Грибы в препарате кожи после обработки щелочью кон

Обновлено: 05.10.2024

Микроскопическое исследование соскобов с гладкой кожи и ногтевых пластинок, а также волос с волосяной луковицей, используемое для диагностики поверхностных микозов кожи и ее придатков.

Синонимы русские

Микроскопия соскобов кожи, ногтевых пластинок и волос на грибы.

Синонимы английские

Direct microscopy, Superficial mycoses
KOH-test

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Ногти, соскоб, в олосы с волосяной луковицей.

Общая информация об исследовании

Поверхностные микозы кожи – это группа заболеваний кожи и ее придатков (ногтей и волос), возбудителями которых являются грибы, способные к поверхностной инвазии эпидермиса, волос и волосяных фолликулов и ногтевого аппарата. Чаще всего поверхностные микозы обусловлены наличием грибов рода Dermatophytes (в этом случае говорят о дерматофитии), однако причиной заболевания также могут быть грибы рода Candida, Malassezia, Trichosporon и Hortaea.

Клинический осмотр позволяет заподозрить наличие микоза гладкой кожи или микоза ногтей (онихомикоза), но не используется в качестве окончательного метода диагностики, так как многие другие заболевания могут иметь схожую клиническую картину (например, псориаз ногтей может напоминать онихомикоз). Основным методом диагностики этой группы заболеваний является прямая микроскопия, при которой исследуемый материал (чешуйки кожи, полученные при поскабливании в очаге поражения, или фрагменты пораженной ногтевой пластинки) исследуют под микроскопом после обработки раствором гидроксида калия (KOH). Микроскопия позволяет выявить гифы/псевдогифы и дрожжевые клетки гриба и охарактеризовать их морфологию, на основании чего может быть подтвержден диагноз "поверхностный микоз с уточнением его природы". Так, например, грибы-дерматофиты (Trichophyton, Microsporum и Epidermophyton) представлены множественными трубкообразными структурами с истинными септами и образованием спор. Грибы рода Candida, напротив, представлены вытянутыми дрожжевыми клетками (псевдогифы), а истинных спор не образуют. Грибы рода Malassezia образуют округлые дрожжевые клетки и вытянутые псевдогифы.

Возбудители поверхностных микозов в действительности часто входят в состав нормальной микробиоты кожи или временно ее колонизируют ("здоровое носительство") и могут быть определены при микроскопии соскобов с нормальной кожи или соскобов с дистальной части ногтевых пластин у многих здоровых людей. По этой причине положительный результат исследования при отсутствии каких-либо клинических признаков микоза не имеет никакого клинического значения. Это утверждение, однако, не относится к анализу подногтевого содержимого проксимальных ногтевых пластин, которые в норме не содержат никаких микроорганизмов, в том числе и грибов.

Следует отметить, что микроскопия не позволяет уточнить вид гриба: для этих целей используют посев на питательную среду (микробиологический метод). Отрицательный результат исследования не позволяет полностью исключить поверхностный микоз.

Для микроскопического исследования на грибки пользуются неокрашенными препаратами. Однако роговой слой ногтей, волоса, кожи мешают нахождению грибков. Чтобы сделать препарат более наглядным для исследования, его обрабатывают 30% раствором едкой щелочи.

Более пригоден едкий калий (КОН), так как кристаллы едкого натрия (NaOH), быстро выпадающие в осадок, покрывают часто весь препарат и поэтому мешают исследованию.
На предметное стекло накладывают размельченный скальпелем исследуемый материал, на который капельной или глазной пипеткой опускают каплю 30% раствора едкой щелочи, прикрывают покровным стеклом, оставляют на 1—2 часа, после чего микроскопируют.

Для ускорения процесса можно приготовленный со щелочью препарат подогреть осторожно на пламени горелки, не доводя до кипения. Следует помнить, что при закипании волосы разрушаются и имеющиеся в них споры теряют характерное для данного заболевания расположение. Помимо этого, от кипения происходит выпадение кристаллов щелочи, что мешает микроскопическому исследованию.
Очень хорошие препараты для исследования получаются при обработке материала 10% раствором двусернистого натрия (Na2S).

На исследуемый материал опускают 1—2 капли 10% раствора Na2S на 3—5 минут, после чего отсасывают излишек жидкости фильтровальной бумажкой, добавляют к препарату каплю глицерина, покрывают покровным стеклом и исследуют в микроскоп.

Ногти труднее поддаются обработке просветления, поэтому прежде чем исследовать, ногти опускают в пробирку или тигелек, заливают на сутки 30% раствором едкой щелочи.
При исследовании ногтей на присутствие паразитарных грибков удобно пользоваться методом Черногубова: тонкие срезы ногтя, сделанные в достаточно большом количестве, опускают в пробирку, прибавляют 4 мл 30% едкого кали, 2 мл дистиллированной воды и кипятят беспрерывно в продолжение 40— 60 минут, после чего пробирку оставляют при комнатной температуре на 5—7 часов. Остывшую жидкость центрифугируют, сливают оставшийся на дне пробирки осадок, промывают два-три раза дистиллированной водой, приготавливают препарат на предметном стекле для микроскопического исследования.

Для исследования ногтевых пластинок или чешуек кожи на присутствие паразитарных грибков часто пользуются упрощенной методикой (по П. Н. Кашкину): кожные чешуйки или срезы ногтей опускают на дно пробирки, в которую прибавляют 1,5— 2 мл 20% раствора КОН (можно взять 1 мл 30% КОН и прибавить 0,5 мл воды), помещают в кипящую водяную баню на 20—60 минут, пока не растворятся роговые пластинки.

Содержимое пробирки переливают в центрифужную пробирку, центрифугируют 10—15 минут, после чего быстро сливают верхний слой жидкости, а из осадка готовят препарат для исследования под микроскопом.

Для исследования препаратов из чешуек, корок кожи и кусочков ногтевых пластинок можно также пользоваться следующей методикой, предложенной Амане. На приготовленный на предметном стекле исследуемый материал опускают каплю раствора, состоящего из 1 г кристаллической карболовой кислоты, 1 г молочной кислоты, 2 г глицерина и 1 мл дистиллированной воды, и все это оставляют на несколько минут для того, чтобы материал хорошо пропитался раствором. После этого препарат осторожно подогревают на пламени горелки до появления паров (2—3 секунды), но не доводя до кипения, и покрывают покровным стеклом для микроскопического исследования.
Все неокрашенные препараты исследуются вначале при малом, а затем, для окончательного заключения, при большом увеличении микроскопа с затемненной диафрагмой.

В дерматологии имеется ряд простых и быстро выполняемых диагностических процедур. Один из наиболее полезных диагностических методов - приготовление препарата кожных соскобов с гидроксидом калия (КОН) для исследования под микроскопом.

20% раствор КОН применяется для изменения оптических свойств кожного материала и увеличения его прозрачности. Этот метод требует практических навыков и терпения.

Препарат с раствором КОН.
а - небольшие чешуйки соскабливают с края очага на предметное стекло микроскопа.
б - чешуйки раздавливают для образования тонкого слоя клеток, чтобы можно было легко рассмотреть грибы

Биологический материал помещают на предметное стекло и сдвигают в центр с помощью покрывного стекла. Добавляют 1-2 капли раствора КОН и осторожно нагревают препарат над горящей спичкой или лампой микроскопа. Нельзя допускать, чтобы образец закипел, иначе он превратится в артефакт. Избыток раствора КОН удаляют с краев покрывного стекла бумажной салфеткой. Толстый слой материала будет легче рассматривать, если аккуратно, но достаточно сильно надавить на покровное стекло карандашным ластиком.
Толстые чешуйки растворятся, если их оставить в препарате на 15—20 мин.

Приготовленный препарат рассматривают под микроскопом, опустив конденсатор и лампу на нижние уровни для максимального контраста и поставив объектив на увеличение х10. Микроскоп фокусируют вверх и вниз, быстро сканируя весь препарат.

Гифы гриба представляют собой длинные, разветвляющиеся гиалиновые палочки зеленого цвета равномерной ширины, пересекающие границы эпидермальных клеток. Они часто содержат септы. Ложноположительный результат можно получить при наличии растительных волокон, неправильной интерпретации видимых границ клеток или других артефактов. В случае дрожжевой инфекции наблюдаются почкующиеся дрожжевые грибы и псевдогифы.

Тела моллюсков представляют собой овальные диски, несколько крупнее кератиноцитов, с гомогенной цитоплазмой. Во фрагментах волос грибы выглядят как мелкие круглые споры, упакованные внутри волосяного стержня или окружающие его снаружи. Гифы в препаратах волос наблюдаются крайне редко.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Соскоб на патогенные грибки кожи – это микроскопический анализ, который проводится для выявления грибкового поражения эпидермиса (микоза). С помощью данной методики можно констатировать факт заражения грибком (предварительный анализ) и определить разновидность возбудителя (окончательный анализ). Возбудителями микозов могут быть патогенные и условно-патогенные грибки. Для того, чтобы дерматолог назначил эффективный курс терапии, пациент направляется на микологическое исследования.

Классификация патогенных грибов кожи

Согласно классификации, существует 5 основных разновидностей грибковых болезней: эритразма (псевдомикозы); микозы глубокие; кандидозы; дерматомикозы; кератомикозы. Эритразма – это патологические грибковые поражения, которые достаточно сложно диагностируются. Выявить эритразму можно только по результатам соскоба на грибки, находящиеся на кожных покровах.

Микозы глубокие поражают гортань, бронхи и легкие. Заболевание проявляется у людей с ослабленной иммунной системой и затяжными недугами. К глубоким микозам можно отнести: мукороз, аспергиллез и пенициллиоз. Грибки часто поражают носовую полость и становятся причинами болезней легких, ушей и формирования абсцессов.

Грибки рода Кандида под микроскопом выглядят как дрожжи. Они в небольших количествах присутствуют на теле, но при угнетении иммунной системы грибки начинают интенсивно размножаться, вследствие чего человек заболевает кандидозом. Кандидоз (молочница) может быть не только кожного покрова, но и кишечника, полости рта, интимных органов. Размножение грибков и увеличение их количества можно подтвердить, сдав общий анализ крови и соскоб на патогенные микозы.

Кератомикозы протекают следующим образом: повреждается роговой слой эпидермиса, но отсутствуют воспалительные процессы. Кератомикозы чреваты тем, что из-за них могут развиться два серьезных недуга – отрубевидный лишай и узловатая трихоспория. Лишай диагностируется у 15-20% населения планеты, но более подвержены болезни люди с диагнозами СПИД и туберкулез.

Симптоматика грибковых заболеваний кожи

Определить возбудителя инфекции на ранних стадиях сложно, поскольку нет внешних проявлений заболевания. При большом количестве патогенных микроорганизмов появляются первые симптомы: кожа становится бледной и выглядит нездоровой; наблюдается шелушение кожного покрова; волосы становятся ломкими и начинают выпадать; образуются пятна на коже с неприятным запахом; разрушается структура ногтей; ощущается дискомфорт, зуд и жжение.

Инкубационный период длится от 2-3 дней до 3-4 месяцев. Первыми симптомами заболевания становятся трещины кожного покрова, зуд, высыпания, отшелушивание верхнего слоя эпидермиса.

Методы диагностики грибковых заболеваний

Соскоб берется исключительно с гладких кожных покровов.

Дерматолог чаще всего назначает данное исследование пациентам при лишаях, которые поражают плечи, спину, грудь и шею. Доктор соскабливает верхний слой омертвевшей кожи и получает образец с мицелием и спорами грибка.

К анализам на гетеротрофные микроорганизмы относятся:

соскоб на патогенные грибки кожи;
микроскопическая диагностика;
культуральное исследование.

С помощью микроскопической диагностики выявляются четкие контуры микроорганизма. Для этого выполняется осветление биоматериала в щелочной среде, которая растворяет органику и остаются только грибы для дальнейшей диагностики.

Культуральное исследование поможет выявить возбудителя инфекции. Анализ выполняется в течение 7-10 дней, а окончательный диагноз согласно результатам культуральной диагностики доктор может поставить на 13 день, так как первичные грибки растут длительный период времени. К другим методам диагностики заболеваний кожи, вызванных микроорганизмами, относятся:

иммуноферментный анализ крови;
ПЦР-исследование;
посев.

Показания и противопоказания для взятия соскоба на патогенные грибы кожи

Процедура показана с целью профилактической диагностики для посещения бассейна, бани, сауны и других общественных мест. Анализ начинается при подозрении на микозы, в частности из-за жалоб пациента на трещины, высыпания, зуд и шелушения эпидермиса. С помощью исследования можно обнаружить микроорганизмы, определить их вид и поставить точный диагноз.

Противопоказаний к проведению манипуляции нет, поскольку она безболезненная и проводится в течение нескольких минут. Взятие соскоба не вызывает дискомфорта и иных неприятных ощущений.

Подготовка и взятие биоматериала для анализа

Пациенту следует заблаговременно подготовиться к предстоящей манипуляции: за несколько дней до даты проведения исследования не следует проводить гигиенические процедуры; запрещается пользоваться косметикой и наносить ее на места, с которых будет взят биоматериал; для образца возле ногтевых пластин, нельзя предварительно наносить на них красящие лаки и косметические средства; следует отказаться от употребления некоторых лекарственных средств (желательно проконсультироваться с дерматологом о применении медикаментов).

Биоматериал из пораженного участка эпидермиса забирается стерильным скальпелем или специальными инструментами. Нужно отделять поврежденную кожу возле воспалительного и пораженного очага, поскольку в этом месте концентрация микроорганизмов будет максимальной, для соскоба с участка между пальцами, необходимо взять роговой слой.

После взятия соскоба, к биоматериалу добавляется специальный раствор, чтобы образовалась щелочная среда и разрушился кератин. Спустя сутки исследуется различными методиками осадок в контейнере или пробирке.

Расшифровка результатов анализа

Если в соскобе не выявлен микоз, это указывает, что пациент не болеет грибковыми заболеваниями. Для выбора лечения необходимо определить разновидность микроорганизма и провести посев биоматериала на питательную среду: выращивается культура грибка и определяется его реагирование на медикаменты.

Лечащий врач на основании жалоб пациента, анамнеза, результатов лабораторных исследований ставит диагноз. После постановки диагноза специалист назначает пациенту комплексный курс терапии. Согласно статистическим данным, только у половины людей, которым делают соскоб на патогенные грибки кожи, подтверждается заражение инфекцией.

Тищенко Л. Д., Тищенко А. Л. Практикум по дерматовенерологии. 4-ое издание. – М. РУДН, 2009, 217 с.

Специальность: инфекционист, гастроэнтеролог, пульмонолог .

Общий стаж: 35 лет .

Образование: 1975-1982, 1ММИ, сан-гиг, высшая квалификация, врач-инфекционист .

Читайте также: