Посев по мельникову цареву

Обновлено: 05.10.2024

На сайте указан максимально возможный срок выполнения исследования. Он отражает время выполнения исследования в лаборатории и не включает время на доставку биоматериала до лаборатории.

Номенклатура МЗРФ (Приказ №804н): A26.07.002.000.01 Микробиологическое (культуральное) исследование материала из десневого кармана на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы

Подготовка к исследованию

Взятие биологического материала проводится строго до начала примения антибактериальных и химиотерапевтических препаратов или не ранее, чем через 10-14 дней после их отмены. Взятие биоматериал натощак или через 2-3 часа после еды.

Описание

Метод диагностики инфекций полости рта, заключающийся в количественном посеве патологического материала на питательные среды, инкубации их в аэробных, микроаэрофильных и анаэробных условиях, выделении возбудителей инфекции и определении их концентрации (КОЕ/мл) и чувствительности к антимикробным препаратам. Основными этиологическими факторами воспалительных заболеваний полости рта являются микроорганизмы, входящие в состав нормальной микрофлоры. Состав этих микроорганизмов чрезвычайно широк и в настоящее время насчитывает более 500 видов. Их характерная особенность — выработка экзо- и эндотоксинов, которые могут приводить к хроническому воспалению и разрушению тканей зубов, десны, альвеолярного отростка, кровоточивости, нарушению микроциркуляции, дистрофическим изменениям, рассасыванию костной ткани и выпадению зубов. Возбудители периодонтита оказывают не только локальное, но и системное действие, которое проявляется поражением иммунной, эндокринной, сердечно-сосудистой и некоторых других систем организма, приводит к увеличению риска развития инсультов, инфарктов миокарда и другим патологиям. Своевременная микробиологическая диагностика позволяет сделать правильный выбор препарата и метода системной терапии с использованием антибиотиков; необходима для контроля и оценки эффективности выбранного метода лечения. При установлении этиологического фактора врач-стоматолог может конкретизировать диагноз и дать прогноз развития болезни.

Показания к назначению

дифференциальная диагностика этиологического фактора воспалительного процесса;
оценка эффективности проводимой терапии.

Интерферирующие факторы

Причины отклонения показателей от нормы (повышенные значения)

выделение представителей патогенной флоры свидетельствует об этиологическом факторе выделенного возбудителя в клинической картине. Определение чувствительности к антибактериальным препаратам осуществляется врачом микробиологом и регламентируется методическими указаниями. R-возбудитель устойчив S возбудитель чувствителен I- возбудитель умеренно устойчив к антибактериальному препарату.Выявление условно-патогенной флоры и ее значимость в развитии заболевания зависит от количества выделенного возбудителя для данной локализации

Причины отклонения показателей от нормы (сниженные значения)

отсутствие патогенной флоры -норма. Присутствие условно- патогенной флоры в количестве не превышающем диагностического значения-норма для данной локализации

Метод:

Анализатор:

Система автоматизации микробиологического посева Previ Isola, bioMerieux, Франция; Система идентификации микроорганизмов методом масс-спектрометрии VITEK MS, bioMerieux, Франция; Автоматизированная система для окрашиванию по Граму PREVI Color Gram, bioMerieux, Франция; Бактериологический автоматический анализатор VITEK 2, bioMerieux, Франция; Бактериологический анализатор Adagio, Bio-Rad Laboratories, США;

Физиология микробов - раздел микробиологии изучающий жизнедеятельность, питание, дыхание, рост и размножение бактерий и других прокариот.

в основе разработки методов культивирования бактерий, получения чистых культур.
важно для понимания патогенеза заболеваний, разработки новых методов диагностики, лечения и профилактики заболеваний.
привело к прорыву в понимании природы заболеваний, лечения и профилактики.

Катаболизм (окисление в-в, выделение Е) – у бактерий дыхание и брожение
Амфиболизм (промежуточный обмен – превращения в-в)
Анаболизм (построение клетки)

Простые (только из АК): пепсин, трипсин, лизоцим
Сложные – холоферменты (апобелок и кофактор-может называться коферментом или простетической группой): сукцинатдегидрогеназа (содержит ФАД), аминотрансферазы (содержат пиридоксальфосфат), пероксидаза (гем).

Холофермент – если константа диссоциации сложного белка настолько мала, что все полипептидные цепи в растворе связаны со своими кофакторами

Фермент – белок четвертичной структуры, связанный с каким – либо сахаром, т.е. он является гликопротеином.

Химически кофермент и простетическая группа – это витамины или комплексные соединения металлов.

Высокая специфичность фермента обусловлена особой формой активного центра, точно соответствующего молекуле субстрата. Причина изменения скорости реакции – сближение молекул субстратов при их захвате активным центром, образование хим.связей между субстратами и активным центром, направляющих протекание реакции по более легкому пути, исключительная гибкость формы активного центра, позволяющая ему принимать наилучшее для скорости строение на каждом этапе реакции.

Растворимые коферменты (присоединяется к ферменту во время реакции, химически изменяется, а затем освобождается. Первоначальная форма кофермента регенерируется во второй независимой реакции (кофермент – органический кофактор)
Простетические группы – кофермент, который прочно связан с ферментом и во время реакции его не покидает

Аллостерический центр – центр, регулирующий активность фермента, который пространственно отделен от АЦ и есть не у всех ферментов. Их может быть несколько. Аллостерические эффекторы – низкомолекулярные в-ва связывающиеся с АлЦ (м.б.активаторами и ингбиторами)

Субстрат – питательные вещества, поступающие в клетку и участвующие в реакциях метаболизма, являющихся точкой приложения действия ферментов.

Бактериальный (культуральный) метод микробиологических исследований (диагностики)

-метод диагностики инфекционных заболеваний бактериальной природы, основанный на выделении чистой культуры возбудителя и ее идентификации по совокупности морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, антигенных и др. свойств

быть питательными- содержать необходимые в-ва в легко усваиваемом виде (иногда вносят витамины и АК)
иметь оптимальную концентрацию водородных ионов – рН, тк это влияет на проницаемость ЦПМ, след-но, и на питание. Для большинства нужна слабощелочная среда рН 7.2-7.4 Поэтому у среды должна быть буферность – нейтрализовать метаболиты
быть изотоничными: осмотическое давление среды= осмотическому давлению внутри клетки (для многих – 0.5% раствор хлорида натрия)
быть стерильными
плотные среды должны быть влажными и иметь оптимальную для микроорганизмов консистенцию
обладать определенным окислительно-восстановительным потенциалом – определенным соотношением в-в принимающих и отдающих электроны
быть по возможности унифицированным – обладать определенным соотношением определенных в-в

Плотные и полужидкие среды готовят из жидких, к которым для получения среды нужной консистенции прибавляют обычно агар-агар (Вальтер Хессе) или желатин (Роберт Кох)

Агар-агар - полисахарид, получаемый из определенных сортов морских водорослей. Он не является для микроорганизмов питательным веществом и служит только для уплотнения среды. В воде агар плавится при 80-100° С, застывает при 40-45° С.

Желатин - белок животного происхождения. При 25-30° С желатиновые среды плавятся, поэтому культуры на них обычно выращивают при комнатной температуре. Плотность этих сред при рН ниже 6,0 и выше 7,0 уменьшается, и они плохо застывают. Некоторые микроорганизмы используют желатин как питательное вещество - при их росте среда разжижается.

Свернутая сыворотка крови, свернутые яйца, картофель, среды с силикагелем

Обычно используют среды в сухой форме: порошкообразные, водорастворимые капсулы, гранулированные

Простые - пригодны для выращивания многих видов микроорганизмов, неприхотливых к составу, и применяются как основа для специальных питательных сред для более требовательных видов патогенов. Примеры: МПБ, МПА, среда Хоттингера, ГРМ, тиогликолевая среда, пептонная вода
Сложные - применяют в тех случаях, когда микроорганизмы не растут на простых средах. К простым средам добавляют сыворотку, белок и другие в-ва, нужные для роста бактерий. Примеры: кровяной, сывороточный агар, сывороточный бульон, асцитический бульон, асцит-агар и другие.
Универсальные - на них микроорганизмы растут быстрее и более интенсивно благодаря большому количеству питательных добавок – аминокислот, витаминов, факторов роста; для патогенов важно наличие компонентов крови – гемоглобина или гемина, менадиона, цельных или гемолизированных эритроцитов Примеры: кровяной агар, шоколадный агар, гемин-агар, синтетические среды.

4. Селективные (элективные) - на них одни микроорганизмы растут быстрее и более интенсивно, чем другие виды бактерий благодаря селективным добавкам (желчь, краски, антибиотики и др.), которые способны подавлять развитие одних видов микроорганизмов, но не влияют на другие виды. Применяют на первом этапе выделения чистой культуры бактерий.

Примеры: ЖСА для стафилококка, 1 % щелочная пептонная вода - для холерных вибрионов, сывороточные среды Ру и Леффлера – для возбудителей дифтерии, среды Плоскирева, Левина – для возбудителей дизентерии, Мюллера - для тифо-паратифозных бактерий (сальмонелл), для граммотрицательных – добавление трифенилметановых красителей (кристаллический фиолетовый, малахитовый зеленый), для стафилококков – можно добавить хлористый натрий в концентрации 7.5%. Жидкие элективные среды – среды накопления (н-р пептонная вода)

Основная питательная среда – для размножения
Определенный хим.субстрат – отношение к которому является диагностическим признаком для МО
Цветной индикатор – изменение окраски говорит о протекании определенных реакций

Способность расщеплять белки
Способность расщеплять углеводы и спирты
Способность обесцвечивать красители
Способность усваивать определенные вещества

Среда Левина: эозин и метиленовый синий. Был черно-синий цвет – стал черный с металлическим оттенком, благодаря сбраживающим бактериям

6. Хромогенные среды - позволяют выявить специфическую ферментативную активность микроорганизмов, характерных для группы или для отдельного вида микроорганизма. Содержащийся фермент метаболизирует бесцветный хромогенный субстрат, образуя окрашенный продукт реакции. Идентификация возможна уже на этапе первого посева- сокращение времени исследования

7. Транспортные среды - предназначены для сохранения жизнеспособности микроорганизмов от момента взятия биоматериала до посева для диагностики. Сохраняет жизнеспособность до 72 часов. Состоит из пластиковой пробирки, питательной среды и аппликаторов с тампоном. Не содержит пит в-в, но сбалансирована по буферному и электролитному составу – дает выживать, но не размножаться. Примеры: CVTR (вирусология), Эймса (аэробы и анаэробы), Кери-Блэйр (аэробы и анаэробы), Стюарт (прихотливые микроорганизмы), Ди-Ингли (нейтрализация антисептиков)

8. Двухфазная среда - система с комбинацией 20\7 мл агара, омываемого 40\20 мл бульона. Бульонные среды богаты факторами роста, что позволяет выращивать как факультативные, так и облигатные анаэробы. Нужна для выявления гемогенных культур и их предварительной идентификации. Твердая фаза – стерильный питательный агар 30 мл, мясопептонный или сахарный агар скошенный во флаконе 100 мл. Жидкая фаза – стерильный бульон мясопептонный или сахарный, асептически внесенный во флакон с застывшим скошенным агаром. Уровень бульона должен достигать половины высоты скощенной п-ти агара - 30-40 мл. После внесения образца крови в бульон, их тщательно перемешивают и осторожно, чтобы не смочить пробку, смачивают ей скошенную п-ть агаара. Гемокультура развивается не только в бульоне, но и на агаре , что позволяет выявить ее частоту и облегчает ее идентификацию.

Посев производится на плотные или жидкие питательные среды. Посев производится с помощью бактериологической петли либо пастеровской пипетки. Все манипуляции связанные с посевом (пересевом) микробных культур производятся над (рядом) с пламенем горелки.

Перед посевом, петлю, сначала, прокаливают над пламенем горелки, затем остужают (обычно о чистый край питательной среды), и только потом производят манипуляции.

Посев в жидкую среду (бакт.петлю погружают в среду. Если материал вязкий и не снимается с петли, его растирают об стенку пробирку, а затем смывают жидкой средой.)
Посев на скошенный агар
Посев в плотную пит.среду

1Посев по Мельникову-Цареву – полуколичественная оценка с примерным определением микробной обсемененности в 1 мл исслед м-ла. Для этого используется специальная таблица с учетом сектора и выросших там колоний.

2Истощающий штрих – змеевидный штрих, можно получить изолированные колонии

Спиральный посев- используется спец аппаратура при посеве, а также при учете результатов посева, которые будут автоматически задокументированы

Маленькая победоносная страна. НАТО накачивает Украину оружием и боеприпасами. Чем это опасно для республик Донбасса?

Работающий на Украине американский политолог Брайан Меффорд в разговоре с Financial Times сказал, что Царев является токсичным политиком, который практически не имеет шансов получить поддержку в Киеве. Другой источник издания — бывший сотрудник одной из западных разведслужб — предположил, что Москва может рассматривать бывшего депутата в качестве временной фигуры.

Ранее в феврале Царев обвинил европейских политиков в попытках отвлечь Россию от милитаризации Украины. По его мнению, для этого иностранные послы и представители Запада ездят в Москву, встречаясь с российским президентом Владимиром Путиным.

Мастер спорта по карате Александр Царёв вызвал на бой известного тележурналиста Новосибирска Николая Лукинского, а потом признался, что пошутил.

Обращение к Николаю Лукинскому Александр Царёв опубликовал на своей странице в Instagram. Царев отметил, что наблюдает за Лукинском в соцсетях, где тележурналист выкладывает видео с тренировок по боксу.