Посев на борде жангу
Обновлено: 05.10.2024
Выявление возбудителя коклюша (Bordetella pertussis), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в биоматериале.
Синонимы русские
Палочка коклюша, бактерия Борде – Жангу [полимеразная цепная реакция].
Синонимы английские
Whooping cough, B. pertussis, DNA [Polymerase chain reaction].
Метод исследования
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Мазок из носоглотки, мазок из зева (ротоглотки).
Как правильно подготовиться к исследованию?
- За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.
Общая информация об исследовании
Bordetella pertussis (B. pertussis) – это грамотрицательная аэробная коккобацилла, являющаяся возбудителем коклюша. Инфекция передается воздушно-капельным путем. Риск заболеть наиболее высок у не вакцинированных АКДС детей и беременных женщин. Следует отметить, что прививка АКДС не обеспечивает стопроцентную защиту от заражения, так как иммунный ответ постепенно угасает в течение 1-3 лет после вакцинации. В этой связи подростки и взрослые, вакцинированные более чем 3 года назад и находившиеся в тесном контакте с больным коклюшом или носителем B. pertussis, также подвергаются риску заражения.
В клинической практике применяют несколько лабораторных тестов для диагностики коклюша: посев на питательную среду, метод прямой иммунофлюоресценции (ПИФ), серологические методы и исследование с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). ПЦР – метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в носоглоточном аспирате) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции и наиболее точно и быстро диагностировать коклюш.
Специфичность ПЦР достигает 100 %, что обусловлено использованием в реакции специфичной именно для B. pertussis пары праймеров. Положительный результат у пациента с признаками поражения респираторного тракта позволяет подтвердить диагноз "коклюш" и исключить наличие других бактериальных (в том числе паракоклюша) и вирусных заболеваний.
Исследование с помощью ПЦР характеризуется высокой чувствительностью, превосходящей чувствительность бактериологического метода, ПИФ и реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). Следует, однако, заметить, что она зависит от клинической стадии заболевания, в которую был взят биоматериал, от возраста пациента и предшествующего лечения.
В течении коклюша можно выделить 4 стадии: инкубационный период, катаральную, пароксизмальную стадию и стадию выздоровления. ПЦР является предпочтительным методом идентификации возбудителя при подозрении на коклюш в катаральную и раннюю пароксизмальную стадию (около 4 недель после появления первых симптомов). В этот период чувствительность ПЦР максимальна и превосходит чувствительность бактериологического метода. По прошествии более 3-4 недель чувствительность ПЦР несколько снижается. Это имеет особое значение при диагностике заболевания у взрослых пациентов, которые, как правило, игнорируют первые симптомы болезни, характерные для катаральной стадии, и обращаются за помощью в более поздние сроки, в пароксизмальную стадию. При диагностике коклюша в позднюю пароксизмальную стадию и при выздоровлении наиболее точные результаты будут получены при комбинации серологических исследований (например, РНГА) и исследования с помощью ПЦР.
Также ПЦР оптимальна для диагностики коклюша у младенцев, хотя у детей старшего возраста, а также подростков и взрослых она характеризуется большим числом ложноотрицательных результатов. Так, ее чувствительность при взятии биоматериала в первые 10 дней болезни в возрастных группах до 1 года, 1-4 года и старше 5 лет составила 70, 50 и 10 % (для сравнения: чувствительность "золотого стандарта" диагностики коклюша - посева на питательную среду - в этот период не превышает 60 %). В качестве биоматериала для диагностики коклюша у младенцев предпочтителен носоглоточный аспират. У детей старшего возраста, подростков и взрослых берут мазки из носоглотки и зева. Использование тампона из кальция альгината в этом случае не рекомендуется.
В отличие от других лабораторных методов, точность ПЦР в меньшей степени зависит от приема антибактериальных препаратов. Так, чувствительность метода при взятии биоматериала на 4-й день лечения эритромицином составила 89 % (бактериологического посева – 56 %), на 7-й день – 56 % (посева – 0). Поэтому ПЦР чаще выбирают для выявления B. pertussis у пациентов в катаральной стадии заболевания, если биоматериал сдается на фоне начатого лечения. Результаты теста при сдаче биоматериала на фоне лечения в пароксизмальную стадию во многих случаях ложноотрицательные.
Исследование с помощью ПЦР с успехом применяется у вакцинированных АКДС пациентов. При этом идентификация B. pertussis в мазках этой группы может означать транзиторное носительство, но не активную инфекцию, поэтому результаты ПЦР рекомендуется оценивать с помощью дополнительных эпидемиологических, клинических и лабораторных данных.
Показания.Выделение возбудителя у лиц с подозрением на коклюш для подтверждения диагноза; обследование контактных при наличии кашля; обследование бактерионосителей после их санации.
Общие сведения.Наиболее часто возбудитель высевается в первые 2 недели заболевания. Взятие материала производят натощак или через 2—3 ч после еды. При доставке в лабораторию его необходимо беречь от охлаждения, поэтому чашки Петри и пробирки транспортировать в биксе между слоями пеленки, на дне которого находится грелка с температурой 37—38° С. Результат посева получают через 72 ч.
Материальное обеспечение:
1)герметично закрытые стерильные пробирки с ватными тампонами на металлическом стержне в биксе или крафт-пакетах; 2) чашка Петри с питательной средой; 3) шпатель в крафт-пакете; 4) бикс для транспортировки пробирок, штатив, пеленка, грелка, термометр; 5) стеклограф; 6) перчатки; 7) инструментальный столик; 8) бланк-направление; 9) фантом ротоглотки.
Подготовительный этап выполнения манипуляции.
1.Вымыть и просушить руки, надеть перчатки.
2. Поставить на инструментальный столик необходимое оснащение.
3. Поставить стеклографом номер на чашке Петри (про
бирке), соответствующий номеру в направлении. Установить пробирку в штатив.
4. Усадить ребенка к источнику света. Детей младшего возраста фиксирует помощник.
I методвзятия материала с помощью ватного тампона.
5. Изогнуть стерильный ватный тампон о край пробирки под углом 135° на расстоянии 3—4 см от конца или взять готовый изогнутый тампон.
6. Предложить широко открыть рот. Левой рукой надавить шпателем на корень языка. Ввести тампон и провести им 2—3 раза по задней стенке глотки. Осторожно извлечь тампон, не касаясь слизистой оболочки рта и зубов.
7. Произвести посев материала на чашку Петри с питательной средой. Содержимое тампона нанести на ее поверхность, не нарушая целости.
II метод"кашлевых пластинок".
Основной этап выполнения манипуляции.5. Взять чашку Петри, при появлении кашля открыть ее и держать на расстоянии 5—10 см от рта больного в течение 10—20 с, улавливая 5—6 кашлевых толчков. При отсутствии кашля вызвать кашлевую реакцию, надавливая шпателем на корень языка.
6. Быстро закрыть чашку Петри и поставить в термостат с температурой
Заключительный этап выполнения манипуляции.
7. Вымыть и обработать антисептическим раствором руки в перчатках, снять перчатки, вымыть и просушить руки.
8. Оформить направление.
9. Транспортировать взятый материал в биксе в бактериологическую лабораторию.
Гонорея - это инфекционная патология, которая передается во время полового акта. Микроорганизм, который является возбудителем болезни - Neisseria gonorrhoeae. Это бактериальная инфекция, которая поражает мочеполовые пути, в частности, их слизистую оболочку. Также в патологический процесс вовлекаются слизистые оболочки кишечника, ротоглотки, конъюнктивальная оболочка и внутренние органы. Средний возраст пациентов с гонореей - от 19 до 35 лет. Заболевание не только поражает половые органы и выделительную систему - оно негативно сказывается на общем состоянии здоровья. Со временем, гонорея может снижать репродуктивную функцию, а в некоторых случаях приводит к бесплодию. Болезнь может иметь более или менее выраженный характер течения, есть стертые формы. Это говорит о том, насколько важна ранняя диагностика и начало лечения.
Подробнее о патологии
Заболевание проявляется различными симптомами, главный из которых - выделения из мочеполовых путей. Для пациентов женского пола характерны также зуд, дискомфорт в области внешних половых органов, болезненное мочеиспускание, учащение позывов к мочеиспусканию, отечность и воспалительные изменения слизистой оболочки половых органов, боль в нижней части живота, нарушенные менструации. Для мужчин характерны те же симптомы, боль при мочеиспускании, жжение, зуд, воспалительные изменения наружных половых органов, из уретры выделяется жидкость гнойного характера. Наблюдаются и общие симптомы - слабость, тошнота, рвота, нарушение стула, боли в животе, повышение температуры.
Заражение гонореей происходит при различных видах полового акта. Для распространения возбудителя достаточно всего лишь контакта половых органов носителя и любой слизистой оболочки его партнера. Чаще заражаются женщины, чем мужчины, что основано на строении их половых органов. Существует также вертикальный путь передачи, когда ребёнок заражается во время прохождения зараженных родовых путей. Реже встречается бытовой путь передачи - через белье, руки, грязную постель или полотенца.
Осложнения гонореи у женщин - нарушение менструального цикла, бесплодие, повышение риска внематочной беременности, выкидыши и нарушение родового процесса. У новорожденных осложнением гонореи является слепота. У мужчин развиваются хронические воспалительный процессы в половых органах - эпидидимит, орхит, уретрит. Также, снижается репродуктивная функция, наблюдается снижение активности сперматозоидов. Независимо от пола, гонорея может приводить к циститу, уретриту, нефриту, парапроктиту, фарингиту, а также поражает лимфатическую и суставную ткань.
Профилактикой осложнений является раннее начало лечения, что возможно только при качественной и своевременной диагностики.
Современные методы диагностики гонореи
Основной метод диагностики гонореи - лабораторный. Клиническое обследование и опрос дают возможность лишь заподозрить заболевание, но его лечение и окончательный диагноз возможны лишь после лабораторного подтверждения. Это важно для специфического воздействия на возбудитель. В настоящее время, применяются следующие методы лабораторной диагностики гонореи:
проведение экспресс-тестов (реакция встречного электрофореза);
изучение реакции иммунной флюоресценции;
анализ на иммуноферментный статус;
серологический метод исследования (по реакции Борде-Жангу):
проведение провокационных проб.
Рассмотрим подробнее эти методики.
Бактериологический анализ
Посев биологического материала на питательные среды называется бактериологическим, микробиологическим, культуральным методом. В качестве среды используются лабораторные реактивы, размещенные в подходящих условиях температуры, влажности. Через время, достаточное для роста колонии бактерий, среды изучают на наличие возбудителя гонореи. Кроме наличия колоний с бактериями, оценивается их реакция на антибактериальные препараты, наличие или отсутствие чувствительности к конкретным препаратам.
Исследование обладает высоким уровнем специфичности, дает возможность смоделировать в лабораторных условиях воздействие на микроорганизмы и оценить их реакцию на антибиотики. Это повышает качество и эффективность лечения, снижает риск дисбактериоза и осложнений инфекционного процесса.
Бактериоскопическое исследование
Это наиболее распространенный метод диагностики, который не требует значительных затрат времени. Биологический материал наносится на лабораторное стекло, после чего происходит его прокрашивание по специальным методикам. Для этого применяются специальные красители и последовательность их применения. Это позволяет различным структурам клеток окрасится в разные цвета. Разное строение клеток гонококков и форменных элементов крови позволяет определить возбудитель, который окрашивается более интенсивно.
Для того, чтобы повысить качество бактериоскопии, необходимо правильно соблюдать пропорции реактивов, использовать только качественные реагенты и лабораторное оборудование. В противном случае реакция может не произойти и результаты анализов будут ложными.
Проведение экспресс-тестов (реакция встречного электрофореза)
Для исследования используются специальные тест-полоски, которые можно применять под контролем врача или самостоятельно. Такой тест прост в использовании, его результаты легко расшифровать, так как наличие инфекции проявляется в виде двух полосок на тесте. Использовать такую методику можно при подозрении, для дифференциальной диагностики, после сомнительного полового акта.
Экспресс-диагностика основана на методике встречного электрофореза. Методика обеспечивает связывание антител и антигенов в сыворотке. Если пациент заражен - реакция происходит и образуется иммунокомплекс. Это считается положительным результатом и означает, что в организме есть возбудитель. Особенность диагностики - невысокий уровень специфичности, поэтом это не является окончательным вариантом диагностики. Лучше обратиться к врачу, если тест дал положительный результат, для того чтобы подтвердить или исключить диагноз.
Изучение реакции иммунной флуоресценции
Данный метод диагностики довольно точен и специфичен, однако требует соответствующих условий, оборудования и обученного персонала. В ходе реакции необходимо использовать только качественный реагенты, ведь их состояние сказывается на результатах исследования. Материал для анализа - мазок из слизистой оболочки. Полученный мазок прокрашивается по специальной методике с использованием специфических красителей. Они содержат светящийся элемент, который подсвечивается при работе с микроскопом. Окрашивание происходит параллельно с иммунной реакцией. Обнаружение факта флуоресценции говорит о наличии возбудителя в организме. Это объясняется тем, что меченые антитела образуют комплексы, которые и видит медицинский персонал под микроскопом. Такой комплекс выглядит как светящийся круг. Методика позволяет определить заболевание на разных стадиях. Чувствительность метода - около 80%. Анализ проводится за короткое время, что также является его преимуществом.
Анализ на иммуноферментный статус
Особенность этой методики заключается идентификации антител к возбудителю. Единственный недостаток данного исследования - изредка он дает ложноположительные результаты. Специфичность иммуноферментного анализа- почти 99%, а чувствительность метода достигает 93-94%. Стоит заметить, что проведение исследования не требует забора материала со слизистой мочеполовых путей. Исследуется средняя порция мочи пациента. Суть методики основана на выделении специфических ферментов при реакции антиген-антитело, что подтверждает наличие инфекции в организме. По сравнению с другими методами, иммуноферментный анализ используется не так часто, его необходимость определяет лечащий врач.
Серологический метод исследования (по реакции Борде-Жангу)
Это реакция связывания комплемента, которая относится к иммунологическим исследованиям и основана на формировании иммунокомплекса из антигена и антител к нему. Этот комплекс способен фиксировать свободный комплемент, в чем и заключается суть метода. Сначала происходит крепление выработанных организмом антител на поверхность возбудителя, а после этого - гемолиз, который происходит в присутствии специфической системы. Сотрудники лаборатории изучают этот процесс в соответствующих условиях и с использованием специфических реактивов. Применяется специфический индикатор, в присутствии которого происходит гемолиз. Также, для этих методик используются специфические сыворотки и реагенты.
ПЦР и ЛЦР
Это молекулярные методы исследования, при которых исследуется различный биологический материал пациента, у которого подозревают гонорею. Методики обладают высокой точностью и чувствительностью. Различают полимеразную цепную реакцию и лигазную цепную реакцию. В зависимости от вида фермента удается обнаружить тот или иной участок генетического материала возбудителя, что и подтверждает факт наличия патологии в организме. Этот метод считается золотым стандартом в диагностике инфекционных заболеваний и широко используется в современной медицине.
Проведение провокационных проб
Если перечисленные методы исключили наличие гонококков в организме, но врач все-таки подозревает именно этот диагноз, проводятся провокационные пробы. Они проводятся с использованием иммунологических, химических, термических методик. Каждая проба проводится в определенных условиях, с использованием реактивов. Суть исследования заключается в искусственном обострении воспаления, при котором могут обнаружиться возбудители заболевания. Пробы назначает лечащий врач, учитывая состояние пациента, его фоновую патологию и анатомические особенности.
Причины пройти диагностику в СЗЦДМ
Лаборатория центра оснащена новейшим диагностическим оборудованием. Анализы выполняются быстро и качественно. В штате медицинских центров работают высококвалифицированные специалисты, что позволяет сделать диагностику разносторонней и эффективной. Пациент может не только установить факт заболевания, но и пройти расширенную проверку организма, а также лечение. Для наших врачей нет заболевания отдельной системы - они оценивают полноценное состояние пациента и лечат его, а не патологию. Есть возможность получить результаты исследования на личную электронную почту или получить их в распечатанном виде в медицинском центре.
Лаборатория АО "СЗЦДМ" предлагает услуги, обеспечивающие комплексное и преемственное лабораторное обследование пациента
Диагностика В медицинских центрах АО "СЗЦДМ" проводят качественные диагностические исследования всего организма
Лечение Наши медицинские центры ориентированы на обслуживание пациентов в амбулаторном режиме и объединены единым подходом к обследованию и лечению пациентов.
Реабилитация Реабилитация - это действия, направленные на всестороннюю помощь больному человеку или инвалиду для достижения им максимально возможной полноценности, в том числе и социальной или экономической.
Профосмотры АО "СЗЦДМ" проводит профилактические осмотры работников, которые включают в себя - комплексы лечебных и профилактических мероприятий, проводимых для выявления отклонений в состоянии здоровья, профилактики развития и распространения заболеваний.
Показания: выделение возбудителя у лиц с подозрением на коклюш.
Взятие материала осуществляют:
а), натощак; б), используют методы:
Iметод - с помощью ватного тампона;
IIметод - "кашлевых пластинок".
Техническая подготовка:
1.Герметично закрытые стерильные пробирки с ватными тампонами на металлическом стержне.
2.Чашка Петри с питательной средой.
3.Шпатель в крафт-пакете.
4.Штатив, бикс для транспортировки пробирок, термометр, грелка.
Выполнение манипуляции:
Вымыть и просушить руки, надеть перчатки.
Стеклографом поставить номер на чашке Петри или пробирке, соответствующий номеру в направлении.
Установить пробирку в штатив.
Усадить ребенка к источнику света. Детей младшего возраста фиксирует помощник
I метод - взятие материала с помощью ватного тампона.
Открыть пробку, не вынимая тампон из пробирки изогнуть его о край пробирки под углом 35 гр. на расстоянии 3-4 см от его конца.
Предложить ребенку широко открыть рот.
Левой рукой взять шпатель и фиксировать язык. Ввести тампон в полость рта и взять слизь с задней стенки глотки. Не касаться десен, зубов, языка.
Извлечь тампон, поместить его в пробирку, пробку плотно закрыть. Поставить в термостат (тем. 37 гр.).
П метод - "кашлевых пластинок".
1..Чашку Петри с питательной средой открыть на расстоянии 5-10 см. от рта, больного просят 5-6 раз покашлять в течении 10-20 секунд (при отсутствии кашля надавить на гортань).
2.Быстро закрыть чашку. Поместить в термостат (37-38 гр.).
Заключительный этап:
1.Вымыть и обработать антисептиком руки в перчатках, снять перчатки , зымыть руки.
2.Оформить направление в лабораторию.
Взятие материала на энтеробиоз (метод отпечатка на липкой ленте). Метод Грехэма.
Заранее предупредить маму ребенка или медицинский персонал о том, что процедура делается утром и ребенка не подмывают.
Читайте также: