЧ-инфекции;
При наличии клинических или рентгенологических признаков аспергиллеза и других инвазивных грибковых инфекций.

Референсные значения:

В результате указывается:

1. наличие или отсутствие роста возбудителя;

2. количество бактерий, выраженное в КОЕ/мл;

3. наименование возбудителя;

4. чувствительность к антимикробным препаратам (определяется при титре более 10*4 кое/мл).

Взятие биоматериала из зева:

Взятие материала осуществляется утром, натощак. Перед манипуляцией не следует есть, пить, чистить зубы, полоскать рот, курить и т.п. За 10-14 дней необходимо исключить применение растворов, спреев для горла, содержащих противомикробные средства или антибиотики. Взятие материала у детей на грудном вскармливании проводится перед кормлением.

Взятие биоматериала из носа:

За 10-14 дней необходимо исключить применение растворов, спреев, мазей для носа, содержащих противомикробные средства или антибиотики.

Взятие биоматериала из ушей:

Не рекомендуется мыть и чистить уши ватными палочками. За 10-14 дней рекомендовано не использовать ушные капли, содержащие противомикробные средства или антибиотики.

Сбор мокроты:

Сбор мокроты осуществляют утром до приема пищи.

-Перед сбором необходимо почистить зубы и прополоскать рот кипяченой водой.

-Через 30 минут после чистки зубов мокрота собирается в стерильный контейнер.

-Во время сбора необходимо исключить попадание в контейнер слюны и носоглоточной слизи.

-Контейнер с мокротой необходимо доставить в лабораторию в течение 2 ч.

Это бактериоскопическое исследование того или иного биоматериала – это могут быть мазки различных локализаций,– выделение и идентификация до вида этиологически значимого возбудителя. Aspergillus spp. – это повсеместно встречающиеся плесневые грибы, которые в некоторых случаях приводят к развитию серьезных заболеваний человека. Чаще всего встречается легочный аспергиллез, однако также могут поражаться и другие органы (головной мозг, синусы, клапаны сердца). Как правило, предпосылкой для возникновения аспергиллеза является значимое нарушение иммунного ответа.Диагностика аспергиллеза представляет собой трудную задачу и в большинстве случаев носит комплексный характер. В настоящее время "золотым стандартом" диагностики аспергиллеза является посев на питательную среду.

Аспергиллез – грибковое заболевание (микоз), вызываемое плесневыми грибками рода аспергилл, проявляющееся преимущественным поражением дыхательной системы. Аспергиллез легких – наиболее часто встречающаяся форма микоза органов дыхания.

Аспергиллы находятся повсюду: на земле, в воздухе и воде. Инфицирование происходит при попадании в дыхательные пути спор грибка вместе с вдыхаемым воздухом. Источниками аспергилл могут быть душевые кабины, вентиляция, сплит-системы, приборы для увлажнения воздуха, ингаляций, книги, подушки, земля в комнатных растениях, пищевые продукты, сено, трава.

Содержание аспергилл в помещении выше, чем на открытом воздухе. Максимальное количество спор плесневых грибков обнаруживается в воздухе с июня по октябрь. Обострение заболевания чаще происходит в дождливое время. Наиболее подвержены болезни мельники, сельскохозяйственные работники, сотрудники библиотек, архивов, а также любители голубей, занимающиеся их разведением. Эти безобидные птицы могут стать источником заражения людей. Между людьми болезнь не передается. Более уязвимы в плане заражения пациенты, страдающие сахарным диабетом, бронхиальной астмой, онкологическими заболеваниями, иммунодефицитами, ослабленные, истощенные больные.

Аспергиллез у человека характеризуется поражением дыхательной системы. Основные органы мишени – легкие, бронхи и носовые пазухи.

Избежать плесневых грибков практически невозможно – они подстерегают человека повсюду. На улице аспергиллы можно найти в мокрых опавших листьях, компосте, влажных сараях, заброшенных домах, пещерах. В доме споры аспергилл могут находиться в системах вентиляции и кондиционирования, под теплоизоляцией, в сырых ванных комнатах, и даже в некоторых пищевых продуктах. Ежедневное воздействие аспергилл редко представляет угрозу для человека с нормальной иммунной системой. Когда мы вдыхаем многочисленные споры, иммунная система просто уничтожает их. Но люди с нарушенным иммунитетом, страдающие СПИД или лейкемией, получающие лечение иммуносупрессорами, легко могут заболеть. Сначала аспергиллы, как правило, наводняют легкие, а в тяжелых случаях попадают в кровь и разносятся по всему организму. Аспергиллез не передается от человека к человеку.

Аспергиллез - оппортунистическая инфекция, которая обычно поражает нижние дыхательные пути и вызвана вдыханием спор нитевидного гриба Aspergillus, которые, как правило, присутствуют в окружающей среде. Споры проростают и формируют гифы, которые попадают в кровеносные сосуды, при инвазивном заболевании вызывают геморрагический некроз и инфаркт. Симптоматика может напоминать астму, пневмонию, синусит или быстро прогрессирующее системное заболевание. Диагноз ставится прежде всего клинически, но может быть подтвержден томографией, гистопатологией с окрашиванием образцов и тест-культурой. Лечение – вориконазол, амфотерицин B (или его липидные лекарственные формы), каспофунгин или итраконазол. Аспергилломы могут потребовать хирургической резекции.

Патофизиология аспергиллеза

Инвазивные инфекции обычно приобретаются при вдыхании спор или иногда прямым внедрением через поврежденную кожу.

К основным факторам риска аспергиллеза относятся:

Продолжительная нейтропения (обычно >7 дней)

Долгосрочная терапия кортикостероидами в больших дозах

Трансплантация органа (особенно пересадка костного мозга с реакцией "трансплантат против хозяина" [ТПХ])

Наследственные заболевания, связанные с функцией нейтрофила (например, хроническое гранулематозное заболевание)

Грибы рода Aspergillus склонны поражать открытые места, такие как полости в легких, что вызвано предыдущими заболеваниями легких (например, расширение бронхов Бронхоэктазы Бронхоэктазы представляют собой расширение и деструкцию крупных бронхов, вызванные хронической инфекцией и воспалением. Частые причины – муковисцидоз, иммунные нарушения и рецидивирующие инфекции. Прочитайте дополнительные сведения , опухоль, туберкулез Туберкулез (ТБ) Туберкулез (ТБ) является хронической прогрессирующей микобактериальной инфекцией, часто имеющей латентный период после начального инфицирования. Чаще всего ТБ поражает легкие. Симптомы включают. Прочитайте дополнительные сведения ), пазухи или наружные слуховые проходы (отомикоз Наружный отит (острый) Наружный отит – это острая инфекция кожи слухового прохода, обычно вызываемая бактериями (наиболее часто это Pseudomonas). Симптомы наружного отита: боль, отделяемое, потеря слуха при выраженном. Прочитайте дополнительные сведения ). Такие инфекции склонны быть локально инвазивными и вызывать деструкцию, хотя иногда происходит системное распространение, особенно у пациентов с ослабленным иммунитетом и нейтропенией или иммуносупрессией на фоне приема кортикостроидов. Тем не менее, аспергиллез является редким среди пациентов с ВИЧ-инфекцией.

A. fumigatus является наиболее распространенной причиной инвазивной легочной болезни; A. flavus чаще всего вызывает инвазивную внелегочную инфекцию, вероятно, потому что имеет тенденцию происходить у пациентов с более ослабленным иммунитетом, чем у пациентов, зараженных A. fumigatus.

В результате очаговой инфекции, что обычно развивается в легких, иногда формируется аспергиллома, присутствует характерный рост запутанных масс гифов, с эксудатом фибрина и небольшим количеством клеток воспаления, как правило, заключенный в капсулу из волокнистой ткани. Иногда есть локальная инвазия в ткань на периферии полости, но обычно грибы только проживают в пределах полости без заметного локального внедрения.

Первичный поверхностный аспергиллез нехарактерен, но может развиться при ожогах; под герметичной повязкой; после травмы роговицы (кератит); или в носовых пазухах, ротовой полости, носу или наружном слуховом проходе.

Аллергический бронхолегочный аспергиллез Аллергический бронхолегочный аспергиллез (АБЛ) Аллергический бронхолегочный аспергиллез (АБЛА) – это реакция гиперчувствительности к видам Aspergillus (обычнo A. fumigatus), который встречается главным образом у пациентов с бронхиальной. Прочитайте дополнительные сведения – это реакция гиперчувствительности на A. fumigatus, которая приводит к воспалению легких, не связанному с грибковой инвазией тканей.

Симптомы и признаки аспергиллеза

Острый инвазивный легочный аспергиллез обычно вызывает кашель, часто с кровохарканьем, плевритической болью в грудной клетке и одышкой. Без лечения инвазивный легочной аспергиллез может привести к быстро прогрессирующей и в конечном счете смертельной дыхательной недостаточности.

Хронический легочной аспергиллез может проявляться умеренными, вялотекущими симптомами, несмотря на выраженное заболевание.

Внелегочный инвазивный аспергиллез возникает у пациентов с тяжелым иммунодефицитом. Он начинается с поражения кожи, синусита или пневмонии и может вовлекать печень, почки, головной мозг и другие ткани через распространения гематогенуза; часто приводит к скорой смерти.

Аспергиллез в носовых пазухах может сформировать аспергиллому или вызвать аллергический грибковый синусит или хроническое, медленное инвазивное гранулематозное воспаление с лихорадкой, ринитом и головной болью. У пациентов могут быть некрозы кожи над носом или пазухами, изъязвления нёба и десен, симптомы пещеристого тромбоза пазухи или легочные или диссеминированные поражения.

Аспергиллезные мицетомы протекают бессимптомно, однако могут вызвать мягкий кашель, а иногда и кровохарканье.

Диагностика аспергиллеза

Обычно грибковая культура и гистопатология образцов ткани

Определение антигена галактоманнана в образцах сыворотки и бронхоальвеолярного лаважа

Поскольку виды Aspergillus распространены в окружающей среде, положительные культуры мокроты могут быть связаны с загрязнением или с неинвазивной колонизацией у пациентов с хроническим заболеванием легких; положительные культуры являются существенными показателями главным образом тогда, когда мокрота получена у пациентов с увеличенной восприимчивостью из-за иммуносупрессии или нейтропении, или есть сильное подозрение из-за типичных результатов томографии. Наоборот, культуры мокроты пациентов с аспергилломами или инвазивным легочным аспергиллезом часто отрицательны.

Проводится рентгенографическое обследование грудной клетки; однако КТ грудной клетки – гораздо более чувствительный метод и должна назначаться пациентам с высоким риском (т.е., с нейтропенией). КТ носовых пазух, если есть подозрение на синусит. Подвижный грибок в пределах полостного поражения характерен для обоих, хотя большинство поражений очаговые и твердые. Иногда томография выявляет симптом нимба (туманная тень, окружающая узелок) или образование каверн в пределах некротического поражения. У некоторых пациентов отмечаются диффузные генерализованные легочные инфильтраты.

Для подтверждения диагноза требуются, как правило, посев и гистопатология образца ткани; гистопатология помогает отличить инвазивную инфекцию от колонизации. Образец, как правило, отбирается из легких во время бронхоскопии или чрескожной биопсии и из пазух при передней риноскопии. Поскольку тест-культуры занимают время, и результаты гистологического исследования могут быть ложно-отрицательными, большинство решений по лечению основываются на весомых клинических доказательствах. Гемокультуры почти всегда отрицательны, даже в редких случаях эндокардита. При аспергилезном эндокардите от большого разрастания часто отсоединяются заметных размеров эмболы, которые могут закупорить кровеносные сосуды и обеспечить образцы для диагноза. Эхокардиограммы, особенно чреспищеводные, могут выявить подвижное внутрисердечное образование, соответствующее вегетациям, несмотря на отрицательные посевы крови.

Обнаружение антигенов, таких как галактоманнан, может быть специфичным, но в сыворотке оно часто не является достаточно чувствительным, чтобы идентифицировать большинство случаев на их ранних стадиях. При инвазивном легочном аспергиллезе тест на галактоманнан в образцах бронхоальвеолярного лаважа значительно чувствительней, чем в сыворотке, и часто является единственным вариантом для пациентов с тромбоцитопенией, которым биопсия противопоказана. Коммерческие анализы полимеразной цепной реакции (ПЦР) доступны, однако в настоящее время не одобрены США. Управление по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств США (Food and Drug Administration)

Читайте также: