Посев пищевых продуктов по методу шукевича используют для обнаружения микроорганизмов рода
Обновлено: 05.10.2024
Принципы, которыми руководствуются микробиологи при санитарно-микробиологических исследованиях, исходят из основной задачи, разрешаемой ими: определение возможности присутствия в исследуемом объекте патогенных микроорганизмов или токсинов, образующихся при их жизнедеятельности, а также обнаружение и оценка степени порчи изучаемого объекта (особенно пищевых продуктов). Эти принципы можно охарактеризовать следующим образом:
2. Проведение серийных анализов. Этот принцип исходит из особенностей исследуемых объектов. Как правило, вода, почва, воздух и другие объекты содержат разнообразные микроорганизмы, распределение которых неравномерно, к тому же микроорганизмы, находясь в биоценотических отношениях, подвергаются взаимному влиянию, что ведет к гибели одних и активному размножению других. Поэтому берут серию проб из разных участков исследуемого объекта, по возможности большее количество проб, что позволит получить более достоверную характеристику объекта. Доставленные в лабораторию пробы смешивают, затем точно отмеряют необходимое количество материала — среднее по отношению к исследуемому материалу в целом.
3. Повторное взятие проб. Данная операция необходима для получения сопоставимых результатов. Это связано прежде всего с тем, что исследуемые объекты весьма динамичны (вода, воздух и т.п.), сменяемость микрофлоры в них во времени и пространстве очень велика. Патогенные микроорганизмы попадают в окружающую среду, как правило, в небольшом количестве, к тому же и распределяются в ней неравномерно. Поэтому повторное взятие проб позволяет более точно определить биологическую контаминацию объектов окружающей среды.
4. Применение стандартных методов исследования, утвержденных соответствующими ГОСТами и инструкциями, что дает возможность в различных лабораториях получать сравнимые результаты.
5. Использование одновременно комплекса тестов для получения разносторонней санитарно-микробиологической характеристики. Применяют прямой метод обнаружения патогенных микроорганизмов и косвенный, позволяющий судить о загрязнении объектов окружающей среды выделениями человека и животных и его степени. К косвенным тестам относится определение общего микробного числа, количественного и качественного состава санитарно- показательных микроорганизмов. Применение косвенных методов оценки потенциальной возможности загрязнения объектов окружающей среды патогенными микроорганизмами, использование обходного пути для изучения обсемененности материалов, является особенностью санитарно- микробиологических исследований.
6. Проведение оценки исследуемых объектов по совокупности полученных результатов при использовании санитарно-микробиологических тестов с учетом других гигиенических показателей, указанных в соответствующих ГОСТах и нормативах (органолептических, химических, физических и т. д.). Всегда необходимо учитывать, что развитие микробов тесно связано с другими факторами окружающей среды, которые могут оказывать как благоприятное, так и неблагоприятное влияние, усиливая или ограничивая возможности размножения патогенных микроорганизмов и накопления их токсинов. Следует учитывать и то, что почти любой объект исследования имеет собственную микрофлору, которая вызывает специфические биохимические процессы, и те изменения в объектах, которые обусловлены посторонними микроорганизмами. Грамотный микробиолог должен хорошо знать ход биохимических процессов, происходящий в норме в исследуемом объекте (почва, вода), технологию производства, уметь определить характер вредного воздействия попавших микробов, возможные последствия такого воздействия и рекомендовать конкретные мероприятия по их предупреждению.
7. Ответственность специалистов за точность обоснования выводов и заключений о состоянии исследуемых объектов. При санитарно-микробиологическом исследовании выявляется степень порчи пищевых продуктов (или других объектов), пригодность их к употреблению, возможная опасность для здоровья населения. Запрещение использовать пищевые продукты, воду водоемов и др., закрытие предприятия из-за санитарного неблагополучия наносят определенный экономический ущерб. Ответственность за такое решение несет врач санитарной службы.
В целях предотвращения попадания и развития патогенных микроорганизмов на пищевые продукты на предприятиях пищевой и перерабатывающей промышленности, общественного питания постоянно проводят санитарно- микробиологический контроль всех объектов, контактирующих с продукцией — воздуха, воды, оборудования, тары, упаковочных материалов, рук обслуживающего персонала, а также непосредственных источников обсеменения продукции — сырья, вспомогательных материалов.
Общая характеристика методов саиитарио-микробиологических исследований
При организации планового санитарно-микробиологического контроля на предприятиях пищевого профиля используют, прежде всего, косвенные методы определения присутствия патогенных микроорганизмов. При этом для оценки санитарного состояния объектов окружающей среды используют количественные и качественные микробиологические показатели.
Количественные показатели характеризуют степень обсемененности данного объекта микроорганизмами, т.е общее микробное число в единице веса (объема) — обычно в 1г (1см3). Существует два метода определения микробной обсемененности: метод прямого подсчета и метод количественного посева проб исследуемого объекта или его разведений на питательные среды.
Прямой подсчет микроорганизмов в исследуемом объекте проводится под микроскопом в счетных камерах Горяева или в камерах, специально сконструированных для счета бактерий. Предварительно пробу исследуемого объекта подвергают обработке, чтобы получить гомогенную взвесь. Для лучшего учета бактерий в исследуемую суспензию добавляют краситель, чаще всего эритрозин. Можно проводить прямой подсчет и на мембранных фильтрах, через которые пропускают исследуемую жидкость или взвесь.
Метод количественного посева исследуемого материала на плотные питательные среды применяется наиболее часто. Из приготовленных серийных десятикратных разведений исследуемой жидкости или суспензии по 1 мл переносят в стерильные чашки Петри (начиная с большего разведения, каждое разведение отдельной пипеткой) и заливают расплавленным и остуженным до 45—50 °С мясопептонным агаром — МПА (глубинный посев). Для равномерного смешивания чашки слегка двигают по поверхности стола и после застывания агара помещают в термостат.
После инкубации подсчитывают число выросших колоний и с учетом разведения высчитывают число жизнеспособных микробов в единице объема исследуемого объекта. Если посевы выращивали при 30°С, то показателем общей обсемененности исследуемого материала является КМАФАнМ (или МАФАнМ). КМАФАнМ не определяют только у продуктов, при производстве которых используют заквасочные культуры. В зависимости от вида продукта и способа его производства этот показатель может свидетельствовать об общем санитарно- эпидемиологическом состоянии продукта, свежести или начальной стадии порчи внешне доброкачественного продукта, хотя во многих случаях метод считается приблизительным из-за невозможности выявить все микроорганизмы в объекте на одной питательной среде, т.к. их физиолого-биохимические свойства различны. Кроме того, режим инкубации также не соответствует требованиям всех микроорганизмов в ассоциации, не дают роста микробы, находящиеся в комочках исследуемого объекта, а если и наблюдается рост колоний, то, возможно, не из одной особи. Наконец, часть микроорганизмов теряет способность к размножению в силу антагонизма, конкуренции и других причин. Несмотря на недостатки этого показателя, для многих продуктов КМАФАнМ нормируется.
В обязательном порядке контролируются санитарно- показательные микроорганизмы, обнаружение которых также является косвенным показателем биологической контаминации исследуемого материала патогенными микроорганизмами. Превышение нормативов по допустимому содержанию санитарно-показательной микрофлоры свидетельствует о возможном присутствии тех или иных патогенных микробов.
Для количественной характеристики применяются две группы методик: определения титра и индекса.
Титр — это тот наименьший объем исследуемого материала (в миллилитрах) или весовое количество (в граммах), в котором обнаружена хоть одна особь санитарно-показательного микроорганизма. Например, для определения титра кишечной палочки в воде засевают несколько разных объемов (от 100 до 0,1 или до 0,01 мл в зависимости от предполагаемой степени загрязнения объекта) в жидкие сахарные питательные среды. Размножение в них кишечных палочек регистрируется по наличию брожения-расщепления углевода до кислоты и газа. Пересев на плотные дифференциально-диагностические среды и идентификация выросших колоний позволяют выяснить те объемы, в которых присутствовала кишечная палочка. Затем с помощью специальных таблиц, определяют ко ли-титр. Набор таблиц входит в ГОСТ.
Индекс — количество особей санитарно-показательного микроба, обнаруженного в определенном объеме (количестве) исследуемого объекта. Для воды, молока, других жидких продуктов — в 1 л, для почвы, и пищевых продуктов — в 1 г. Индекс — величина, обратная титру, поэтому перерасчет титра в индекс и обратно можно производить по формуле:
Соответственно для почвы и пищевых продуктов:
титр =———— ; индекс = —-—. (2)
Индекс чаще определяют путем применения мембранных фильтров или посева различных разведений исследуемых субстратов на питательные среды.
Выбор того или иного санитарно-показательного микроорганизма зависит от исследуемого объекта и конкретной задачи. Соответственно говорят, например, о титре или индексе протея или маслянокислых бактерий и т.п. Нередко (и во многих ГОСТах это узаконено) одновременно исследуется и ведется количественный учет двух или более санитарно-показательных микроорганизмов.Качественные показатели указывают на отсутствие (присутствие) микробов конкретных видов в определенной массе продукта.
Прямое выявление в пищевых продуктах патогенных или условно-патогенных микробов и их ядов проводится в соответствии с существующими нормативными документами. Обычно проверяют наличие микроорганизмов p.p.Salmonella, Staphylococcus, Cl.botulinum и их токсинов, Cl.perfringens, Bac.cereus и др. Согласно требованиям ГОСТов патогенные микроорганизмы и их токсины должны отсутствовать в определенном объеме (массе) материала, подвергнутого исследованиям (25, 50 г и т.д.).
Санитарно-микробиологическое исследование объекта на присутствие патогенных микроорганизмов проводится работниками СЭС в плановом порядке, а также внепланово — по эпидемическим показаниям. Для определения патогенных микроорганизмов могут быть использованы следующие методы :
• прямой посев исследуемого материала в питательные среды;
• предварительная концентрация патогенных микроорганизмов пропусканием исследуемого объекта (жидкой консистенции) через мембранные фильтры или посевом в среды накопления;
• обнаружение патогенных микроорганизмов методом заражения чувствительных животных (биопроба);
• применение ускоренных методов: серологических, люминесцентно-серологических и радиоизотопного.
Для иллюстрации последней группы методов ниже представлена общая характеристика ускоренных методов исследования воды. Наибольшее применение получил метод люминесцентно-серологический, который в настоящее время рекомендуется для обнаружения в воде микроорганизмов
p.p.Escherichia, Salmonella, Shigella, Vibrio и др. Метод иммунофлюоресценции основан на способности антител, предварительно обработанных различными флюорохромами (флюоресцеина изотиоцианат, родамина сульфохлорид, родамина сульфофторид и др.), адсорбироваться на поверхности микробной клетки и вызывать ее свечение. Метод флюоресцирующих антител применяется в трех модификациях: прямой, непрямой и непрямой метод с добавлением комплемента. При прямом методе_капшо исследуемой воды, в которой предполагается наличие патогенных бактерий, помещают на предметное стекло, обрабатывают специфической к искомому микроорганизму люминесцирующей сывороткой и наблюдают под люминесцентным микроскопом. На темном фоне препарата при положительном результате видна яркая флюоресценция по периферии клеток.
При непрямом методе обработка препаратов происходит в два этапа: специфической иммунной сывороткой выявляют присутствие соответствующих бактерий, на следующем этапе обнаруживают образовавшийся комплекс обработкой меченой иммунной сывороткой, содержащей антитела к глобулинам специфической сыворотки. Этот метод имеет существенное преимущество перед прямым, так как для выявления любых бактерий используется одна меченая сыворотка против антител — глобулинов, содержащихся в специфической сыворотке (как правило, глобулинов кролика).
При непрямом методе с добавлением комплемента препарат обрабатывают в 3 этапа: сначала специфической к искомому микробу иммунной сывороткой, затем — комплементом, который адсорбируется на комплексе антиген — антитело, и, наконец, иммунной противокомплементарной флюоресцирующей сывороткой.
Для повышения эффективности метода следует предварительно концентрировать бактерии в исследуемой воде на мембранных фильтрах центрифугированием или посевом в среды обогащения. В этом случае люминесцентно- серологическим методом удается обнаружить энтеробактерии при наличии в пробах воды даже единичных клеток в 1 мл. Метод флюоресцирующих антител рекомендуется применять при индикации в воде возбудителей туляремии, чумы, бацилл сибирской язвы. Однако люминесцентно-серологический метод является только сигнальным методом индикации патогенных бактерий в воде, и при положительном его результате должно проводиться тщательное бактериологическое исследование воды.
Для ускоренного обнаружения БГКП в воде был предложен радиоизотопный метод (Корш J1.E., 1978). Принцип метода заключается в определении количества БГКП по количеству метаболической двуокиси углерода, выделяемой при жизнедеятельности бактерий из элективных сред, меченных 14С. Результат можно получить через 5-6 ч.
Бактериологическое исследование качества и безопасности колбасных изделий.
При бактериологическом исследовании колбас определяют: общее количество микроорганизмов в 1 г продукта; характер микрофлоры; наличие бактерий группы кишечной палочки, сальмонелл, протея, анаэробов.
Пробы, отобранные для бактериологического исследования, обрабатывают следующим образом.
Колбасные изделия в оболочке помещают на металлическую тарелку, которую тщательно протирают тампоном, смоченным спиртом, и обжигают над факелом. Затем батоны разрезают продольно стерильным (фламбированным) ножом или скальпелем на две половинки, не рассекая противоположной стороны оболочки батона. Пробу снимают путем соскоба или среза фарша с обеих половинок всей поверхности разрезанного батона.
При исследовании поверхности продукта отбирают с различных участков образца 2—3 пробы (толщина среза 0,2— 0,5 см). Пробу с поверхности продукции без оболочки можно отобрать путем смыва. Для этого используют стерильные тампоны, смоченные стерильной водой; смыв производят 2—3 раза с различных участков поверхности образца.
Из отобранных проб (срезов или смывов) составляют среднюю для каждого образца отдельно. Средние пробы переносят в предварительно взвешенные стерильные бюксы, которые затем вновь взвешивают; по разнице массы определяют массу взятого образца.
Массу образца можно определять и объемным методом. Для этого используют специально подготовленные пробирки, на стенке которых, на уровне 10 мл жидкости, наносят черту (нарезка алмазом). В пробирки наливают 8 мл физиологического раствора или воды и стерилизуют. Соблюдая стерильность, небольшие кусочки пробы вносят в пробирки в количестве, обеспечивающем подъем налитой жидкости до нанесенной черты (по нижнему мениску).
Взвешенную пробу переносят в стерильную ступку и тщательно растирают, добавляя стерильный физиологический раствор или стерильную воду с расчетом разведения материала в соотношении 1 : 10.
Пробы продуктов плотной консистенции растирают в ступке, добавляя небольшое количество стерильного песка. При растирании проб вареных изделий мажущейся консистенции (ливерные колбасы и др.) стерильный песок можно не добавлять.
Общее количество микроорганизмов в 1 г продукта. Стерильной градуированной пипеткой берут 0,2 мл из верхнего слоя жидкости и переносят на середину дна стерильной чашки Петри. Затем в нее наливают 12—15 мл расплавленного и охлажденного до 45—50 °С мясо-пептонного агара. Осторожно покачивая чашку, внесенный материал смешивают со средой и равномерно распределяют по всей поверхности. Чашки с посевами помещают в термостат при 37 °С.
Через 48 ч чашки вынимают из термостата и подсчитывают число колоний (в глубине и на поверхности среды). Для определения количества микробов в 1 г продукта общее число колоний умножают на 5 и на степень разведения.
Характер микрофлоры. 0,1 мл взвеси наносят на поверхность мясо-пептонного агара, застывшего в чашках. Внесенную жидкость стерильным стеклянным шпателем равномерно распределяют по всей поверхности среды. Чашки с посевами помещают в термостат при 37 °С.
Через 24 ч чашки с посевами вынимают из термостата и определяют характер микрофлоры, просматривают колонии при помощи лупы или под малым увеличением микроскопа. Из колоний, подозрительных на кишечную палочку или патогенную микрофлору, приготавливают мазки и окрашивают их по Граму.
Бактерии группы кишечной палочки и сальмонеллы. 0,1 мл взвеси наносят на поверхность элективной среды (Эндо или Левина), застывшей в чашках. Внесенную жидкость равномерно распределяют по всей поверхности среды. Чашки с посевами помещают в термостат при 37 °С.
Через 24—36 ч чашки с посевами вынимают из термостата и просматривают посевы для того, чтобы определить наличие бактерий группы кишечной палочки и сальмонелл. На фуксинсульфитном агаре (среде Эндо) бактерии группы кишечной палочки образуют темно-красные колонии с металлическим блеском; паратифозные бактерии — круглые прозрачные или полупрозрачные с голубоватым оттенком.
На среде Левина бактерии группы кишечной палочки образуют черные колонии, окруженные светлой зоной или ободком; паратифозные бактерии растут в виде прозрачных нежно-розовых или розовато-фиолетовых колоний.
Из подозрительных колоний приготовляют мазки, окрашивают их по Граму и исследуют на подвижность. Дальнейшую идентификацию бактерий этой группы проводят в соответствии с действующим ГОСТом.
Присутствие протея. Посев материала выполняют по методу Шукевича. 0,1 мл взвеси или небольшой кусочек подготовленной пробы вносят в конденсационную воду скошенного мясо-пептонного агара, не касаясь поверхности среды, и помещают в термостат при 37 °С.
Через 18—24 ч посевы просматривают. Обращают внимание на образование ползучего вуалеобразного налета с голубоватым оттенком. Наличие палочки протея подтверждают микроскопией посева и обнаружением грамотрицательных, активно подвижных палочек.
Присутствие анаэробов. 2—3 мл взвеси вносят в две пробирки с предварительно прокипяченным и быстро охлажденным до комнатной температуры печеночным бульоном (налитым на 2/3 высоты пробирки). Перед помещением в термостат одну из пробирок вновь прогревают при 80 °С в течение 20 мин.
Посевы инкубируют 5 сут при 37 °С. При просмотре посевов обращают внимание на помутнение, газообразование или другие изменения в печеночном бульоне. При подозрении на наличие микробов посев микроскопируют и делают пересев в расплавленный и охлажденный до 50 °С мясо-пептонный агар, добавляя 2 % глюкозы. Агар налит в пробирку на 2/3 ее высоты. По образованию колоний в глубине этой среды и по газообразованию судят о наличии анаэробной микрофлоры, идентификацию которой проводят в соответствии с действующим ГОСТом.
Род Proteus относится к семейству Enterobacteriaceae и включает следующие виды: Pr. vulgaris, Pr. mirabilis, Pr. morganii, Pr. rettgeri.
Морфология. Бактерии рода Proteus — полиморфные палочки размером 0,5—0,6X1,2—3 мкм, подвижные (перетрихи) грамотрицательные, не образующие спор и капсул. Факультативные анаэробы (рис. 3).
Устойчивость . Бактерии из рода Proteus погибают при 60°С в течение 1 ч, при 80°С — за 5 мин.
Proteus устойчивы к низким температурам, переносят трехкратное попеременное замораживание и оттаивание. 1%-ный раствор фенола вызывает гибель протея через 30 мин.
Санитарно-показательное значение бактерий рода Proteus . Микроорганизмы этой группы, в частности вид Pr. vulgaris, в небольшом количестве встречается как в кишечнике человека и животного, так и во внешней среде. Он является возбудителем гнилостных процессов в природе. Вид Pr. mirabilis — обитатель кишечника человека и животных. В отличие от уже рассмотренных санитарно-показательных микроорганизмов (бактерий группы кишечных палочек, энтерококков, Cl. periringens), палочки Proteus встречаются в кишечнике человека сравнительно в небольшом количестве (в 5—10% случаев) ; в кишечнике лошадей, крупного рогатого скота и других животных их обнаруживают чаще, особенно летом. Из вышеизложенного следует, что бактерии рода
Proteus не имеют самостоятельного значения как показатели фекального загрязнения. Они не удовлетворяют основным требованиям санитарно-показательных микро-организ.мов. Тем не менее бактерии рода .Proteus имеют определенное санитарно-показательное значение, так как обнаружение большого количества Pr. vulgaris в почве, воде свидетельствует о содержании в них и разрушении органических веществ животного происхождения. При загрязнении объектов внешней среды фекальными стоками, как правило, выявляют Pr. mirabilis.
Как санитарно-показательные микроорганизмы бактерии рода Proteus вместе с Е. coli, энтерококком, Cl. perfringens и бактериофагом применяют для санитарно-гигиенической оценки почвы, воды открытых водоемов.
Обнаружение протея в пищевых продуктах свидетельствует о гнилостном процессе. Степень обсеменения мясных продуктов (мяса, колбас и др.) бактериями рода Proteus устанавливают по титру протея. Для этого в конденсационную воду свежескошенного агара вносят по 0,1-мл десятичных разведений исследуемого материала. Посевы выращивают при 37°С в течение 18—48 ч. Титр определяют по наименьшему количеству засеянного продукта, в котором обнаружен рост палочки протея в виде Н-формы.
Доброкачественные продукты: колбасные изделия, студни, жареная птица, кулинарные изделия из рубленого мяса— не должны содержать бактерий рода Proteus.
Свидетельство и скидка на обучение каждому участнику
- Для учеников 1-11 классов и дошкольников
- Бесплатные сертификаты учителям и участникам
Описание презентации по отдельным слайдам:
Санитарная микробиология – направление медицинской микробиологии, изучающее микрофлору окружающей среды и ее влияние на здоровье человека и на состояние среды его обитания.
Задачи санитарной микробиологии:
Исследование объектов внешней среды (воздух, почва, вода) для оценки их воздействия на здоровье человека.
Обследование здоровых лиц (работников пищевых, детских, лечебных учреждений) на носительство патогенных микроорганизмов.
Исследование пищевых продуктов с целью их гигиенической характеристики и эпидемиологической оценки; проведение специальных анализов на наличие патогенных микробов при пищевых отравлениях.
Контроль за дезинфекционными мероприятиями.
Принципы проведения санитарно- микробиологических исследований
Пробы отбирают с соблюдением всех условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта.
Исследования проводят быстро; допускается хранение материала в холодильнике не дольше 6 - 8 часов.
Для получения объективных результатов отбирают несколько проб из разных участков объекта, а также проводят повторные отборы и анализы проб.
Используют только стандартные и унифицированные методы исследования.
В работе используют комплекс тестов:
а) прямые – выявляют патогенные микроорганизмы,
б) косвенные – указывают на загрязнение объектов окружающей среды выделениями человека и животных.
Интерпретацию результатов санитарно- микробиологических исследований проводят с учетом других гигиенических показателей (химических, физических, органолептических и др.).
Методы санитарной микробиологии
Микроскопический
Бактериологический
Биологический (в основном для определения токсинов)
Микологические
Вирусологические
Проведение санитарно- микробиологических исследований направлено на:
Определение общего микробного числа (ОМЧ) исследуемого объекта;
Определение и титрование санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ) в исследуемом объекте;
Выявление в исследуемых объектах патогенных микроорганизмов.
Общее микробное число (ОМЧ) – это общее количество микроорганизмов в единице объема или массы исследуемого объекта (в 1 мл или в 1 г).
Чем выше ОМЧ объекта, тем выше возможность присутствия в нём патогенных микроорганизмов.
Методы определения ОМЧ:
- прямой подсчет бактерий в счетных камерах с помощью обычного или фазово-контрастного микроскопа,
- количественный посев на плотные питательные среды.
Определение ОМЧ воздуха
Проводится в закрытых помещениях
Используют:
седиментационный метод
открытые чашки Петри со стерильной питательной средой расставляют в помещении. Бактерии из воздуха оседают на поверхность среды, затем чашки закрывают, инкубируют и подсчитывают количество выросших колоний.
аспирационный метод
Используют специальные аппараты, например, аппарат Кротова.
Скорость протягивания воздуха в среднем 25 л/мин.
ОМЧ определяют в 100 л воздуха.
На пути струи воздуха помещают чашку Петри с питательной средой, в результате чего бактерии из воздуха засеваются на среду. Затем инкубируют посевы и подсчитывают число колоний.
Нормы ОМЧ регламентированы для воздуха различных помещений.
Санитарно-показательные микроорганизмы (СПМ)
- это микроорганизмы, указывающие на загрязнение внешней среды выделениями человека или животных.
Присутствие СПМ в объекте внешней среды указывает на возможность наличия в этом объекте других, в т.ч. патогенных для человека, микроорганизмов, непосредственное обнаружение которых затруднено.
СПМ являются постоянные обитатели естественных полостей человека или животных, которые постоянно выделяются в окружающую среду.
СПМ делят на 3 группы:
группа А включает обитателей кишечника человека и животных, их расценивают как индикаторы фекального загрязнения (эшерихии, энтерококки, протеи, клостридии и др.),
группа В включает обитателей верхних дыхательных путей, их расценивают как индикаторы орального загрязнения (стрептококки, стафилококки),
группа С включает сапрофитические микроорганизмы, обитающие во внешней среде, их расценивают как индикаторы процессов самоочищения (бактерии-аммонификаторы, бактерии-нитрификаторы, грибы, актиномицеты, синезеленые водоросли).
СПМ различных объектов внешней среды
При количественном определении СПМ результаты исследований выражаются в 2 величинах:
- Индекс СПМ (например, коли-индекс)
- это количество СПМ, обнаруженное в единице объема или массы исследуемого объекта.
Для определения индекса СПМ используют:
1) метод мембранных фильтров,
2) метод бродильных проб.
- Титр СПМ (например, коли-титр)
- это наименьшее количество исследуемого объекта, в котором обнаружена хотя бы одна особь СПМ.
Сущность метода мембранных фильтров заключается в фильтровании определенных объемов исследуемой жидкости (или твердого вещества, разведенного в воде) через мембранные фильтры, на которых задерживаются бактерии. Фильтры переносят на чашки со средой Эндо, инкубируют при + 37°, а затем подсчитывают выросшие на фильтре колонии кишечной палочки и проводят перерасчет на 1 л, 1 кг или 1 г в зависимости от исследуемого материала.
Сущность метода бродильных проб заключается в посеве определенных объемов исследуемого субстрата на глюкозопептонную среду с индикатором и поплавком (для определения ферментации глюкозы), которые выдерживают при + 37°. Из всех помутневших пробирок делают высевы на среду Эндо с последующей идентификацией выросших колоний.
Коли-титр — величина, обратная коли-индексу.
Патогенные микроорганизмы (ПМ)
Обнаружение ПМ в объектах внешней среды производится:
путем прямого посева на питательные среды
путем посева после предварительной концентрации микроорганизмов с помощью фильтрации, центрифугирования, осаждения коагулянтами и т.д.
Идентификация ПМ производится согласно общепринятым схемам.
Согласно ГОСТу: “патогенные микроорганизмы и их токсины должны отсутствовать в питьевой воде и пищевых продуктах”.
Классификация
Семейство Enterobacteriobacteriaceae
Род Klebsiella включает в себя 4 вида: K.pneumoniae, K.oxytoca, K.planticola, K.terrigena.
В патологии человека наибольшее значение имеют K.oxytoca и K.pneumoniae, состоящий из трех подвидов: K.pneumoniae, K. ozaenae и K.rhinoscleromatis.
Относятся к V группе по Берджи (гр- мелкие палочки с закругленными концами, факультативный анаэроб).
Не имеют спор, неподвижны, имеют микрокапсулу
Оппортунистические инфекции (от лат. opportunus — удобный, выгодный, и лат. infectio — заражение, также англ. opportunity — возможность) — заболевания, вызываемые патогенами (бактерии, вирусы, грибы, простейшие), которые обычно не приводят к болезни у здоровых особей (с нормальной иммунной системой). Например, оппортунистическими инфекциями заражаются лица с иммунодефицитными состояниями.
Внутрибольничные инфекции (также госпитальные, нозокомиальные) — согласно определению ВОЗ, любые клинически выраженные заболевания микробного происхождения, поражающие больного в результате его госпитализации или посещения лечебного учреждения с целью лечения, а также больничный персонал в силу осуществления им деятельности, независимо от того, проявляются или не проявляются симптомы этого заболевания во время нахождения данных лиц в стационаре
Klebsiella pneumoniae классифицируется как условно-патогенный микроб, находящийся в норме в определенных органах (например, в ЖКТ) в симбиотическом отношении с человеческим организмом, а в иных ситуациях являющийся причиной инфекционных заболеваний (например, при снижении общего и местного иммунитета).
Может вызвать пневмонию, плевриты, перикардиты, гаймориты, инфекции мочевыводящих путей, мозговых оболочек, суставов, абсцессы различной локализации, пищевые токсикоинфекции и даже сепсис.
Klebsiella rhinoscleromatis вызывает склерому - гранулематозное поражение слизистой оболочки носа (риносклерома) и верхних дыхательных путей. Характерно появление плотных узлов красного, розового, бледного цвета, сливающихся в опухоль хрящевой плотности. Поражению подвергаются ноздри, мягкое нёбо, язычок укорачивается, глотка и гортань стенозируются.
Klebsiella ozaenae вызывает озену — зловонный насморк, характеризующийся атрофическим процессом слизистой оболочки и костных стенок полости носа, сопровождающийся образованием секрета, засыхающего в зловонные корки, плотным слоем покрывающие слизистую оболочку. Могут поражаться глотка, гортань, трахея.
Klebsiella pneumoniae
(окраска по Бурри-Гинсу)
Клебсиеллы не требовательны к питательным средам. В МПБ образуют диффузное помутнение, а на МПА растут в виде слизистых, блестящих колоний.
Принципы микробиологической диагностики клебсиелл основаны на выделении и идентификации возбудителя.
Материал для исследований клебсиелл — кровь, СМЖ, гнойное отделяемое, испражнения, смывы и др.
Образцы засевают на селективно-дифференциальную среду К-2 (с мочевиной, рафинозой и бромтимоловым синим).
Колонии клебсиелл сочные и блестящие, имеют цвет от жёлтозеленого до голубого. Культуральные и биохимические особенности клебсиелл определяют на минимальном дифференцировочном ряду
Антигенную структуру клебсиелл исследуют в РА живой культуры диагностическими К-антисыворотками.
Для выявления AT применяют РСК
Род Proteus относится к семейству Enterobacteriaceae и включает в себя три вида. Важную роль в патологии, особенно в качестве возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний и пищевых токсикоинфекций, играют два вида:
P. vulgaris и P. mirabilis.
Все представители рода Proteus – грамотрицательные палочки с закругленными концами, размером 0,4 – 0,6 х 1 – 3 мкм, спор и капсул не образуют. Склонны к полиморфизму, наблюдаются кокковидные и нитевидные формы. Иногда встречаются и неподвижные варианты, лишенные жгутиков (О-форма). Факультативные анаэробы. Температурный оптимум 37 °С, рН 7,2 – 7,4; температурные пределы роста от 20 до 38 "С.
Читайте также: