Посев на среду симмонса

Обновлено: 08.07.2024

1.2.Выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г

Родовая идентификация энтеробактерий осуществляется микробиологическим методом.

Принцип метода – визуальное обнаружение бактерий, выросших на питательной среде при посеве исследуемых образцов.

Аммоний фосфорнокислый двузамещенный (ГОСТ 3772-74) 1,6

Динатрия фосфат обезвоженный (ТУ 64-6-254-88) 1,1

Магний сернокислый (ГОСТ 4523-77) 0,2

Натрия гидроцитрат двузамещенный (ГФ Х, ст.432) 3,2

Натрий углекислый (ГОСТ 5100-85Е) 0,05

Бромтимоловый синий водорастворимый (ТУ 6-09-2086-77) 0,05

Агар микробиологический (ГОСТ 17206) 9,0±2

Натрия хлорид (ГОСТ 4233-77) 6,0

5.ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ

Термостат, обеспечивающий температуру (37±1) °С
Флаконы стеклянные, вместимостью 1 л
Цилиндр стеклянный мерный, вместимостью 1000 мл
Пробирки стеклянные
Вода дистиллированная
Спиртовка
0,9 % раствор натрия хлорида

Объекты исследований в санитарной и клинической микробиологии.

7.1.Приготовление рабочего раствора реагента

8.РЕГИСТРАЦИЯ И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

Учет результатов проводят через каждые 24 ч в течение 5 сут инкубации при температуре (37±1) °С и (21±1) °С. Изменение зеленого цвета среды на синий цвет указывает на способность микроорганизма утилизировать цитрат (положительная реакция). При отрицательной реакции цвет среды не меняется.

9.УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИЯ

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.

Назначение
Плотная среда для подтверждения утилизации цитрата у энтеробактерий, согласно стандарту ISO 10273.

Описание
Цитратный агар Симмонса является агаризованной разновидностью классической цитратной среды Козера; может использоваться как для чашек Петри, так и для пробирок со скошенным агаром. Посев на скошенный агар можно проводить рассевом по поверхности, либо глубоким уколом. Хотя первоначально цитратный агар Симмонса был разработан в качестве среды для выделения и идентификации некоторых грибов, Edwards и Ewing рекомендовали его как среду для проведения теста IMViC (Indol, Methyl red, Vogues Proskauer and Citrate — индол, метиловый красный, проба Фогеса-Проскауэра, цитрат). Его преимущество перед средой Козера в том, что результат определяется по изменению цвета индикаторов, а не по изменению мутности среды, которое иногда сложно заметить.

Приготовление
Добавить 24 г порошка в 1 л дистиллированной воды. Довести до кипения. Разлить в соответствующие флаконы или пробирки и стерилизовать автоклавированием 15 минут при температуре 121ºС. Дать агару застыть с образованием скошенной поверхности агара.

Техника посева
Чтобы добиться точных результатов, берут возможно меньшее количество материала и используют свежеприготовленный агар, поскольку если агар сильно подсох, ложный результат теста (изменение цвета) возможен даже до посева, особенно в нижней части скошенного агара.
Данный тест основывается на способности микроорганизмов использовать цитрат в качестве единственного источника углерода, а соли аммония в качестве единственного источника азота. Среди энтеробактерий подобными свойствами обладают следующие роды: Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Citrobacter, а также некоторые виды сальмонелл (S. schottumelleri, S. typhimurium, S. arizona и др.). Escherichia spp. Shigella spp., Salmonella typhi и Salmonella paratyphi на этой среде расти не способны. Хотя результаты теста учитываются по росту микроорганизмов, наличие индикатора облегчает учет, поскольку утилизация цитрата приводит к защелачиванию среды, в результате которого индикатор приобретает ярко-синий цвет. Это заметно, даже если рост микроорганизмов начался недавно.

Хранение
Среда предназначена только для лабораторного использования. Храните среду в банке с плотно закрытой крышкой, в темном, сухом, прохладном месте (при температуре от +4°C до 30°C и влажности Контроль качества
Температура инкубации: 35°C ± 2,0
Время инкубации: 24-48 часов
Инокуляция: посев штрихом

Эти среды используют для дифференциации энтеробактерий.

Состав**:

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 21,3 г порошка М411 в 900 мл дистиллированной воды или 24,28 г порошка М099 в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Добавить 100 мл 0,2%-ного раствора цитрата натрия в среду М411. Тщательно перемешать и разлить в пробирки или флаконы. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин.

Принцип и оценка результата:

Эти среды используют для дифференциации энтеробактерий по способности использовать цитрат в качестве единственного источника углерода. Первоначально цитратная среда была разработана Козером (1), она содержала соль аммония в качестве единственного источника азота и цитрат в качестве единственного источника углерода, что позволяло дифференцировать Escherichia coli и Enterobacter aerogenes. Затем Симмонс (2) модифицировал среду, введя в ее состав агар-агар и бромтимоловый синий (3). Эта среда рекомендована АРНА (4). Среда содержит гидрофосфат аммония в качестве единственного источника азота и цитрат натрия в качестве единственного источника углерода. Бромтимоловый синий – индикатор рН. Микроорганизмы в ходе размножения на среде продуцируют щелочные продукты, которые способствуют изменению цвета индикатора с зеленого на синий.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет травянисто-зеленую окраску, слегка опалесцирует, когда в пробирках формируется скошенный гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор М411 (2,13% вес/об) имеет рН 7,0 ± 0,2, а раствор М099 (2,43% вес/об) имеет рН 6,8 ± 0,2.

Среда Симмонса сухая, предназначена для приготовления плотной питательной среды для идентификации энтеробактерий по способности утилизировать цитрат натрия, при проведении микробиологических исследований

Функциональное назначение

Дифференциальная среда для инкубирования посевов. Рост микроорганизмов, способных утилизировать цитрат натрия, изменяет цвет среды с зеленого на синий

Технические характеристики

Читайте также: