Метод определения молочнокислых бактерий посевом в стерильное молоко и подсчета нвч

Обновлено: 05.10.2024

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 Разработан Федеральным государственным бюджетным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности" (ФГБНУ "ВНИМИ")

2 Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 октября 2016 г. N 92-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по MK (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Минэкономики Республики Армения

Госстандарт Республики Казахстан

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 ноября 2016 г. N 1827-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33951-2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 сентября 2017 г.

5 Взамен ГОСТ 10444.11-89 в части молока и молочной продукции

Настоящий стандарт распространяется на молоко и молочную продукцию и устанавливает методы определения молочнокислых бактерий:

- посевом в стерильное молоко и подсчетом наиболее вероятного числа (НВЧ);

- посевом на или в твердые питательные среды и подсчетом КОЕ.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 26809.1-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты

ГОСТ 32901-2014 Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

3.1 молочнокислые бактерии: Грамположительные, неподвижные, неспорообразующие, каталазоотрицательные, нитрат-редуктаза-отрицательные и цитохром-оксидазоотрицательные, не разжижающие желатин и не продуцирующие индол кокки или прямые палочки.

Примечание - Основные роды и виды молочнокислых бактерий в производстве молочных продуктов: вид Lactococcus lactis, род Lactobacillus, вид Streptococcus thermophilus, род Leuconostoc.

4.1 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и реактивы - по ГОСТ 32901 со следующими дополнениями:

- стерильное обезжиренное молоко;

- агар с гидролизованным молоком;

- подкисленная среда MRS;

- среда MRS агаризованная;

- основа селективного агара;

- среда для определения L. casei;

- среда для определения лактококков и термофильных стрептококков.

4.2 Допускается применять одноразовую посуду, если она отвечает соответствующим требованиям.

Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 13928, ГОСТ 26809.1 и ГОСТ 32901.

6.1 Подготовка посуды и материалов - по ГОСТ 32901.

6.2 Приготовление питательных сред

6.2.1 Приготовление стерильного обезжиренного молока

Натуральное или восстановленное обезжиренное молоко разливают в пробирки по 10 см 3 и затем стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение (10±1) мин.

Стерильное обезжиренное молоко допускается хранить при температуре (4±2)°С в течение 30 дней.

6.2.2 Приготовление гидролизованного молока

Натуральное или восстановленное обезжиренное молоко кипятят или обрабатывают текучим паром в течение 20 мин, охлаждают до температуры (45±1)°С и устанавливают активную кислотность рН (7,6 - 7,8). К 1000 см 3 молока добавляют (0,5 - 1,0) г порошка панкреатина и 5 см 3 хлороформа. Колбу со смесью закрывают корковой пробкой и выдерживают в термостате при температуре 40°С в течение (18 - 24) ч. В течение первых (3 - 5) ч молоко несколько раз перемешивают (пробку после встряхивания приоткрывают для удаления паров хлороформа). Через (18 - 24) ч колбу вынимают из термостата, гидролизованное молоко фильтруют через бумажный фильтр, разводят дистиллированной водой в соотношении 1:1, устанавливают активную кислотность рН (7,0 - 7,2) и стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение (15±1) мин.

Гидролизованное молоко допускается хранить при температуре (4±2)°С в течение 30 дней.

6.2.3 Приготовление агара с гидролизованным молоком или бульоном

К 1000 см 3 гидролизованного молока (6.2.2) или гидролизованного бульона (6.2.3.1) добавляют 15 г агара. Смесь нагревают до полного расплавления агара, фильтруют через вату и разливают в пробирки или колбы. Смесь стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение (10±1) мин.

Агар с гидролизованным молоком допускается хранить при температуре (4±2)°С в течение 30 дней.

МОЛОКО И МОЛОЧНАЯ ПРОДУКЦИЯ

Методы определения молочнокислых микроорганизмов

Milk and milk products. Methods for determination of the lactic acid bacteria

Дата введения 2017-09-01

Предисловие

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности" (ФГБНУ "ВНИМИ")

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 октября 2016 г. N 92-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Минэкономики Республики Армения

Госстандарт Республики Казахстан

5 ВЗАМЕН ГОСТ 10444.11-89 в части молока и молочной продукции

6. Исключен. (Поправка. ИУС N 4-2017).

ВНЕСЕНА поправка, опубликованная в ИУС N 4, 2017 год

Поправка внесена изготовителем базы данных

1 Область применения

- посевом в стерильное молоко и подсчетом наиболее вероятного числа (НВЧ);

- посевом на или в твердые питательные среды и подсчетом КОЕ.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009.

ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 32901-2014 Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

Примечание - Основные роды и виды молочнокислых бактерий в производстве молочных продуктов: вид Lactococcus lactis, род Lactobacillus, вид Streptococcus thermophilus, род Leuconostoc.

4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и реактивы

- стерильное обезжиренное молоко;

- агар с гидролизованным молоком;

- подкисленная среда MRS;

- среда MRS агаризованная;

- основа селективного агара;

- среда для определения L. casei;

- среда для определения лактококков и термофильных стрептококков.

4.2 Допускается применять одноразовую посуду, если она отвечает соответствующим требованиям.

5 Отбор проб

Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 13928, ГОСТ 26809.1 и ГОСТ 32901.

6 Подготовка к проведению анализа

6.1 Подготовка посуды и материалов - по ГОСТ 32901.

6.2 Приготовление питательных сред

6.2.1 Приготовление стерильного обезжиренного молока

Натуральное или восстановленное обезжиренное молоко разливают в пробирки по 10 см и затем стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение (10±1) мин.

Стерильное обезжиренное молоко допускается хранить при температуре (4±2)°С в течение 30 дней.

6.2.2 Приготовление гидролизованного молока

Гидролизованное молоко допускается хранить при температуре (4±2)°С в течение 30 дней.

6.2.3 Приготовление агара с гидролизованным молоком или бульоном

К 1000 см гидролизованного молока (6.2.2) или гидролизованного бульона (6.2.3.1) добавляют 15 г агара. Смесь нагревают до полного расплавления агара, фильтруют через вату и разливают в пробирки или колбы. Смесь стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение (10±1) мин.

Агар с гидролизованным молоком допускается хранить при температуре (4±2)°С в течение 30 дней.

Текст ГОСТ 33951-2016 Молоко и молочная продукция. Методы определения молочнокислых микроорганизмов

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ. МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION. METROLOGY AND CERTIFICATION

МОЛОКО И МОЛОЧНАЯ ПРОДУКЦИЯ

Методы определения молочнокислых микроорганизмов

Сведения о стандарте

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (про* токол от 25 октября 2016 г. № 92*П)

За принятие проголосоааги:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166)004-97

по МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Минэкономики Республики Армения

Госстандарт Республики Казахстан

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 ноября 2016 г. Не 1827-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33951—2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 сентября 2017 г.

5 ВЗАМЕН ГОСТ 10444.11—69 в части молока и молочной продукции

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

МОЛОКО И МОЛОЧНАЯ ПРОДУКЦИЯ Методы определения молочнокислых микроорганизмов

Milk and milk products. Methods for determination of the lactic add bacteria

Дата введения — 2017—09—01

1 Область применения

• посевом в стерильное моло 3 и затем стерилизуют при температуре (121 ± 1) ®С в течение (10 ± 1) мин.

Стерильное обезжиренное молоко допускается хранить при температуре (4 ± 2) в С в течение 30 дней.

6.2.2 Приготовление гидрслиэованного молока

Натуральное или восстановленное обезжиренное молоко кипятят или обрабатывают текучим паром в течение 20 мин. охлаждают до температуры (45 ± 1) 'С и устанавливают активную кислотность pH (7.6 - 7.8). К 1000 см 3 молска добавляют (0.5 - 1.0) г порошка панкреатина и 5 см 3 хлороформа. Колбу со смесью закрывают корковой пробкой и выдерживают в термостате при температуре 40 *С в течение (18 - 24) ч. В течение первых (3 - 5) ч молоко несколько раз перемешивают (пробку после встряхивания приоткрывают для удаления паров хлороформа). Через (18 - 24> ч колбу вынимают из термостата, гидролизованное молоко фильтруют через бумажный фильтр, разводят дистиллированной ведой е соотношении 1:1. устанавливают активную кислотность pH (7.0 - 7.2) и стерилизуют при темпе* ратуре (121 ± 1) ®С в течение (1511) мин.

Гидролизованное молоко допускается хранить при температуре (4 ± 2) *С в течение 30 дней.

6.2.3 Приготовление агара с гидролизованным молоком или бульоном

К1000 см 3 гидролиэованнсго молока (6.2.2) или гидролиэованного бульона (6.2.3.1) добавляют 15 г агара. Смесь нагревают до полного расплавления агара, фильтруют через вату и разливают в пробирки или колбы. Смесь стерилизуют при температуре (121 ± 1) ®С в течение (10 ± 1) мин.

Агар с гидролизованным молоком допускается хранить при температуре (4 ± 2) 'С в течение 30 дней.

6.2.3.1 Приготовление гидролизованного бульона

• сухой гидролизат белков молока - 31 г;

• сухой дрожжевой автолизат - 2.5 г;

• фосфат калия двузамещанный -1.5 г;

• дистиллированная веда -1000 см 3 .

Все компоненты вносят е колбу, перемешивают и нагревают до полного растворения. Смесь охлаждают до температуры (50 ± 2) *С и устанавливают pH (7.3 ± 0.1) при температуре 25 ®С.

Готовый гидролизованный бульон разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при температуре (121 ± 1) *С в течение (15 ± 1) мин.

При использовании готового гидролизованного бульона (35 ± 1) г сухой среды вносят в (1000150)см 3 холодной воды. Смесь тщательно перемешивают, кипятят (3 - 5) мин. не допуская пригорания. При наличии осадка фильтруют через ватно-марлевый фильтр. В полученной среде проверяют активную кислотность и корректируют pH до (7.3 ± 0.1). При необходимости среду вновь подогревают, разливают в колбы или пробирки, закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре (121 ± 2) *С в течение (1511) мин.

Гидролиэованный бульон допускается хранить при температуре (4 ± 2) в С в течение 30 дней.

6.2.4 Приготовление среды для определения лактококкое и термофильных стрептококков

• сухой гидролизат белков молока -31,5 г.

• сухой дрожжевой автолизат - 5.0 г;

• фосфат калия двузамещенный - 1,5 г,

- дистиллированная вода -1000 см 3 .

Все компоненты вносят в колбу, перемешивают и нагревают до полного растворения. Смесь охлаждают до температуры (50 ± 2) °С и устанавливают pH (7.3 ± 0.1) при температуре 25 *С. Готовую среду разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при температуре (121 ± 1) ®С в течение (15 ± 1) мин.

При использовании готовой питательной среды (50 ± 1) г сухой среды вносят в (1000 ± 50) см 3 холодной воды. Смесь тщательно перемешивают, кипятят 3 — 5 мин. не допуская пригорания. При наличии осадка фильтруют через ватко-марлевый фильтр. В полученной среде проверяют активную кислотность и корректируют pH до (7.3 ± 0.1). При необходимости среду вновь подогревают, разливают в колбы или пробирки, закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре (121 ±2) в С в течение (15±1) мин. Готовая среда прозрачная и имеет желтовато-коричневый цвет.

Рабочую среду допускается хранить при температуре (4 ± 2) *С в течение 30 дней.

6.2.5 Приготовление среды М 17 для определения лактококкое и термофильного стрептококка

Состав основной среды:

• пептон 3 (перевар сои) - 5.0 г,

• дрожжевой экстракт -2.5 г;

• мясной экстракт - 5,0 г;

• глицерофосфат -19.0 г.

• сернокислый магний -0,25 г.

• аскорбиновая кислота - 0.5 г,

• дистиллированная вода - 950 см 3 .

Все компоненты основной среды вносят в колбу, перемешивают и нагревают до полного растворения. Смесь охлаждают до температуры (50 ± 2) *С и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации pH составил (7.210,2) при температ/ре 25 в С. Готовую среду разливают по 95 см 3 в колбы вместимостью 250 см 3 и стерилизуют при температ/ре (121 ± 1) *С в течение (15 ± 1) мин.

При использовании готовой питательной среды 55 г питательной среды вносят в колбу, добавляют 950 см 3 дистиллированной веды и нагреваю* при перемешивании до полного растворения. Смесь охлаждают до температуры (50 ± 2)*С и устанавливает pH таким образом, чтобы после стерилизации pH составил (7.2 ±0,2). Готовую среду разливают по 95 см 3 в колбы вместимостью 250 см 3 и стерилизуют при температуре (121 ± 1)®С в течение 3 основной среды расплавляют на водяной бане и охлаждают до температуры (48—56) *С. 5 см 3 раствора лактозы (6.3.1) подогревают до температуры (48—56) *С. добавляют его к основной среде и перемеривают.

6.2.6 Приготовление подкисленной среды MRS для молочнокислых палочек

• мясной экстракт - 10 г;

• дрожжевой экстракт - 5 г;

- теин 80 - 1 см 3 ;

• фосфат калия однозамещенный - 2 г;

• ацетат натрия тригидрат - 5 г,

• диаммоний цитрат - 2 г.

• сернокислый магний - 0.2 г:

• сернокислый марганец -0.05 г;

• дистиллированная вода - 1000 см 3 .

Все компоненты (кроме теин 80) вносят в колбу, перемешивают, нагревают до полного растворения. Добавляют 1 см 3 теин 80. Охлзадают до температуры (50 ± 2) ®С и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации pH составил (5.4 ± 0.2) при температуре 25 ®С. Готовую среду разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при температуре (121 ± 1) *С в течение (15 ± 1) мин.

При использовании готовой питательной среды 60 г сухой питательной среды вносят в колбу, добавляют 1000 см 3 дистиллирсванной воды и нагревают при перемешивании до полного растворения. Добавляют 1 см 3 теин 80. Смесь охлаждают до температуры (50 ± 2) *С и устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации pH составил (5.4 ± 0.2). Готовую среду разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при температуре (121 ± 1) *С в течение (1511) мин.

Ольга Кураева

Делается один ряд последовательных десятикратных разведений продукта. Затем переносится соответственно по 1 мл из каждого разведения на две параллели с молоком. В итоге получается два ряда по 10 пробирок. Почему все 10 разведений? а не 4 последних,как сказано в ГОСТе? это потому что можно не угадать, ведь бывает, что в продукте, например в твороге, молочнокислых микробов намного меньше заявленного. Ну а после инкубации учитываете пробирки с характерным ростом, и по таблице выдаете результат.

Мы делаем разведения до 9 или 10 степени. Засеваем два параллельных ряда с первого до последнего разведения.Учитываем последние пробирки, в которых молоко свернулось.высчитываем по таблице. Указываем в ответе, например 1,1х10⁷

Дальше десятого не делаем, потому что, как правило, производитель указывает норму содержания молочнокислых бактерий 10⁷

Читайте также: