Метод секторных посевов микробиология
Обновлено: 05.10.2024
1. Тема: Культуральные свойства бактерий. Выделение чистой культуры бактерий.
2. Цели занятия : Изучить характер роста бактерий в жидких и на плотных питательных средах. Освоить технику пересева для выделения чистой культуры бактерий.
3. Задачи занятия :
3.1. Изучить характер роста бактерий в жидких и на плотных питательных средах.
3.2. Ознакомиться с основными характеристиками колоний бактерий.
3.3. Освоить технику пересева для выделения чистой культуры бактерий.
клинических наук в
бактерий на плотных
рост бактерий на
культур в жидкие и
ухода за больными
зарубежный опыт по
4. Продолжительность занятия в академических часах : 3 часа.
5. Контрольные вопросы по теме :
5.1. Характер роста бактерий на плотных питательных средах.
5.2. Характер роста бактерий в жидких питательных средах.
5.3. Методы выделения чистых культур бактерий.
6. Задания и методические указания к их выполнению .
На занятии студенту необходимо выполнить:
6.1. Ответить на вопросы преподавателя.
6.2. Принять участие в обсуждении изучаемых вопросов.
6.3. Выполнить самостоятельную работу.
Рост микробов на плотной питательной среде характеризуется образованием колоний. Колонии – видимые невооруженным глазом скопления бактериальных особей на поверхности или в толще плотной питательной среды. Для характеристики колоний используют следующие признаки:
1. По размеру выделяют следующие колонии:
- точечные - диаметр менее 1 мм;
- мелкие – диаметр 1-2 мм;
- средние – диаметр 2-4 мм;
- крупные – диаметр 4-6 мм и более.
2. Форма колонии:
- ризоидная (корневидная, напоминающая переплетающиеся корни деревьев). 3. Контуры края колонии (определяют при рассмотрении колонии под лупой
или микроскопом с малым увеличением):
- ровные края в виде четко выраженной линии;
- неровные края ( фестончатый, волнистый, эрозированный или зазубренный, бахромчатый).
4. Рельеф колонии характеризуется приподнятостью ее над поверхностью питательной среды и формой на вертикальном разрезе. Определяется невооруженным глазом или при помощи лупы при рассматривании сверху и сбоку:
- каплеобразные и куполообразные колонии правильной круглой формы; - плоско-выпуклые колонии; - конусообразные колонии;
- колонии с приподнятой серединой; - колонии с вдавленным центром; - плоские колонии.
5. Поверхность колонии изучают при помощи лупы или под микроскопом при малом увеличении:
- матовая или блестящая с глянцем; - сухая или влажная; - гладкая или шероховатая.
Гладкие колонии обозначают буквой S (англ. smooth – гладкий), шероховатые
- буквой R (англ. rough – шероховатый).
6. Цвет колонии . Определяется пигментом, который продуцирует культура микробов. Преобладающее большинство патогенных бактерий пигмента не образует (колонии бесцветны или молочно-мутного цвета). Пигментообразующие виды дают колонии кремовые, желтые, золотисто-оранжевые, синие, красные, сиреневые, черные и др.
7. Структура колоний . Определяется в проходящем свете при слабом увеличении микроскопа, суженной диафрагме или при несколько опущенном конденсоре:
- гиалиновые колонии; - зернистые колонии;
- нитевидные или волокнистые колонии.
8. Консистенция колоний . Исследуют прикосновением или взятием из нее части материала бактериологической петлей:
- пастообразные, вязкие или слизистые; - волокнистые или кожистые; - хрупкие сухие.
Характер роста бактерий в жидких питательных средах:
1. Рост бактерий с равномерным помутнением среды.
2. Придонный рост бактерий (образование осадка на дне).
3. Пристеночный рост бактерий (образование рыхлых хлопьев,
прикрепленных к внутренней поверхности стенок сосуда).
4. Поверхностный рост бактерий (образование пленки на поверхности жидкой питательной среды).
Рост в полужидкой питательной среде характеризуется помутнением всей толщи среды или образованием воронки цилиндрической или конической формы.
Выделение чистой культуры бактерий.
Чистая культура – культура микроорганизмов одного вида (потомство одной клетки). Методы выделения чистой культуры:
1. Метод Дригальского – последовательный пересев культуры шпателем в 3 чашки Петри с агаром.
2. Метод параллельных штрихов – посев культуры штрихами по поверхности агара.
3. Метод Голда – метод секторных посевов. При этом чашку с агаром делят на 3 сектора. На первый сектор засевают культуру петлей частыми штрихами, после чего петлю стерилизуют (фламбируют). Затем стерильной петлей уже более редкими параллельными штрихами переносят микроорганизмы из первого сектора во второй, после чего вновь фламбируют петлю. Аналогично стерильной петлей переносят микроорганизмы из второго сектора в третий.
4. Метод Коха (метод рассева в глубине среды) . Культуру последовательно разводят в расплавленном агаре в пробирках. Затем содержимое пробирок переносят
в чашки Петри и инкубируют в термостате. Изолированные колонии вырастают в толще агара. В настоящее время этот метод используется редко.
После обсуждения теоретических вопросов преподаватель объясняет правила выполнения самостоятельной работы
1. Описание бактериальных колоний, выросших на демонстрационных чашках Петри.
2. Описание характера роста бактерий в жидких питательных средах.
3. Пересев бактерий из изолированных колоний штрихом на плотные питательные среды с целью выделения чистой культуры.
7. Оценивание знаний, умений, навыков по теме занятия :
Ответы на вопросы и активность на занятии оцениваются по 5-балльной системе.
8. Литература для подготовки :
1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник для студентов медицинских вузов. Под ред. А.А. Воробьева. Учебники и учеб. пособия для высшей школы. Издательство: Медицинское информационное агентство, 2012. – 702 с.
1. Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: Учебник для студентов мед. вузов / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. - 5-е изд., испр. и
доп. – СПб.: СпецЛит, 2012. – 759 с.: ил.
2. Медицинская микробиология: учебник. 4-е изд. Поздеев О.К. / Под ред. В.И. Покровского. – 2010. – 768 с.
3. Руководство по медицинской микробиологии. Общая и санитарная микробиология. Книга 1 / Колл. авторов // Под редакцией Лабинской А.С., Волиной Е.Г. – М.: Издательство БИНОМ, 2008. – 1080 с.: ил.
Методические указания переработаны и дополнены профессором Литусовым Н.В., аспирантом кафедры Зорниковым Д.Л.
Обсуждены на заседании кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии.
Тут вы можете оставить комментарий к выбранному абзацу или сообщить об ошибке.
Пробирку с агаром или желатиной держат дном кверху. Материал, подлежащий посеву, берут платиновой иглой, которую отвесно вкалывают в поверхность агара или желатины и продвигают по оси пробирки до самого дна. Иглу затем извлекают, обжигают и закрывают пробирку пробкой.(Рис. 5.3).
Рис. 5.3. Посев уколом в МПА
5.5. Посев в чашку Петри.
Посев в чашку осуществляют, как правило, для получения изолированных колоний микроорганизмов, что позволяет выделять чистые культуры бактерий. Чистой культурой называется совокупность клеток только одного определенного вида. Методов выделения чистых культур существует в основном три: а) посев на чашку Петри, б) посев на элективную (избирательную) среду, в) выделение культуры из организма животного, чувствительного к тому или иному микроорганизму.
Посев на плотную питательную среду можно производить разными методами: с помощью петли – штрихом, с помощью шпателя – рассевом и др.(Рис. 5.4)
Рис. 5.4. Методы посева на плотную среду в чашку Петри.
При посеве шпателем на поверхность агара наносят петлей одну каплю исследуемой бактериальной суспензии. Затем, приоткрыв чашку, прокаленным и остуженным стеклянным шпателем размазывают каплю по всей поверхности, производя легкие поглаживающие движения во все стороны по поверхности агара.
Если необходимо выделить чистые культуры из суспензии с высокой концентрацией бактерий посев можно сделать в несколько чашек не обжигая шпателя. Шпателем распределяют каплю бактериальной суспензии по поверхности среды, затем этим же шпателем протирают поверхность плотной среды последовательно во 2-й, 3-й и 4-й чашках. Обычно, в первых двух чашках наблюдают сплошной рост микроорганизмов, тогда как в последующих - изолированные колонии.
Для получения относительных количественных характеристик микрофлоры на поверхность среды наносят мерное количество бактериальной суспензии с определенной концентрацией клеток. Подсчитывая затем количество выросших колоний.
Рассевать культуру можно петлей методом истощающего штриха. В этом случае петлей берут каплю суспензиии, касаются ей поверхности плотной среды в углу чашки, давая капле стечь, а затем проводят штрихи в таком порядке, как указано на рисунке 5.4
При высокой концентрации клеток каплю суспензии рассевают сначала в первой чашке, а затем той же петлей, не набирая материала, вновь наносят штрихи на второй и третьей чашке с агаром. В первой чашке может получиться сплошной рост, тогда как во второй и третьей наблюдается рост единичных, изолированных колоний.
Каждая колония представляет обособленное скопление клеток – потомков исходной – клон бактерий одного вида. При последующем пересеве из колоний на скошенный агар или другую питательную среду получают чистую культуру.
После посева чашки помещают в термостат крышками вниз, чтобы конденсационная вода, образовавшаяся на крышке чашки Петри при застывании агара, не помешала получить изолированные колонии. Чашки выдерживают в термостате в течение 1-7 суток в зависимости от скорости роста микроорганизмов.
Исследования природных субстратов предполагает определение как видового разнообразия бактерий, так и количества их клеток, содержащихся в том или ином объеме субстрата. Число клеток в единице объема можно посчитать различными методами. Иногда, для определения абсолютного числа, проводят прямой счет клеток в исследуемой среде. Однако это отнимает много времени и сил. Часто достаточно относительной количественной оценки. Одним из методов такой оценки является метод высева на плотные среды.
5.6. Определение количества клеток методом высева на плотные среды (чашечный метод). Сущность метода заключается в высеве определенного объема исследуемой суспензии микроорганизмов на плотную среду в чашки Петри и последующем подсчете выросших колоний. При этом исходят из того, что каждая колония является результатом размножения одной клетки. Чашечный метод особенно широко используется для определения количества микроорганизмов в почве и других естественных субстратах. Однако следует учитывать, что для микроорганизмов, образующих цепочки или другие скопления клеток, результаты по определению их числа будут всегда несколько занижены. Поэтому в микробиологической практике часто используют понятие колониеобразующей единицы (КОЕ). Колониеобразующая единица это одна или несколько клеток, давших начало колонии.
Работа этим методом включает три этапа:
- посев на плотную среду в чашки Петри,
- подсчет выросших колоний.
Приготовление разведений. Чтобы получить изолированные колонии, культуру или материал, содержащий микроорганизмы, как правило, разводят – уменьшая концентрацию клеток в единице объёма. Обычно разведения проводят в стерильной водопроводной воде, пользуясь некоторым постоянным коэффициентом разведения, чаще всего равным 10. Таким образом, получают серию разведений, в которых концентрации клеток образуют геометрическую прогрессию. В ходе одного опыта целесообразно использовать один и тот же коэффициент разведения, так как в этом случае при большом числе подсчетов уменьшается вероятность ошибки. Для приготовления разведений стерильную водопроводную воду разливают по 9 мл. в стерильные сухие пробирки. Затем 1 мл. исходной суспензии, взятый стерильной пипеткой, переносят в пробирку с 9 мл. стерильной воды—это 1-е разведение, 1: 10. Полученную в 1-м разведении суспензию с помощью новой стерильной пипетки тщательно перемешивают, вбирая в пипетку и выпуская из нее полученную взвесь. Эту процедуру выполняют 3–5 раз, что обеспечивает перемешивание суспензии и уменьшает адсорбцию клеток на стенках пипетки. Затем этой же пипеткой берут 1 мл. полученного разведения и переносят его во 2-ю пробирку—это 2-е разведение, 1: 100. Таким же образом готовят и последующие разведения. (Рис. 5.5) Если используется другой коэффициент разведения, например, 3, тогда 1-е разведение будет 1: 3, 2-е— 1: 9, 3-е—1: 27 и т. д. Степень разведения определяется концентрацией исходной суспензии микроорганизмов и соответственно число разведении тем больше, чем больше концентрация исходной суспензии. Для приготовления каждого разведения следует обязательно использовать отдельную пипетку. Пренебрежение этой предосторожностью может привести к получению ошибочного результата, иногда в 100 и более раз превышающего истинный. Ошибка связана с адсорбцией микроорганизмов на стенках пипетки, в результате чего не все клетки удаляются из пипетки при каждом разведении. Часть клеток, оставшаяся на стенках пипетки, может затем попасть в одно из последующих разведении, что и явится причиной получения завышенного результата.
Посев в чашки. Высевать суспензию можно поверхностным или глубинным способом (см. выше). Перед посевом суспензии поверхностным способом (рис.) в стерильные чашки Петри разливают расплавленную плотную, чаще всего агаризованную, питательную среду. Среду обычно разливают из большой колбы последовательно в ряд чашек Петри по 15—20 мл в каждую, и чашки оставляют на горизонтальной поверхности, пока агаризованная среда не застынет. Поверхность агаровых сред рекомендуется подсушивать, чтобы образующиеся колонии не расплывались по поверхности агара. Для этого чашки с застывшей средой помещают открытыми в сушильный шкаф, нагретый до 70—80°С. Шкаф предварительно необходимо простерилизовать. Среду подсушивают до появления на ее поверхности муаровой пленки. При этом с крышек чашки Петри удаляется конденсационная вода. В некоторых случаях агаризованную среду подсушивают, помещая чашки в термостат на 2—3 суток крышками вниз. Когда среда готова, на ее поверхность стерильно пипеткой наносят строго определенный объем (0, 05—0, 2 мл) соответствующего разведения.
Рис. 5.5. Схема приготовления последовательных разведений бактериальной суспензии.
Этот объем распределяют стерильным стеклянным шпателем по поверхности агаризованной среды в чашке Петри. Высевы на плотную среду производят обычно из трех последних разведении. Из каждого разведения делают 2—4 параллельных высева. Посевы из разведении можно делать одной пипеткой, но начинать следует обязательно с большего разведения. Для каждого разведения используют новый стерильный шпатель.
Выросшие колонии подсчитывают, определяя концентрацию клеток в определенном объеме того или иного разведения. Трудно не заметить возможность использования этого метода и для выделения чистых культур микроорганизмов. Изолированные колонии – прекрасная возможность отсеять небольшое количество клеток на скошенный стерильный МПА.
В качестве исследуемого по такой схеме субстрата может быть не только вода или почва, но и воздух. Для этого на стерильный бумажный фильтр (предварительно взвешенный) осаждают клетки, прокачивая определенное количество воздуха. Затем фильтр помещают в стерильную воду или физиологический раствор, где клетки смывают готовя суспензию. Приготовленную суспензию исследуют, как было описано выше.
Метод секторных посевов
Для определения числа микробных клеток в 1 мл бактериальной суспензии (в частности мочи при клинических анализах) можно использовать метод секторных посевов. Платиновой петлей, диаметром 2 мм, емкостью 0,005 мл, производят посев суспензии (30-40 штрихов) на сектор А чашки Петри с питательным агаром. После этого петлю прожигают и производят 4 штриховых посева:
- из сектора А в сектор 1
- из сектора 1 в сектор 2
- и аналогичным образом - из сектора 2 в 3.
 |
Рис. 5.1 Схема секторных посевов
Количество колоний в секторах
Количество бактерий в 1 мл. суспензии
Метод секторных посевов позволяет не только определить степень загрязнённости суспензии, но и выделить чистые культуры микроорганизмов.
Важно отметить, что схема исследования суспензий в принципе одинакова для самых разных случаев, в том числе при изучении микрофлоры воздуха или смывов с любой поверхности.
5. 4 Метод "тампон-петля":
Смывы с поверхности можно исследовать методом “тампон – петля”. Материал, взятый ватным стерильным тампоном, засевают на плотную питательную среду (МПА). Посев на чашку с агаром производят методом “тампон – петля”.(См. рис. 5.2)
- тампоном проводится "дорожка" по диаметру чашки,
- затем другой стороной тампона в обратном направлении засевается еще одна "дорожка", параллельная первой,
- материал рассевают по чашке при помощи петли штрихами, перпендикулярными к "дорожкам".
 |
Рис.5.2 Схема посева “тампон-петля”
Схема посева при выполнении этого метода может быть и несколько иной. Тампоном делают не полоски а пятна – отпечатки, которые затем расштриховывают петлёй.
5.6 Транспортировка инфекционного материала
Доставка инфекционного материала в лабораторию осуществляется в специальном металлическом футляре, биксе и т.п. Не допускается перевозка инфекционного материала в хозяйственных сумках, чемоданах, портфелях и других предметах личного пользования. Распаковка материала, присланного в лабораторию для исследования, проводится с соблюдением мер предосторожности: банки и пробирки, содержащие материал, обтирают дезинфицирующим раствором и ставят на металлические подносы или штативы.
Перенос инфекционного материала из одной лаборатории в другую на территории учреждения осуществляется в специально приспособленной опломбированной металлической посуде (металлических баках, биксах). За пределы данного учреждения инфекционный материал выносится в запаянных ампулах, флаконах и пр., завернутых в лигнин или гигроскопическую вату и помещенных в металлический сосуд (пенал) с плотно закрывающейся крышкой, опломбированной или опечатанной сургучной печатью. Документация оформляется в соответствии с действующим Положением (см. пункт 1.5а).
Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы министерства здравоохранения СССР УТВЕРЖДЕНЫ Президиумом ЦК профсоюза медицинских работников 2 октября 1981 г., протокол N 58 МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР
Заместитель Министра здравоохранения СССР, Главный государственный санитарный врач СССР П.Н.БУРГАСОВ 20 октября 1981 г. N 2455-81
1. Блохина И.Н., Ладыгина Г.Н., Соколова К.Я., Залесских Н.В., Коровенков А.Н. Методы идентификации бактерий. Учебное пособие. Горький. Изд.ГГУ, 1986. 76 с.
2. Борисов Л. Б., Козьмин-Соколов Б.Н., Фрейдлин И.С. Руководство к лабораторным занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. Уч. пособие. М. Медицина. 1993. 240 с.
3. Звягинцев Д.Г. Почва и микроорганизмы. М. Изд. МГУ, 1987. 256 с.
4. Мейнелл Дж., Мейнелл Э. Экспериментальная микробиология. (Теория и практика). М. Мир. 1967. 348 с.
5. Пименова М.И., Гречушкина Н.Н., Азова Л.Г. Руководство к практическим занятиям по микробиологии (малый практикум). М. Изд. МГУ, 1971. 222 с.
6. Практикум по микробиологии.// учебное пособие. Под редакц. Н.С.Егорова. М. Изд-во моск. ун-та. 1976. 307 с.
7. Стейниер Р., Эдельберг Э., Ингрем ДЖ.. Мир микробов. в 3 т. М.Мир.1979. т.3. 486 с.)
8. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под ред. М.О. Биргера. М. Медицина. 1982. 464 с.
9. Утевский Н.Л. Элементы медицинской микробиологии и медицинской техники. М.Медгиз.1952. 303 с.
10. Никитин Д.П., Новиков Ю.В., Рощин А.В.Справочник помошника санитарного врача и помошника эпидемиолога. М. Медицина. 1990. С. 512. Изд-е второе. Под редакц. Д.П. Никитина, А.И. Заиченко
11. Определитель бактерий Берджи. В 2-х томах. Перев. С англ./ Под редакц. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита, Дж. Стейли, С. Уильямса. М. Мир. 1997. Т. 1. С. 432., т. 2. С. 368.
© 2014-2022 — Студопедия.Нет — Информационный студенческий ресурс. Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав (0.011)
Документ из архива "Лекция. Бактериологический метод диагностики", который расположен в категории "лекции и семинары". Всё это находится в предмете "микробиология" из четвёртого семестра, которые можно найти в файловом архиве СГМУ. Не смотря на прямую связь этого архива с СГМУ, его также можно найти и в других разделах. .
Онлайн просмотр документа "Лекция. Бактериологический метод диагностики"
Текст из документа "Лекция. Бактериологический метод диагностики"
Бактериологический метод диагностики
Важным этапом бактериологического исследования является посев. В зависимости от цели исследования, характера посевного материала и среды используют разные методы посева. Все они включают обязательную цель: оградить посев от посторонних микробов.
Посев из пробирки в пробирку. Пробирку с посевным материалом и пробирку со средой держат слегка наклонно в левой руке между большими и указательными пальцами так, чтобы края пробирок были на одном уровне, а их основания находились поверх кисти. Вынув пробки, края пробирки обжигают в пламени спиртовки. Прокаленную петлю вводят в пробирку с посевным материалом, охлаждают и, набрав немного материала, переносят в пробирку со средой. После посева петлю извлекают из пробирки, края пробирок обжигают и, проведя пробки через пламя спиртовки, закрывают пробирки, после чего прокаливают петлю.
При посеве на жидкие среды тампоном его погружают в среду и 3-5 секунд ополаскивают в ней.
Посев петлей. Небольшое количество посевного материала втирают петлей в поверхность среды у края чашки, несколько раз проводя петлей из стороны в сторону. Затем у того места, где закончились штрихи, агар прокалывают петлей, снимая избыток посевного материала. Оставшийся на петле посевной материал зигзагообразными движениями распределяют по всей поверхности среды. По окончании посева закрывают чашку и прожигают петлю.
Посев тампоном. Тампон с посевным материалом вносят в слегка приоткрытую чашку и круговыми движениями втирают его содержимое в поверхность среды. Засеянные чашки подписывают со стороны дна и помещают в термостат дном вверх.
Метод секторных посевов используется при исследовании мочи. Определение степени бактериурии, по количеству выросших колонии, производят согласно таблице. Данный метод позволяет не только определить степень бактериурии, но и выделить возбудителя заболевания в чистой культуре.
Степень бактериурии позволяет дифференцировать инфекционный процесс в мочевых путях от контаминации мочи нормальной микрофлорой. С этой целью используют следующие критерии:
1. Степень бактериурии, не превышающая 10 3 микробных клеток в 1 мл мочи, свидетельствует об отсутствии воспалительного процесса и обычно является результатом контаминации мочи.
2. Степень бактериурии, равная 10 4 микробных клеток в 1 мл мочи, расценивается как сомнительный результат. Исследование следует повторить.
3. Степень бактериурии, равная и выше 10 5 микробных клеток в 1 мл мочи, указывает на наличие воспалительного процесса.
Чистая культура – содержит микроорганизмы одного вида и полученные как потомство одной клетки.
· Метод Дригальского - метод изолированных колоний, используется для культур, растущих на плотных питательных средах.
Исследуемую колонию равномерно распределяют при помощи стерильного шпателя по поверхности питательной среды в 1-ой чашке. Потом, не прожигая шпатель на огне, делают им же посев на 2-ой и 3-ей чаше. Суть метода Дригальского заключается в том, что с каждым последующим посевом культур концентрация бактерий (аэробов) все меньше. На 3-ей чашке они распределяются довольно обособленно, каждая бактериальная клетка при этом дает клональные клетки (в виде изолированной колонии).
Вместо шпателя можно пользоваться петлей. Материал на питательной среде распределяют по ½ чашке параллельными штрихами, затем повернув чашку на 90 градусов проводят штрихи в направлении перпендикулярном первым штрихам
·Метод Коха - метод серийных разведений, используется для культур, не растущих на плотных питательных средах.
Три пробирки, содержащие 15 мл расплавленного МПА. В первую пробирку вносят одну бактериологическую петлю исследуемого материала. После этого одну петлю содержимого первой пробирки переносят во вторую и таким же образом из второй в третью. Приготовленные разведения выливают из пробирок в стерильные чашки Петри.
Количество колоний в чашках с питательной средой уменьшается по мере разведения материала.
· Метод Шукевича - используется для микроорганизмов дающих ползучий рост (роение).
Определение вида возбудителя заболевания из материала больного проводят по следующим признакам:
1. По морфологии возбудителя (из чистой культуры готовят мазки, окрашивают и микроскопируют).
2. По культуральным свойствам (характеру роста на питательных средах.).
3. По биохимической активности:
Сахаролитическая активность - разложение углеводов и многоатомньгх спиртов до кислоты (К) - изменение цвета индикатора, или до кислоты и газа (КГ) - изменение цвета индикатора и образование пузырьков газа. Сахаролитическую активность изучают на средах Гисса, которые содержат тот или иной углевод, многоатомный спирт и индикатор.
Протеолитическая активность - способность разлагать белки с образованием аммиака (лакмусовая бумажка синеет); сероводорода - сеют микроорганизм на пептонную воду и под пробку вносят индикаторную бумажку, пропитанную уксусно-кислым свинцом - при выделении сероводорода бумажка чернеет; индола - сеют культуру на мясо-пептонный бульон, под пробирку вносят индикаторную бумажку, пропитанную щавелевой кислотой - при выделении индола бумажка розовеет.
Способы изучения биохимических свойств бактерий:
Б). Система индикаторных бумаг (СИБы).
Состав: диски из фильтровальной бумаги, пропитанные питательными средствами (питательная основа + субстрат + индикатор) и высушенные, хранятся во флаконах.
В). Панели биохимической идентификации.
Состав: в лунках специальных пластиковых панелей находятся соответствующие высушенные питательные среды (питательная основа + субстрат + индикатор).
Принцип действия: в лунки вносят суспензию исследуемой культуры и после инкубации (от 5 до 24 часов) учитывают результат по изменению цвета индикатора.
Г). Системы автоматизированной идентификации.
Принцип действия тот же, что и в предыдущем методе, однако инкубация панелей, учет результатов и идентификация производится при помощи компьютера.
4. По антигенной структуре: постановка реакции агглютинации (РА) на стекле с агглютинирующими сыворотками.
5. Фаготипаж: определение вида возбудителя по заведомо известному бактериофагу (вирус бактерий) методами: стерильного пятна и просветления бульона.
6. По признакам патогенности: определение токсигенности культуры (в реакции преципитации в агаре (ПР); в реакции нейтрализации на животных (РН). По ферментам патогенности (лецитоветиллаза, плазмокоагулаза). Антифагины - капсула при микроскопировании.
Читайте также: