Alloscardovia omnicolens в посеве

Обновлено: 05.10.2024

1. Эпителий

Уменьшение или отсутствие эпителия в мазке – на атрофические изменения, недостаток эстрадиола или избыток андрогенов.

2. Лейкоциты

влагалища принято 10,
цервикального канала – до 25,
а в уретре – не более 5 лейкоцитов в поле зрения.

Повышение показателя – очевидно, свидетельствует о воспалении, а полное отсутствие может иметь место в норме в самом начале цикла.

Слизь

Флора

Преобладающей флорой женских половых путей в норме у женщин репродуктивного возраста, как известно, являются лактобактерии (или палочки Дедерлейна). Количество которых может быть от умеренного до обильного, в том зависимости, в том числе, от фазы менструального цикла.

Патологические элементы

Присутствия мицелия грибов, трихомонад, диплококков (в том числе и возбудитель гонореи), лептотрикса, мобилункуса и прочих патогенных микроорганизмов в нормальном мазке не допускается, даже в минимальном количестве. А их выявление – серьезный повод незамедлительно обратиться за лечением.

МОРФОЛОГИЯ и СИСТЕМАТИКА БИФИДОБАКТЕРИЙ

Рис.1. Рост бифидобактерий в полужидкой питательной среде.

Морфология бифидобактерий

Морфология (биология) — наука о форме и строении организмов

Все представители рода Bifidobacterium – грамположительные, неподвижные, неспорообразующие, не образующие в процессе жизнедеятельности газы, анаэробные (однако, некоторые виды могут быть аэротолерантными), каталазо-отрицательные (кроме Bifidobacterium indicum и Bifidobacterium asteroides), сахаролитические микроорганизмы (Biavati et al., 2000; Leahy et. al., 2005). Все они хемоорганотрофы, активно сбраживают углеводороды с образованием преимущественно уксусной и молочной кислот в молярном соотношении 3:2, СО₂ не образуют. Некоторые виды могут расти в атмосфере, обогащенной до 10% СО₂. Их рост прекращается при рН ниже 4.5 или выше 8.5. Как правило, при окрашивании препарата бифидобактерий по Граму, для них характерна биполярность. Однако и это правило не без исключения, так как некоторые штаммы бифидобактерий при прокрашивании приобретают вид клеток, содержащих гранулы, что не отвечает характерной для бифидобактерий биполярности. Иногда они похожи на цепочку кокков (Biavati et al., 2006).

Форму клеток бактерий из рода Bifidobacterium обычно описывает как плеоморфную. Плейоморфизм меняется в зависимости от вида. Некоторые виды представлены большим разнообразием клеточных форм, в то время как другие показывают гомогенную морфологию клеток. Их размер составляет 0.5-1,3 × 1.5-8 мкм 2 . Они могут располагаться поодиночке, в парах, образовывать фигуры V-образной формы. В зависимости от условий культивирования, клетки бифидобактерий демонстрируют значительный плеоморфизм (состояние, при котором индивидуум принимает ряд различных форм во время своего жизненного цикла). Было показано, что избыток в среде для культивирования N-ацетилглюкозамина, аланина, глутаминовой кислоты, серина и ионов кальция влияет на форму клеток бифидобактерий (Nebra et. al., 1999; Tharmaraj et al., 2003). На плотных питательных средах бифидобактерии образуют разнообразные по форме и цвету колонии: плоские, полушаровидные, блестящие, шероховатые, окруженные валиком, имеющие более темный центр, от белого и серого до темно-коричневого. Размеры колоний составляют от 0.5 до 5.0 мм (Домотенко и др., 2014).

Все описанные на данный момент виды бифидобактерий распределены по следующим основным экологическим нишам: кишечник человека, полость рта, вагинальная полость, желудочно-кишечный тракт животных (Бондаренко и др., 2007), кишечник насекомых, кисломолочные продукты и сточные воды (табл.1). Однако две последние экониши – это вторичные места обитания бифидобактерий (Домотенко и др., 2014).

ВИДЫ (ТИПОВЫЕ ШТАММЫ) БИФИДОБАКТЕРИЙ

Таблица 1. Типовые штаммы видов рода Bifidobacterium, их обозначения в мировых коллекциях микроорганизмов и происхождение

Зубной кариес и ротовая полость человека; фекалии взрослого человека; влагалище человека; абсцессы в аппендиксе

DSM – Deutsche Sammlung von Mikroorganismen: Германская коллекция микроорганизмов и культур клеток
ATCC – American Type Culture Collection: Американская коллекция штаммов, клеточных линий и других биоресурсов для контроля качества и научных исследований (Манассас, VA, США)
LMG – Bacteria Collection Universiteit Gent: Бельгийская координированная коллекция микроорганизмов, Гентский университет

История систематики бифидобактерий (таксономия)

Систематика (таксономия) организмов заключается в распределении (классификации) их по определенным группам, каждая из которых имеет своё название: класс, порядок, семейство, род, вид. Вид - основная таксономическая единица. Классификация всех живых существ основана почти полностью на морфологических признаках организмов. У бактерий классификация имеет специфические особенности вследствие немногочисленности их морфологических признаков. Современная микробиология для классификации использует комплекс признаков: морфологические (форма клеток, наличие и характер расположения жгутиков, способ размножения, окраска по Граму, способность к образованию эндоспор; физиологические особенности (способ питания, получение энергии, состав продуктов обмена, отношение к воздействию температуры, рН, кислорода и др. факторам); культуральные (характер роста на различных питательных средах культуры бактерии; на жидких средах - наличие пленки, мути, осадка; на плотных средах - тип колоний и их особенности). Большинство классификаций бактерий является искусственными. Они предназначены для определения той или иной группы микроорганизмов, представляющих интерес для исследователей. В отличие от искусственной естественная отражает постепенное развитие (эволюцию) живых организмов.

Впервые описал бифидобактерии Тисьер примерно в 1900 году (Poupard et al., 1973). Он выделил из фекалий вскормленного грудью младенца культуру анаэробных бактерий, клетки которых обладали специфической Y-образной морфологией. Тисьер дал им название Bacillus bifidus. Позже Холланд назвал штамм, выделенный Тисьером Lactobacillus bifidus (Holland, 1920). А в 1924-ом году Орла-Йенсен отнёс род Bifidobacterium к отдельному таксону* (Orla-Jensen, 1924; Prasanna et al., 2014).

В 1957-м году Денерт впервые обнаружил существование множества биотипов внутри рода Bifidobacterium и предложил систему дифференцировки пяти групп этих бактерий, которая была основана на характере сбраживания ими углеводов (Dehnert, 1957).

На основании биохимических и серологических характеристик, вдобавок к уже известной на тот период B. bifidum, Реутер в 1963-м году выделил ещё семь видов бактерий, относящихся к роду Bifidobacterium, и предложил схему их идентификации. В роде Bifidobacterium Реутер выделял следующие виды: B. bifidum var. a и b; B. infantis; B. parvulorum var. a и b; B. breve var. a и b; B. liberorum; B. lactentis; B. adolescentis var. a, b, c и d; B. longum var. a и b (Reuter, 1963).

В 1969-м году Митсуока предложил иную схему классификации бифидобактерий. По ней, во-первых, к виду B. longum были добавлены два новых биотипа (B. longum subsp. animalis a и b), а во-вторых, к уже известному разнообразию бифидобактерий было добавлено два новых вида (B. thermophilum и B. pseudolongum), выделенных из фекалий животных (Mitsuoka, 1969).

В том же году Скардови с сотрудниками выделили из рубца крупного рогатого скота B. ruminale (впоследствии оказалось, что этот вид идентичен B. thermophilum) и B. globosum (Scardovi et al., 1969). Тогда же Скардови и Трователли выделили из кишечника медоносных пчёл три новых вида (B. asteroides, B. indicum и B. coryneforme) с морфологией отличной от уже известных представителей этого рода (Scardovi, Trovatelli, 1969).

Благодаря использованию молекулярных методов, а именно анализу сиквенсов 16S рибосомальной РНК/ДНК, удалось грамотно классифицировать представителей рода Bifidobacterium (Ventura et al., 2007; Downes et al., 2010).

Только практически полное определение последовательности генов 16S рРНК у исследуемых штаммов бактерий и их сравнение с аналогичными последовательностями, помещенными в международную базу GenBank, позволяет говорить точно об их отношении к роду Bifidobacterium (или др. родам).

На рисунке 3 представлены микрофотографии, демонстрирующие типичную для представителей рода Bifidobacterium клеточную морфологию.

Рис.3. Микрофотографии окрашенных метиленовым синим фиксированных препаратов некоторых выделенных бифидобактерий (х100 иммерсия ).

Таблица 2 ‑ Дифференцирующие особенности биологических свойств бифидобактерий

Reuter, 1963; из фекалий взрослых людей, обезьян и собак; сточных вод, рубца крупного рогатого скота (КРС)

55; В. dentium- 16- 45%; В. adolescentis - 20- 57%; В. magnum - 26 %; В. bifidum - 25 %; В. minimum - 25 %

57; В. eatenulatum -50- 80%; В. adolescentis - 30%; В. choerinum - 25 %; В. suis - 25 %; В. minimum - 25 %

Scardovi, Crociani, 1974; из зубов, пораженных кариесом; из фекалий взрослых людей и младенцев, из ротовой полости и вагины человека

Scardovi, Trovatelli, Crociani, Sgorbati, 1969; из фекалий свиней, молочных телят, крыс, кроликов, ягнят; из рубца КРС и сточных вод

64; В. globosum -50 -67%; В. animalis - 26 -31%; В. pullorum - 25 %; В. thermophilum -15-25 %; В. adolescentis - 25%

66; В. pseudolongum - 45-50 %; В. pullorum - 37 %; В. indicum - 44 %; В. globosum - 50 %; В. asteroides - 50 %

62; В. catenulatum - 25%; В. seudolongum - 9-27 %; В. angulatum - 20 %; В. dentium - 20 %; В. animalis - 20 %

Идентификация любого штамма начинается с описания физиологических характеристик микроорганизмов. Однако, не всегда знание данных признаков позволяет с уверенностью определить систематическую принадлежность к тому или иному роду. Широко известен полиморфизм бифидобактерий, что также затрудняет их определение. Вилочковидная форма бифидобактерий как правило возникает на бедных средах. При выделении новых культур используют богатые среды, поэтому часто наблюдаются прямые палочки , коккобациллы , порой они образуют даже цепочки клеток . Довольно часто при первичной идентификации лактобациллы можно отнести к бифидобактериям. Описанные в литературе родоспецифичные праймеры обладают недостаточной специфичностью, что может приводить к ложноположительным результатам.

Поэтому, чтобы избежать ложноположительных результатов при первичной идентификации штаммов, для окончательной идентификации выделенных бифидобактерий необходим анализ секвенирования гена 16S рРНК .

Прим.: 16S рРНК — один из трёх основных типов рРНК , образующих основу рибосом прокариот , находятся в их малой (30S) субъединице. Часто для идентификации используют гены, кодирующие 16S и 23S рибосомальные РНК, поскольку они присутствуют во всех бактериальных клетках и являются видоспецифичными для большинства микроорганизмов. Использование для идентификации гена 16S рибосомальной РНК, позволяет различать близкородственные виды и подвиды микроорганизмов.

Рис. 5. Филогенетическое древо желудочно-кишечного тракта человека, относящегося к семейству Bifidobacteriaceae. Регистрационные номера последовательностей генов SSU рРНК из базы данных GenBank предоставлены для каждого вида.

Итак, конкретные виды Бифидобактерий (Bifidobacteria spp.) принадлежат к роду Bifidobacterium, из семейства Bifidobacteriaceae в отряде Bifidobacteriales, принадлежащему к типу Актинобактерий (Actinobacteria)

Актинобактерии распространены и обильны в желудочно-кишечном тракте человека. Они также известны как грамположительные бактерии с высоким содержанием гуанина и цитозина ( G + C ) в их ДНК. Поскольку их особенно трудно лизировать, а их малая субъединица рибосомной РНК ( SSU rRNA ) нуждается в специфических ПЦР-праймерах для амплификации (Satokari et al., 2001), эта группа бактерий часто недостаточно представлена в молекулярных исследованиях желудочно-кишечной микробиоты (особенно в одном из первых глобальных исследований микробиоты младенцев; Palmer et al., 2007). Члены отрядов Bifidobacteriales (в частности, Bifidobacterium spp.) и Coriobacteriales (в основном, Collinsella spp.) широко распространены уже с молодости.

Бифидобактерии Bifidobacterium spp. образуют доминирующую фракцию желудочно-кишечной микробиоты человека, особенно у младенцев (Benno et al., 1984). Бифидобактерии присутствуют в количестве от 10 8 до 10 10 клеток на 1 г кишечного содержимого (Finegold et al., 1974; Moore & Holdeman, 1974a; Tannock, 1995). Большинство видов Bifidobacterium spp. были получены исключительно из желудочно-кишечных проб человека или животного, и для двух видов (B. minimum and B. subtile), которые были выделены из сточных вод (Scardovi & Trovatelli, 1974), можно предположить кишечное происхождение, что свидетельствует о высокой адаптации этого рода в желудочно-кишечном тракте. Филогенетически, Bifidobacterium spp. образуют однородную группу, с 20 культивируемыми* видами, связанными с желудочно-кишечным трактом человека (см. рис.5).

Первый Bifidobacterium был извлечен из детского кала в 1900 году Анри Тиссье, как часть его докторской диссертации (Tissier, 1900). Он был назван Bacillus bifidus-communis. Уже в 1924 году эта бактерия была переименована в Bifidobacterium bifidum, но Bifidobacterium не был признан в качестве самостоятельного рода до 1974 года (Biavati et al., 2000). Членами рода Bifidobacterium являются неподвижные, анаэробные или микроаэрофильные бактерии, которые продуцируют ацетат и лактат в качестве основных продуктов ферментации из сахаров. Разложение сахаров этими бактериями осуществляется через путь фосфокетолазы, также известный как шунт Bifido. Bifidobacterium spp. разлагают моносахариды, галакто-, манно- и фруктоолигосахариды, в то время как некоторые штаммы способны ферментировать сложные углеводы, такие как крахмал, арабиногалактан, гуммиарабик и желудочный муцин (Crociani et al., 1994). Поскольку материнское молоко содержит неперевариваемые олигосахариды, которые могут разлагаться Bifidobacterium spp. (Marcobal et al., 2011), эта бактериальная группа сильно стимулируется у вскармливаемых грудью детей, что приводит к доминированию Bifidobacterium spp. в желудочно-кишечной микробиоте до отъема. Предполагается, что Bifidobacterium spp. оказывают благотворное влияние на здоровье (Mitsuoka, 1990), а некоторые представители рода Bifidobacterium коммерчески применяются в качестве пробиотиков. Наиболее значимым наблюдением является то, что эти бактерии имеют уменьшенную численность в связи с рядом заболеваний, включая дефицит витамина К (Benno et al., 1985), атопические заболевания (Kalliomaki et al., 2001), синдром раздраженного кишечника (Kerckhoffs et al. , 2009; Rajilic-Stojanovic et al., 2011) и аутизм (Wang et al., 2011a). Кроме того, Bifidobacterium spp. представляют собой очень стабильный компонент желудочно-кишечной микробиоты каждого человека, состав которого практически не изменяется на протяжении многих лет (Rajilic-Stojanovic et al., 2013b). Примечательно, что недавнее исследование микробиоты племени хазда из Танзании показало, что эти взрослые охотники-собиратели не несут никаких видов Bifidobacterium, что объясняется отсутствием таких пищевых компонентов, как мясо и молочные продукты, которые могли бы поддерживать рост этих бактерий (Schnorr et al. al., 2014).

*По последним данным видов установлено более 50 (см.: Martinez, F.A.C. Bacteriocin production by Bifidobacterium spp. A review. / F. A. C. Martinez, E. M. Balciunas, A. Converti, P. D. Cotter, R. P. de Souza Oliveira // Biotechnol. Adv. – 2013. – Т. 31. – № 4. – C. 482–488.)

Источник доп. информации: Rajilic-Stojanovic M, de Vos WM. The first 1000 cultured species of the humangastrointestinal microbiota . FEMS Microbiol Rev. 2014; 38: 996–1047 (текст PDF на английском языке)

Будьте здоровы!

ССЫЛКИ К РАЗДЕЛУ О ПРЕПАРАТАХ ПРОБИОТИКАХ

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Бактериальный вагиноз: причины появления, симптомы, диагностика и способы лечения.

Определение

Бактериальный вагиноз — это инфекционное полимикробное заболевание, связанное с изменением микрофлоры влагалища, при котором происходит значимое уменьшение количества или полное исчезновение палочек Додерлейна (лактобактерий) и их замещение факультативными анаэробными микроорганизмами и/или возбудителем гарднереллеза. Увеличение уровня лейкоцитов в вагинальном отделяемом и признаки воспаления стенок влагалища могут отсутствовать.

Отличительной особенностью заболевания является отсутствие какого-либо одного конкретного возбудителя. Микрофлора, приходящая на смену лактобактериям, может быть различной и чаще всего представлена условно-патогенными бактериями. Кислотность среды влагалища смещается в сторону ощелачивания. При нарушении экосистемы влагалища формируется хорошо структурированная полимикробная пленка (биопленка - форма микробных сообществ), покрывающая вагинальный эпителий и состоящая из анаэробных бактерий, что приводит к рецидивирующему течению бактериального вагиноза. В биопленках бактерии защищены от компонентов врожденного и приобретенного иммунитета.

В норме ведущее место (95%) в вагинальном микробиоценозе занимают палочки Додерлейна, продуцирующие перекись водорода и молочную кислоту.

Они поддерживают постоянство богатой кислородом кислой рН-среды и играют роль местных факторов защиты. В случае нарушения защитных механизмов патогенные или условно-патогенные микроорганизмы транзиторной или факультативной флоры прикрепляются к клеткам влагалищного эпителия с последующим размножением и повреждением тканей.

Бактериальный вагиноз является наиболее частой причиной патологических вагинальных выделений у женщин репродуктивного возраста, однако иногда он может наблюдаться и у девочек до менархе, и у женщин в период менопаузы.

Причины появления бактериального вагиноза

Предрасполагающие факторы, ведущие к развитию бактериального вагиноза:

использование антибактериальных препаратов;
длительное применение внутриматочных контрацептивов;
ношение синтетического нижнего белья, злоупотребление прокладками на каждый день и тампонами, которые препятствуют проникновению кислорода;
длительный прием антибиотиков;
хронические заболевания кишечника и другие состояния, вызывающие дисбактериоз;
использование пероральных контрацептивов;
перенесенные ранее воспалительные заболевания урогенитального тракта;
нарушение гормонального статуса, сопровождающееся нарушением менструального цикла, преимущественно по типу олигоменореи или аменореи;
атрофия слизистой оболочки влагалища;
снижение иммунитета;
воздействие малых доз ионизирующего излучения;
стрессовые воздействия на организм.

Классификация бактериального вагиноза на основании микроскопического исследования:

Компенсированный бактериальный вагиноз — количество лактобактерий снижено, что является фактором риска заселения влагалища патогенными микроорганизмами.
Субкомпенсированный — низкий уровень лактобактерий и растущее число условно-патогенных микроорганизмов.
Декомпенсированный — в мазке выявляются условно-патогенные микроорганизмы, лактобактерии отсутствуют, выражены клинические симптомы бактериального вагиноза.

У большинства женщин бактериальный вагиноз протекает бессимптомно и может быть обнаружен случайно во время рутинного осмотра и взятия мазка.

Интенсивный рост факультативной флоры, образование патологических биопленок сопровождается появлением влагалищных выделений с характерным неприятным запахом.

Хронический бактериальный вагиноз — это непрерывное течение заболевания более 2-х месяцев, несмотря на проводимое лечение. Как правило, он сочетается с нарушением гормонального фона и атрофией слизистой оболочки влагалища.

Диагностика бактериального вагиноза

При постановке диагноза у врача есть четыре критерия, которыми он пользуется. Наличие у пациентки трех из них говорит в пользу бактериального вагиноза.

Микроскопическое (бактериоскопическое) исследование мазка, окрашенного по Граму. Материалом для оценки состояния флоры влагалища служат гинекологические мазки (отделяемое наружных половых органов, уретры, влагалища, шейки матки, полости матки).

Микроскопическое исследование окрашенного нативного мазка проводят при диагностике инфекционно-воспалительных заболеваний мочеполовых путей; легких; ЛОР-органов; глаз; кожи, мягких тканей и др. Возможно применение данного теста в качестве дополнительного исследования к посевам на анаэробную инфекцию.

Что показывают результаты фемофлор. Здоровая, условно-патогенная и патогенная флора, выявляемая в мазках.

Наталья Емельянова, гинеколог-репродуктолог. Редактор А. Герасимова

Врач гинеколог-репродуктолог. Стаж 15+ лет. Принимает в Университетской клинике. Стоимость приема 1700 руб.

Читайте также: