Посев на пестрый ряд это

Обновлено: 18.09.2024

Посев на среды короткого и длинного пестрого ряда проводят взвесью мик­робных клеток (приготовление см. посев на трехсахарный агар). Для посева на скошеннный МПА бактериологическую петлю фламбируют, остужают, опус­кают во взвесь бактерий и делают посев штрихом на скосе. На все остальные среды посев делают при помощи пастеровской пипетки. Запаянный конец стерильной пастеровской пипетки обламывают над пламенем газовой горелки, после чего пипетку заполняют взвесью микробных клеток. Пробирку со средой осторожно приоткрывают над пламенем газовой горелки и капают в нее каплю взвеси, после чего пробирку быстро закрывают. После посева конец пастеров­скую пипетки запаивают над пламенем газовой горелке, а саму пипетку поме­щают в емкость с дезинфекционным раствором. Штатив со средами короткого или длинного пестрого ряда помещают на 24 часа в термостат с температурой 37°С.

Тут вы можете оставить комментарий к выбранному абзацу или сообщить об ошибке.

Бактерии группы Salmonella обладают избирательными сахаролитическими свойствами, кроме того, выделяют сероводород, а отдельные штаммы способны разжижать желатин.

Бактерии группы Е. coli обладают преимущественно сахаролитическими свойствами, поэтому при росте на элективных средах, трехсахарном агаре и средах Гиса они расщепляют сахара, вызывая сме­щения рН среды в кислую сторону, что приводит к изменению цветаиндикатора.

Биохимические свойства возбудителей пищевых токсикоинфекций

Вещество Сальмонелла Кишечная палочка Протей
Глюкоза + + +
Лактоза - -/+ -
Сахароза - -/+ -
Маннит + + -
Мочевина - - +
Сероводород + - -/+
Индол - + -/+
Разжижение желатина -/+ - +

Для изучения культуральных и биохимических свойств возбудите­лей пищевых токсикоинфекции вторичные посевы делают на трехсахарный агар и среды короткого пестрого ряда.

В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 2 г глюкозы* 1| г саха­розы, IS г лактозы, 0,6 г соли Мора, I г серноаатистокислого натрия и

Трехсахарный агар с мочевиной (по Олькеницкому)

К 100 мл стерильного питательного агара добавляют 1 г лактозы, 0,02 г соли Мора, 0,03 г гипосульфита натрия, 1 г сахарозы, 0,1 г глюкозы, 1 г мочевины и 1 мл 0,4 % раствора фенолового красного.

Предварительно растворяют соль Мора с гипосульфитом в одной пробирке с небольшим количеством воды, а в другой — мочевину с угле­водами. После растворения все смешивают с агаром и фильтруют через стерильную марлю. Разливают по пробиркам по 5—6 мл. Стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 20 мин. Среда имеет бледно-розовый цвет.

Методика посева возбудителей

пищевых токсикоинфекции на трехсахарный агар

Готовят взвесь микробных клеток в изотоническом 0,9 % растворе хлористого натрия с концентрацией 2—3 млн микробных клеток. Для этого берут пробирку с 5 мл стерильного изотонического рас­твора и вносят в нее профламбированной петлей кусочек исследу­емой колонии микроорганизмов и тщательно перемешивают. Эту процедуру повторяют до тех пор, пока жидкость в пробирке не станет опалесцировать. Затем распрямляют бактериологическую петлю, опускают ее в приготовленную взвесь и делают увкол на всю глубину трехсахарного агара. Затем бактериологическую петлю флам-бируют, остужают, повторно опускают во взвесь бактерий и делают посев штрихом на скосе.

Учет роста возбудителей пищевых токсикоинфекции на трехсахарном агаре

После инкубации при температуре 37°С в течение 24 часов проводят учет роста возбудителей (см. табл. 12,13).

Микроорганизм Изменение среды
Salmonella Столбик среды обесцвечивается и становится ж ла вследствие выделения сероводорода образую с черной окантовкой, скос остается янтарного i елтым, вокруг вко-тся разрывы среды хвета
Е. coli Вследствие расщепления всех Сахаров рН средь л ой, и среда приобретает синий цвет i становится ос-
Proteus Вследствие расщепления мочевины рН среды с ной, и среда приобретает шафранно-красный i тановится шел оч-1вет и чернеет

Таблица 13. Рост возбудителей пищевых токсикоинфекции на трехсахарном агаре (по Олькеницкому)

Друг друга берегите, дорожите! Ведь жизнь она у каждого одна. И в радости, и в горе поддержите, иначе - нам как людям "ГРОШ" цена! © Автор неизвестен ==> читать все изречения.

уничтожения вегетативных форм, споры анаэробов при этом сохраняются.

II этап - получение изолированных колоний. На среде Китт-Тароцци

обнаруживается помутнение с пузырьками газа.

Ш этап - выделение чистой культуры проводится по одному из следующих

А) По Цейсслеру - каплю материала со среды Китт-Тароцци засевают в

чашку с кровяным агаром и распределяют материал шпателем, этим же

шпателем производят посев во второй и третьей чашках;

Б) По Вейнбергу - каплю материала со среды Китт-Тароцци переносят в

растопленный и слегка остуженный сахарный агар, затем набирают в трубки

Веньял-Вейона и инкубируют в термостате.

IV и V этапы - идентификация в реакции нейтрализации на белых мышах.

Короткий пестрый ряд используется для изучения биохимических свойств возбудителей пищевых токсикоинфекций и определения рода бактерий.

Короткий пестрый ряд представляет собой набор сред разлитых в пробирки, скошенный МПА, бульон Хоттингера, МПЖ, среды Гисса с сахарами (лактоза, глюкоза, сахароза и маннит). В бульон Хоттингера под пробку помещают ин­дикаторную бумажку, пропитанную уксуснокислым свинцом (для определения сероводорода), а в среду Гисса с глюкозой помещают газовичок для определе­ния углекислого газа.

Посев на среды короткого пестрого ряда проводят взвесью мик­робных клеток. Для посева на скошеннный МПА бактериологическую петлю прожигают, остужают, опус­кают во взвесь бактерий и делают посев штрихом на скосе. На все остальные среды посев делают при помощи пастеровской пипетки. Запаянный конец стерильной пастеровской пипетки обламывают над пламенем газовой горелки, после чего пипетку заполняют взвесью микробных клеток. Пробирку со средой осторожно приоткрывают над пламенем газовой горелки и капают в нее каплю взвеси, после чего пробирку быстро закрывают. После посева конец пастеров­скую пипетки запаивают над пламенем газовой горелке, а саму пипетку поме­щают в емкость с дезинфекционным раствором. Штатив со средой короткого пестрого ряда помещают на 24 часа в термостат с температурой 37°С.

Идентификация бактерий посевом на триаду Хейберга

Определение у культур ферментативной группы Хейберга-Смита по результатам разложения сахарозы, маннозы, арабинозы.

По отношению к трем углеводам- сахарозе, маннозе и арабинозе все вибрионы делятся на 8 групп (по Хейбергу). Биовары cholerae и eltor относятся к I группе Хейберга: расщепляют до кислоты без газа сахарозу и маннозу и не расщепляют арабинозу.

Принципы определения каталазной и плазмокоагулазной активности

Ферменты, относящиеся к факторам патогенности

А)Тест на каталазную активность

Каталазная активность свойственна большинству патогенных аэробных микроорганизмов. Облигатные анаэробы и многие микроаэрофилы каталазу не образуют.

Каталаза разлагает перекись водорода с образованием кислорода:


Для выявления каталазной активности наносят каплю 10%-ного раствора

пероксида на колонию или суспензию клеток. Выделение O , хорошо заметное по

образованию пузырьков газа, свидетельствует о продукции штаммами каталазы.

Определение плазмокоагулазной активности

Б)Плазмокоагулазную активность изучают, используя сухую цитратную кроличью плазму или плазму крови, взятую из сердца. Перед исследованием сухую плазму разводят 1:5 0,9%-ным раствором хлорида натрия, затем 0,5 мл разведенной плазмы вносят в стерильную пробирку и в ней суспендируют одну петлю 18 - 20-часовой агаровой культуры. Пробирки помещают в термостат при (37 +/- 1) °С и через 1, 2, 3, 18 и 24 ч проверяют наличие свертывания плазмы. Реакция считается положительной независимо от степени свертывания плазмы. В качестве контроля ставят реакцию со стафилококком, обладающим и не обладающим плазмокоагулазой. Одновременно у испытуемого штамма можно установить наличие фибринолитической активности.

Методы изучения протеолитич. Акт. Бактерий(р. На индол, сероводород и др.)

Протеолитическая активность – это способность микроорганизмов расщеплять белки с образованием различных продуктов (H2S, NH3, индола и т.д.). Изучение этих свойств применяется для идентификации бактерий.

2. Протеолитические свойства бактерий изучают:

а) по способности разжижать желатин: делают посев изучаемой культуры бактерий уколом в столбик мясопептонного желатина (МПБ + 10-20 % желатина) и оставляют при комнатной температуре (20-22° С) на несколько дней. Через 3-5-10 дней просматривают посевы и отмечают форму разжижения желатина, характерную для различных видов микробов. Разжижать желатин способны микробы, выделяющие фермент типа коллагеназы;

б) по конечным продуктам распада белков: делают посев на МПБ и выдерживают в термостате при температуре 37°С в течение 2-3 дней; для определения продуктов распада белков (индола, аммиака, сероводорода) используют специальные индикаторные бумажки, которые помещают между горлышком и ватной пробкой в пробирку с МПБ.

Индол обнаруживают по способу Мореля, для чего используют индикаторную бумажку, смоченную насыщенным раствором щавелевой кислоты, которая розовеет при образовании индола. Для обнаружения аммиака используют лакмусовую бумажку, в присутствии которого она синеет. Для обнаружения H2S используют полоску фильтровальной бумаги, смоченную уксуснокислым свинцом, которая чернеет в присутствии H2S.

Заражение куриного эмбриона(вирусологич. Метод)

Скорлупу над воздушным пространством протирают спиртом, обжигают в пламени, смазывают 2% раствором йода, снова протирают спиртом и обжигают. Вирусный материал в количестве 0,05 - 0,2 мл наносят на хорион-аллантоисную оболочку туберкулиновым шприцом или пастеровской пипеткой.

1. по белесоватым непрозрачным пятнам разной формы;

2. в реакции гемагглютинации.

РГА

Реакция гемагглютинации- это один из методов индикации вирусов. Ставится двумя методами:

1) капельным на стекле;

2) в пробирках - развернутая реакция.

Компоненты:

1) исследуемый материал: аллантоисная жидкость, суспензия

хорионаллантоисной оболочки куриного эмбриона, экстракт из

культуры клеток, зараженных вирусом;

2) 5% взвесь куриных эритроцитов;

3) физиологический раствор.

На чистое обезжиренное стекло наносят 1 каплю взвеси эритроцитов и 1 каплю исследуемого материала.

В мясопептонный бульон добавляют 3-4% агара, доводят pH до 7,6, разливают в склянки по 100 мл и стерилизуют, как обычно, в автоклаве, сохраняя в таком виде до момента приготовления фуксинсульфитного агара. Готовят фуксинсульфитный агар в день использования. Заготовлять впрок и хранить эту среду нельзя, так как она быстро краснеет.

К 100 мл расплавленного и охлажденного до 70°С 3-4%-ного мясопептонного агара стерильно добавляют 1 г лактозы, предварительно растворив и прокипятив ее в 5 мл стерильной воды. Кроме того, сюда же добавляют 0,5 мл профильтрованного насыщенного спиртового раствора основного фуксина и 2,5 мл свежеприготовленного 10%-ного раствора сернистокислого натра. Сернистокислый натр (Na2SO3) в количестве 0,5 г растворяют в 5 мл воды и перед употреблением стерилизуют кипячением.

Можно поступить и несколько иначе. Фуксин и сульфит натрия сначала смешивают в пробирке: к 0,5 мл раствора фуксина прибавляют при встряхивании раствор сульфита натрия до тех пор, пока жидкость в пробирке не станет бесцветной или слегка розовой. И в расплавленный и несколько охлажденный агар вливают уже эту смесь. Колбу со средой тщательно встряхивают для перемешивания и среду разливают в чашки Петри. После застывания среды ее подсушивают в термостате при 37 °С в течение 30 мин.

В горячем состоянии среда должна быть слабо-розового цвета, а после остывания совершенно бесцветной. Обесцвечивание фуксина в среде Эндо вызывает введенный сернистокислый натр.

Среда Симмонса

При идентификации микробов группы коли (чтобы отличить почвенный вид Escherichia coli aёrogenes от фекального вида Escherichia coli commune) применяется цитратная среда Симмонса. В 1 л дистиллированной воды растворяют 1,5 г фосфорнокислого натра (или однозамещенного фосфорнокислого аммония), 1 г однозамещенного фосфорнокислого калия (КН2РO4), 0,2 г сернокислого магния, 2,5-3 г кристаллического лимоннокислого натрия, устанавливают pH 7,0-7,2, добавляют 2% агара и, расплавив среду, разливают ее в колбы по 100 мл. Стерилизуют в автоклаве 15 мин при 120°С.

Перед употреблением в среду необходимо добавить индикатор. Можно использовать либо бромтимолблау, либо фенолрот. Индикатор добавляют к 100 мл расплавленной среды. Бромтимолблау берут в количестве 1 мл спиртового 1,5%-ного раствора. Среда приобретает оливково-зеленый цвет. Фенолрот добавляется в количестве 2 мл 1,5%-ного спиртового раствора. Среда окрашивается в желтый цвет. После добавления индикатора среду разливают в пробирки и стерилизуют в автоклаве при 120°С в течение 15 мин.

Пестрый ряд углеводов, или среды Гисса

Сначала готовят пептонную воду: на 1 л дистиллированной воды берут 10 г пептона и 5 г химически чистой поваренной соли, кипятят до растворения пептона, фильтруют через бумажный фильтр (фильтрат должен быть совершенно прозрачным) и устанавливают pH 7,2-7,4. Затем к 100 мл пептонной воды добавляют по 0,5 г одного из применяемых углеводов и по 1 мл индикатора Андреде.

В состав индикатора Андреде входит: 0,5 г кислого фуксина, 16 мл 1 н. раствора едкого натра (NaOH) и 100 мл дистиллированной воды. При необходимости индикатор можно готовить заранее и сохранять его в темном месте, предварительно про-кипятив при 100 °С в течение 15 мин. После введения индикатора среды разливают по пробиркам с поплавками и стерилизуют в кипятильнике Коха трижды по 30 мин. По окончании стерилизации поплавки должны быть погружены в среду, в противном случае пробирка не может быть использована. Среды Гисса с реактивом Андреде имеют соломенно-желтый цвет без розового оттенка. При развитии в среде микроорганизмов последние, разлагая сахар с образованием кислоты, вызывают изменение реакции. А так как в кислой среде индикатор Андреде краснеет, то это и является свидетельством, что микроорганизм использует данный сахар для своей жизнедеятельности. Отсутствие покраснения, наоборот, свидетельствует об отсутствии в ферментативном комплексе изучаемого микроба фермента, разлагающего имеющийся в среде углевод.

Читайте также: