Посев на среду сабуро

Обновлено: 07.07.2024

Это микробиологическое исследование, позволяющее выявить в биоматериале дрожжеподобные грибы рода Candida (С. spp.), определить их чувствительность к противогрибковым (антимикотическим) препаратам.

Синонимы русские

Посев на грибы рода кандида (Candida, кандидоз) и определение чувствительности к антимикотическим (противогрибковым, антифунгальным) препаратам.

Синонимы английские

Yeast culture, fungus identification and susceptibility, Candida сulture, fungus identification and susceptibility.

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Разовую порцию мочи, мазок урогенитальный, мокроту, мазок из ротоглотки, мазок из носоглотки, отделяемое уха, мазок из носа, мазок с конъюнктивы, ногти, эякулят.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Женщинам рекомендуется сдавать урогенитальный мазок или мочу до менструации или через 2 дня после её окончания.
Мужчинам не следует мочиться в течение 3 часов до сдачи урогенитального мазка или мочи.

Общая информация об исследовании

Простейшие дрожжеподобные грибы рода Candida, насчитывающего более 170 видов, в небольшом количестве встречаются в составе нормальной микрофлоры полости рта, влагалища, желудочно-кишечного и мочеполового тракта у здоровых людей. Они являются условно-патогенными организмами: при определенных условиях, способствующих бурному размножению этих грибов (нарушении иммунитета, ВИЧ-инфекции, приеме антибиотиков широкого спектра действия, иммунодепрессантов, кортикостероидов или оральных контрацептивов с высоким содержанием эстрогенов, онкологических заболеваниях, туберкулезе, заболеваниях крови, сахарном диабете, беременности, внутриматочной спирали, тесной синтетической одежде, гемодиализе и др.), развивается кандидоз.

Candida spp. попадает в организм половым, контактным путем, а также во время беременности и родов. В 30-40 % случаев кандидоз развивается вследствие половых контактов, однако чаще заболевание обусловлено эндогенной инфекцией, когда при воздействии неблагоприятных факторов, приводящих к нарушению баланса естественной микрофлоры, происходит бурное размножение этих грибов.

Золотым стандартом в выявлении Candida spp. является микробиологический метод – культивирование на питательных средах (посев на среду Сабуро). Определение чувствительности выделенных микроорганизмов к противогрибковым (антимикотическим) препаратам используется главным образом при недостаточной эффективности лечения или при переходе от парентеральных противогрибковых препаратов одного класса на пероральные препараты другого класса (например, флуконазол) при необходимости длительного лечения кандидозной инфекции (например, при кандидозном менингите, эндокардите или остеомиелите).

Для чего используется исследование?

Для выявления кандидоза.
Для дифференциальной диагностики (наряду с другими исследованиями) при заболеваниях, протекающих со сходными симптомами (бактериальном вагинозе, трихомониазе, генитальном герпесе, неспецифическом вагините и др.).
Чтобы выбрать рациональную противогрибковую терапию и оценить ее эффективность.

Когда назначается исследование?

При подозрении на грибковую инфекцию, в том числе после антибактериальной терапии и при клинических признаках дисбактериоза кишечника (вздутии и боли в животе, жидком стуле).
При выделениях из влагалища, сопровождающихся зудом.
При противогрибковой терапии (для оценки эффективности лечения).

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Выявление Сandida spp. в биоматериале из стерильных в норме органов и тканей свидетельствует об этиологической роли этих грибов в развитии заболевания.

Кандидоз.
Сочетание вагинального кандидоза с бактериальным вагинозом.

Что может влиять на результат?

Предшествующая противогрибковая терапия, нарушение правил взятия анализа и задержка отправления биоматериала в лабораторию способствуют ложноотрицательному результату.

Важные замечания

При кандидозном вульвовагините у беременной женщины риск кандидоза ротовой полости у ребенка в будущем увеличивается в 35 раз. Поэтому во избежание у ребенка молочницы целесообразно провести лечение кандидозного вульвовагинита у матери во время беременности.

Также рекомендуется

Candida albicans, ДНК [реал-тайм ПЦР]
Candida albicans, IgG, титр

Кто назначает исследование?

Гинеколог, уролог, врач общей практики, педиатр, гастроэнтеролог, инфекционист.

Литература

Представляя собой питательную среду для выращивания грибов различной природы (дрожжевых, плесневых), среду Сабуро может различаться по своему составу и в зависимости от компонентов использоваться для самых разных целей. В практике выращивания ацидофильных бактерий, дрожжей и патогенных грибов среда Сабуро считается наиболее питательной средой, которая позволяет использовать их в лабораторных анализах и исследованиях.

Что такое среда Сабуро

Представляя собой искусственную среду для питания грибов, простейших и бактерий, среда Сабуро позволяет выращивать и подсчитывать число и исследовать качество выращиваемой среды для контроля микробной загрязненности при употреблении нестерильных лекарственных препаратов. Внешне данное средство представляет собой порошок с повышенной степенью гигроскопичности, имеющий светло-желтый оттенок.

Состав среда Сабуро иметь может следующий:

гидролизат рыбной муки;
гидролизат казеина панкреатический;
однозамещенный натрия фосфат;
дрожжевой экстракт;
агар;
глюкоза.

Вместо глюкозы для проведения лабораторного исследования с применением среды Сабуро может использоваться также раствор мальтозы и дистиллированная вода.

Также могут при меняться такие разновидности данного типа среды, как пептонный агар Сабуро, где основным составляющим выступает пептон, среда Сабуро на дрожжевой воде, медовая среда Сабуро (здесь вместо глюкозы или мальтозы применяется натуральный мед), среда Сабуро, предназначенная для хранения выращенных культур.

Кому назначают исследование

Поскольку основным принципом работы данной среды является определение количества и скорости развития патогенной микрофлоры, когда вычисляется на основе полученных данных число грибов различной природы в среде, а также степень развития дрожжей и ацидофильных бактерий, применяться среда Сабуро может в следующих случаях:

при наличии поражений кожи, которые могут иметь различный характер. С помощью среды Сабуро предоставляется возможность выделить наличие на коже штаммов бактерий и дрожжевых грибов, которые становятся причиной возникновения фурункулеза, кожной сыпи, воспалительных абсцессов;
при проведении диагностирования особенностей среды на коже: увеличение активности дрожжевых грибов либо ацидофильных бактерий провоцирует частые отеки тканей, гиперемию, воспалительные процессы на коже;
для определения наличия кандидоза;
при выявлении парши, заболевания кожи, имеющего высокую степень активности и передающееся даже при небольшом контакте с зараженным человеком.

Основным преимуществом данной процедуры следует считать ее эффективность: даже при разовом проведении становится возможным выявить многие причины поражения кожных покровов, установить причины часто повторяющихся воспалительных процессов и абсцессов.

Однако для получения точного результата следует провести несколько таких реакций: точность ответа позволит назначить адекватное лечение, которое быстрее снимет имеющиеся симптомы и устранит причину заболевания.

Зачем делать такой анализ

Назначается среда Сабуро при необходимости проведения комплексной диагностики при выявлении многих кожных заболеваний, которые вызываются активным размножением дрожжевых грибов, ацидофильных бактерий. Назначение процедуры делается врачом-дерматологом, и количество проводимых процедур также рассчитывается им. При необходимости уточнения диагноза может назначаться две и более диагностические процедуры среда Сабуро.

При неоднократном повторении данной исследовательской процедуры отрицательного воздействия на организм выявлено не было.

Виды процедуры

В зависимости от компонентов, которые применяются для проведения анализа, процедура может различаться. Наиболее часто применимыми считаются следующие ее разновидности:

среда Сабуро на дрожжевой воде;
медовая среда Сабуро;
пептонный агар.

Перечисленные виды имеют несколько измененный состав, однако эффективность проведения не изменяется и реакция используется для определения наличия повышенного количества дрожжевых грибов и бактерий ацидофильного типа.

О приготовлении среды Сабуро расскажет данное видео:

Показания для проведения

К основным показаниям следует отнести такие состояния, как различные поражения кожи, которые возникают чрезмерно часто и сопровождаются такими агрессивными проявлениями, как воспалительные процессы, абсцессы, глубокие фурункулы.
Изменения среди и микрофлоры кожи, покраснения и высыпания также становятся причиной назначения данной реакции для постановки точного диагноза. .

Противопоказания для проведения

Однако при повышенной чувствительности кожи к компонентам среды Сабуро проведение данной реакции не назначается. Используются другие методы, позволяющие диагностировать кожные заболевания и выбрать схему их лечения.

Детский возраст (до года) и беременность с противопоказаниями к проведению подобных исследований также следует считать противопоказаниями к осуществлению среды Сабуро.

Схема среды Сабуро

Безопасно ли исследование

В большей мере данная реакция для исследования микрофлоры кожи назначается при отсутствии повышенной чувствительности кожи, однако в большинстве случаев она безопасна для организма человека.

Про приготовления к проведению среды Сабуро читайте ниже.

Подготовка к процедуре

Чтобы результат проводимого анализа не был искажен, следует заблаговременно к ней подготовиться.

Сложностей в подготовке нет: накануне не рекомендуется принимать острую пищу, не употреблять алкоголь, перед процедурой при взятии образца кожи поверхность кожи полностью очищается. При приеме любых видов лекарств следует сообщить об этом лечащему врачу.

Как все проходит

Особых ощущений при исследовании микрофлоры кожи не возникает, поскольку для проведения анализа берется соскоб с кожи. Частички кожного покрова несут в себе все бактерии, которые выявляются при данной реакции.

Для выявления нарушений в составе микрофлоры, с поверхности кожи берется соскоб, который помещается в среду Сабуро. Далее проводится реакция, показывающая степень заселенности кожи определенными микроорганизмами (бактериями айидофильного происхождения, грибами).

Расшифровка результатов

Для назначения лечения следует получить точные данные реакции, и для этого требуются все знания лечащего врача с учетом всех факторов, являющихся специфическими для конкретого заболевания. По этой причине процесс расшифровки полученного анализа может проводиться только лечащим врачом-дерматологом.

О том, какова цена на питательную среду Сабуро в микробиологии, расскажем ниже.

Средняя стоимость процедуры

Цена данной процедуры зависит от места ее проведения, числа повторений процедуры и применяемого количества реактивов. Стоимость может колебаться от 1 280 до 1 970 рублей.

Еще больше полезной информации о методе Сабуро представлено в этом видео:

Я думаю, это может быть интересный пост для некоторых из вас. Я расскажу некоторые подробности о своей технике работы с чашками с агаром. Но я не буду вдаваться в подробности, просто сделаю краткий обзор. Я изучил это в лаборатории, поэтому следующие действия являются очень простыми микробиологическими методиками.

Что касается сред, я обычно использую агар Сабуро. Это среда для выращивания дрожжей и некоторых других бактерий. Агар состоит из следующих компонентов [г л -1 ] (при использовании в концентрации 65 г порошка на 1 литр воды):

Почему Сабуро? Сначала я попытался приготовить свой собственный солодовый агар из высушенного солодового экстракта и агара, но твердость агара оказалась очень непостоянной. И раньше я использовал Сабуро в лаборатории для культивирования дрожжей.

Он начинается с добавления 26 г смеси Сабуро в 400 мл водопроводной воды. Я использую бутылку Schott на 500 мл и скороварку и кипячу все это примерно 15 минут, чтобы стерилизовать среду. Затем я даю ему остыть в кастрюле, пока давление не вернется к норме, достаю грелку и даю ей остыть. (обратите внимание, что подсос воздуха происходит не через санирующий или какой-никакой фильтр, а просто через щели. Если скороварка/автоклав хорошо герметизируются, то открывая можно получить сильный поток воздуха вовнутрь, что может инфицировать ваши среды. Прим.MrD`Anger)

Когда температура агара составляет примерно 50 ° C, я наливаю около 20 мл среды в чашку Петри (я использую пластиковые чашки Петри Greiner диаметром 94 мм с отверстиями) и даю ему остыть. 400 мл должно хватить на 20 чашек, но у меня всегда меньше. Вот и все, что нужно сделать, чтобы получить чашку Петри с агаром, на которую можно засеять культуру.

Я беру инокуляционную петлю, которую нагреваю на газовой горелке до красного цвета, даю ей остыть, пока красный цвет не исчезнет, и втыкаю петлю в агар, чтобы охладить ее. Затем я беру колонию, немного жидкости или что-то еще, что я хочу посеять на чашку. Я обычно использую технику истощающего штриха, чтобы впоследствии получить единичные колонии. Это упрощает определение морфологии колонии и различение различных микроорганизмов (см. Рисунок ниже).

И у меня нет причудливой подставки для посева в потоке (как я понимаю, имеется в виду специальная вращающаяся подставка для посевов, типа таких или таких. Прим.MrD`Anger). Я просто использую кусок стекла в качестве основы, которую можно протереть спиртом. Самая важная часть работы в потоке — это работать быстро. Просто откройте чашку на очень короткое время, чтобы не осталось полос, и снова закройте. У меня эта техника работает, тарелок с плесенью и другими загрязнениями очень мало.

После нес кольких дней инкубации при комнатной температуре чашка может выглядеть как слева. Как уже упоминалось, преимуществом истощающего штриха является то, что вы получаете отдельные колонии. Колония — это отдельная точка. Это легко заметить на картинке слева. Одиночные колонии находятся в правом верхнем углу. Типичная дрожжевая колония выглядит (по моему опыту): круглой, от белого до кремового цвета, ровной, выпуклой, слегка глянцевой и диаметром около 2 мм. О терминологии:

Круговой: определяет форму колонии. Колонии также могут иметь неправильную форму.
Равномерное: определяет границы колонии. Некоторые колонии могут быть волнистыми, нитевидными и т. Д.
Выпуклый: описывает высоту колонии. Некоторые колонии плоские, некоторые выпуклые, полушаровидные, приподнятые и т. Д.

Вот как я готовлю свои чашки Сабуро и использую их для выращивания и скрининга различных дрожжей и некоторых бактерий.

Для приготовления жидкой среды Сабуро в 1000 см 3 дистиллированной воды добавляют 10 г сухого ферментативного пептона, кипятят в течение 10 мин, фильтруют, прибавляют 40 г глюкозы, устанавливают соляной кислотой массовой долей 1%-2% рН (5,6±0,2), разливают в стерильные пробирки и стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин.

Для получения агаризованной питательной среды к приготовленной жидкой среде Сабуро добавляют 10-20 г агара.

7.5.9.1 Для приготовления жидкой среды Хейфлика готовят основу среды: берут 90,0 см 3 бульона из экстракта говяжьего сердца, 10,0 см 3 дрожжевого экстракта концентрацией 250 г/дм 3 , 5,0 см 3 раствора фенолового красного концентрацией 0,6 г/дм 3 , доводят до кипения и кипятят в течение 10 мин. Среду стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин.

7.5.9.2 Затем основу среды охлаждают до температуры 40 °С - 45 °С и добавляют 20,0 см стерильной лошадиной сыворотки, не подвергнутой нагреву и проверенной на контаминацию микоплазмами, 1,20 см 3 стерильного раствора дезоксирибонуклеиновой кислоты концентрацией 2 г/дм 3 и 0,25 см 3 пенициллина с содержанием пенициллина 20000 МЕ/см 3 . Значение рН доводят до 7,8 раствором едкого натра массовой концентрацией 10%. Среду не стерилизуют.

7.5.9.3 Для приготовления твердой среды к основе жидкой среды Хейфлика по 7.5.9.1 добавляют агар в концентрации 15 г/дм 3 , стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин, охлаждают до температуры 40 °С - 45 °С, а затем добавляют компоненты по 7.5.9.2.

Для приготовления жидкой среды Фрея смешивают 90,0 см 3 бульона из экстракта говяжьего сердца, 2,0 см 3 раствора моногидрата глюкозы концентрацией 500 г/дм 3 , 12,0 см свиной сыворотки, инактивированной при 56 °С в течение 30 мин, 5,0 см 3 раствора фенолового красного концентрацией 0,6 г/дм 3 . Стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин, охлаждают до температуры 40 ° С - 45 °С, а затем добавляют 0,25 см 3 пенициллина (20000 МЕ/см 3 ), 0,025 см смеси витаминов по 7.5.1, 1,0 см 3 раствора -Никотинамидадениндинуклеотда концентрацией 10 г/см 3 и 1,0 см 3 раствора цистеина гидрохлорида концентрацией 10 г/дм 3 . Значение рН среды доводят до 7,8 добавлением раствора едкого натра массовой концентрацией 10%.

Для приготовления твердой среды Фрея смешивают 90,0 см 3 бульона из экстракта говяжьего сердца, 2,0 см 3 раствора моногидрата глюкозы концентрацией 500 г/дм 3 , 12,0 см свиной сыворотки, инактивированной при 56 °С в течение 30 мин, 5,0 см 3 раствора фенолового красного концентрацией 0,6 г/дм 3 , 1,4 г очищенного агара, значение рН доводят до 7,8, стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин, затем охлаждают до температуры 40 ° С - 45 °С и добавляют 0,25 см 3 пенициллина (20000 МЕ/см ), 0,025 см 3 смеси витаминов, 1,0 см 3 раствора -Никотинамидадениндинуклеотда концентрацией 10 г/см 3 и 1,0 см 3 раствора цистеина гидрохлорида концентрацией 10 г/дм 3 .

Для приготовления жидкой среды Фриса берут 800 см 3 сбалансированного модифицированного солевого раствора Хенкса, 67 см 3 дистиллированной воды, 135 см экстракта из сердца и мозгов, 248 см 3 бульона PPLO, 60 см 3 дрожжевого экстракта концентрацией 170 г/дм 3 , 250 мг бацитрацина, 250 мг метициллина, 4,5 см 3 фенолового красного концентрацией 5 г/дм 3 . Среду стерилизуют автоклавированием при температуре 121 °С в течение 15 мин, затем охлаждают до температуры 40 ° С - 45 °С, значение рН доводят до 7,40-7,45 и добавляют стерильно 165 см 3 лошадиной сыворотки, 165 см 3 свиной сыворотки, проверенных на контаминацию микоплазмами.

Для приготовления твердой среды Фриса смешивают 800 см 3 сбалансированного модифицированного солевого раствора Хенкса, 200 мг DEAE - декстрана и 15,65 мг очищенного агара. Полученную смесь стерилизуют автоклавированием в течение 15 мин при температуре 121 °С и добавляют к 1740 см 3 жидкой среды Фриса.

7.6.2 Жидкие питательные среды промышленного производства, готовые к употреблению, хранят в плотно укупоренных сосудах при условии сохранения их стерильности и ростовых свойств в течение срока годности, указанного производителем.

7.6.3 Сухие питательные среды промышленного производства хранят в сухом, защищенном от света месте в соответствии с инструкцией производителя. После вскрытия упаковки необходимо написать дату вскрытия и далее хранить при комнатной температуре до окончания срока годности. По истечении срока годности, указанного производителем, среды уничтожают.

7.6.4 Приготовленные из сухих смесей и разлитые во флаконы питательные среды хранят в течение 1 мес при комнатной температуре или 3 мес при температуре от 2 °С до 8 °С. Срок годности питательных сред, разлитых в чашки Петри, составляет 7 сут при температуре 2 °С до 8 °С.

7.6.5 Если при хранении тиогликолевой среды, содержащей резазурин, верхний слой среды (более 1/3 объема) окрасится в розовый цвет, то среду можно регенерировать нагреванием на кипящей водяной бане в течение 10-15 мин до исчезновения розовой окраски с последующим быстрым охлаждением. Если окраска не исчезает после нагревания, то среду считают не пригодной к употреблению. Регенерацию среды можно проводить только один раз.

7.7.1 Определение ростовых свойств проводят для каждой партии коммерческой среды (сухой и готовой к использованию), а также для каждой партии среды, изготовленной в лаборатории.

7.7.2 При испытании ростовых свойств питательных сред, используемых для определения бактерий и грибов, в две пробирки со средой вносят культуру тест-штамма, каждого отдельно, согласно таблице 3 в количестве 10-100 КОЕ.

Таблица 3 - Тест-микроорганизмы для проверки ростовых свойств питательных сред, используемых для определения бактерий, грибов и микоплазм

Читайте также: