Назовите основной метод микробиологической диагностики кишечных инфекций с использованием посевов

Обновлено: 02.07.2024

Цель. Изучить особенности этиологии, эпидемиологии и патогенеза кишечных инфекций. Овладеть навыками оценки результатов лабораторной диагностики кишечных инфекций.

Теоретическая справка

Семейство Enterobactericeaeвключает 12 родов:Escherichia,Salmonella,Shigellaи др. бактерии этого семейства имеют общие морфологические и физиологические свойства: все они грамотрицательные палочки, без спор, неприхотливы к питательным средам, факультативные анаэробы, имеют многочисленные сахаролитические, протеолитические ферменты. Антигенное строение служит одним из существенных критериев, на которых основывается классификация, а так же идентификация энтеробактерий. Различают три типа антигенов: О-соматический, у некоторых Н-жгутиковый, К-антигены, у энтеробактерий обнаружены общие антигены. Один них – антиген Кунига – связан с ЛПС.

Микробиологическая диагностика эшерихиозов

Цель. Изучить классификацию и особенности патогенеза эшерихиозов. Овладеть методами оценки результатов лабораторного исследования для подтверждения диагнозов эшерихиозов. Научиться практически решать вопросы по использованию эубиотиков для коррекции микрофлоры кишечника.

Патогенные варианты E.coliделятся на пять категорий по О-антигену:

1.Энтеропатогенные (ЭПКП): 0111, 055, 0126.

2.Энтероинвазивные (ЭИКП): 0152, 0124, 0144.

3.Этеротоксигенные (ЭТКП): 0128, 085, 0148.

4.Энтерогеморрагические (ЭГКП): 0157, 026, 0145.

5.Энтероадгезивные (ЭАГКП) (структурная основа пока неизвестна).

В лабораторной диагностике эшерихиозов используется первый принцип диагностики: обнаружение возбудителя – метод бактериологиеский.

Выбор исследуемого материала - испражнений – определен локализацией патологического процесса в кишечнике. Посев производят на среду Левина или на среду ЭНДО – темно-красные колонии с металлическим блеском. Для выявления патогенных вариантов кишечных палочек учитывают антигенное строение этих микроорганизмов: О-, К- и Н-антигены. Агглютинация с ОК-сывороткой материала из колонии позволяет определить наличие О-антигена, свидетельствующего о патогенном варианте этих бактерий. В то же время антиген К(В) обусловливает О-инаглютинабельность микроорганизмов, а о серогруппе эшерихий судят по О-антигенам. Разрушение термолабильных К- и Н-антигенов позволяет определить принадлежность выделенных бактерий к той или иной серогруппе.

Самостоятельное практическое задание Задание 1

Цель.Освоить бактериологический метод диагностики эшерихиозов.

Бактериологический метод диагностики.

1-й этап– посев материала.

Посеять с помощью петли 1-2 капли исследуемого материала методом механического разобщения микробов на среду Эндо. Чашку поместить в термостат на 24 часа.

2-й этап– выделение чистой культуры.

Изучить колонии, выросшие на среде Эндо: колонии кишечных палочек темно-красного цвета с металлическим блеском. Для дифференциации патогенных кишечных палочек от непатогенных поставить на стекле реакцию агглютинации выросших колоний со смесью ОК-сывороток. Отсеять колонию, дающую положительную реакцию агглютинации, на трехсахарный агар (Олькеницкого, Клиглера) для выделения чистой культуры. Поместить посев в термостат на 24 часа.

3-й этап идентификация выделенной чистой культуры:

а) по морфологии

б) биохимическим свойствам

в) антигенной структуре

Цель. Изучить состав элективных и дифференциально-диагностических сред для культивирования микроорганизмов кишечно-тифозной и дизентерийной групп. Оформить протокол.

Используя аннотации к питательным средам, внести в протокол описание сред, применяемых для диагностики кишечных инфекций.

К какой группе питательных сред относится

Вещества, придающие элективные и дифференциально-диагностические свойства

Цель. Изучить препараты для коррекции микрофлоры кишечника и используемые при лечении эшерихиозов. Изучить специфические препараты для определения серогруппы патогенных кишечных палочек.

Протокол исследования.

Максимальный и минимальный диагностические титры

Для лечения используются препараты, обладающие антагонистическими свойствами в отношении патогенных серогрупп кишечных палочек и дизентерийных бактерий, либо живые вирусы бактерий – бактериофаги.

1.Колибактерин сухой и молочный. Содержит живую культуру антагонистически активного штамма кишечной палочки М17. Молочный колибактерин готовится путем закваски кипяченого молока растворенным сухим колибактерином. Колибактерин применяется для лечения следующих заболеваний у детей и взрослых: хронические колиты различной этиологии, в том числе постдизентерийные; неспецифический язвенный колит; дисбактериозы, возникающие в результате применения антибиотиков, сульфаниламидных препаратов и других причин; санация выздоравливающих после дизентерии. Колибактерин применяется с 6-месячного возраста. Лечение колибактерином следует применять вместе с применением витаминов. К аналогичным препаратам относятся бифидумбактерин, бификол, лактобактерин.

2. Бифидумбактерин готовиться из облигатных для человека анаэробных бифидобактерий.

3. Бификол комплексный препарат из №1 и №2

4. Лактобактерин содержит облигатные для человека молочнокислые бактерии, как бифидумбактерин, антагонистически активные к патогенным и условно-патогенным энтеробактериям.

5. Бактериофаг коли – смесь очищенных стерильных фильтратов фаголизатов колибактерий наиболее распространенных серогрупп: 018, 020, 026, 033, 044, 075, 0114, 018, 0142, 0144 и др. применяют местно на пораженный участок, в рану, в полость при абсцессах и при заболевании внутренних органов.

6. Бактериофаг коли-протейный – смесь стерильных фильтратов фаголизатов энтеропатогенных эшерихий, активных в отношении наиболее распространенных серогрупп: 0111, 020, 026, 033, 044, 055, 0119, 0124, 0125, 0127, 0151 и др. и протея видов мирабилис и вульгарис. Применяют для лечения и профилактики дисбактериозов, инфекций коли-протейной этиологии.

Информация для врачей инфекционистов, врачей – педиатров, семейных врачей, врачей-терапевтов, врачей-эпидемиологов

Актуальность проблемы острых кишечных инфекций (ОКИ) обусловлена широким распространением патологии, тяжестью течения, необходимостью быстрого назначения этиотропной терапии, характер которой зависит от выявления возбудителя инфекции. Этиологическая диагностика ОКИ входит в комплекс первичных противоэпидемических мероприятий.

  1. Групповой антиген ротавирусов методом иммуноферментного анализа (ИФА);
  2. РНК (ДНК) ротавирусов группы А, норовирусов 2 генотипа, астровирусов, аденовирусов группы F , кампилобактерий, энтероинвазивных эшерихий и шигнелл, сальмонелл методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Наиболее целесообразным является исследование фекалий больного методом ПЦР, так как при этом имеется возможность одномоментной индикации большого количества возбудителей ОКИ, наиболее часто вызывающих инфекцию.

По результатам исследований, выполняемых вирусологической лабораторией, использование метода ИФА для индикации ротавирусов позволяет уточнить этиологию ОКИ в 35% случаев, использование метода ПЦР для индикации указанного спектра возбудителей ОКИ – в 70% случаев.

Использование традиционных бактериологических методов исследований способствует расшифровке не более 30% случаев ОКИ, особенно в зимнее-весенний период времени, когда отмечается рост заболеваемости ОКИ вирусной этиологии.

Правила отбора и доставки материла:

Для выполнения указанных исследований необходимо доставить в вирусологическую лабораторию пробу фекалий, отобранную в острый период заболевания (не позднее 3-го дня от начала клинических проявлений).

Пробу необходимо отобрать в одноразовый пластиковый стерильный контейнер с завинчивающейся крышкой, который можно приобрести в любой аптеке или получить в лаборатории, выполняющей данное исследование.

Количество отбираемых фекалий – 1-3 мл, фекалии отбираются одноразовой лопаточкой из нескольких мест (4 - 6 раз) в небольшом количестве в один контейнер.

Пробу допускается хранить в условиях холодильника при температуре 2-8ºС, доставить в лабораторию в течение 3 суток. При комнатной температуре проба может храниться не более 6 часов.

Стоимость исследований: обнаружение антигена ротавирусов методом ИФА – 190 рублей, обнаружение спектра возбудителей ОКИ методом ПЦР – 700 рублей.

Лицензия на осуществление деятельности, связанной с использованием возбудителей инфекционных заболеваний III- IV групп патогенност и № 77.99.15.001.Л. 000961.07.05 от 04.07.2005г. действительна до 04.07.2010г.

Лицензия на осуществление медицинской деятельности № ФС -29-01- 000276 от 17.06.2009г, действительна до 17.06.2013г.

Вирусологическая лаборатория расположена по адресу: г. Архангельск, ул. Гайдара, д. 24, тел/факс 65-27-68.

Общая характеристика. Семейство Entero­bacteriaceae является самым многочисленным семейством патогенных и условно-патогенных бактерий. Объединяет более 20 родов. Семейство обладает большой степенью гетерогенности. Центральное положение занимает род Escherichia (50—52 % ГЦ-пар), который являет­ся типовым родом семейства. Близкородственное к нему положение занимают роды Shigella (50—52 % ГЦ-пар) и Salmonella (50-53 % ГЦ-пар).

Морфология и физиология. Семейство энтеробакгерий представлено грамотрицательными палочками, размером 1+5x0,4+0,8 мкм. Могут быть подвижными за счет перитрихиальных жгутиков. Некоторые образуют капсулу. Спор не образуют. Растут на простых питательных средах, большинство хорошо культивируется при 37 °С, некоторые (род Yersinia) наибольшей метаболической активностью обладают при 25—30 °С. Факультативные анаэробы. Обладают дыхательным и бродильным метаболизмами. Оксидазаотрицательны. Каталазаположительны.

Способны восстанавливать нитраты за счет на­личия нитратредуктазы.

Энтеробактериям присущи два типа фер­ментации глюкозы муравьино-кислым бро­жением. При смешанном типе, выявляемом реакцией с метил красным, образуется боль­шое количество кислот, в некоторых случа­ях — газ. При бутандиоловом типе основными продуктами являются 2,3-бутандиол и этанол, выявляемые реакцией Фогеса—Проскауэра.

Распространение в природе. Патогенность.

Энтеробактерии разнообразны по экологии и кругу хозяев. Они распространены повсе­местно: в почве, воде, в составе микрофлоры различных животных, человека. Могут вызы­вать заболевания у человека, животных, птиц, насекомых, растений.

Представители родов Escherichia, Shigella, Salmonella вызывают у человека ОКИ, энтеропатогенные иерсинии, Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica — псевдотубкулез и кишечный иерсиниоз соответственно, a Y. pestis — чу­му. Представители родов Klebsiella, Proteus, Providencia, Serratia являются возбудителями внутрибольничных (нозокамиальных) инфек­ций, а некоторые из них вызывают пищевые токсикоинфекции, заболевания органов рес­пираторного и мочевыделительного трактов.

Факторы патогенности разнообразны и в раз­личных комбинациях присутствуют в опреде­ленных видах. Все энтеробактерии содержат эндотоксин, который освобождается после разрушения микробных клеток. Некоторые представители семейства продуцируют белко­вые токсины, обладающие Цитотоксическим и энтеротоксическим эффектами, могут вы делять гемолизины. Антифагоцитарная актив­ность обеспечивается факторами, присущими определенным видам. К ним относятся капсу­ла, ферменты супероксидцисмутаза и адени- латциклаза, поверхностные белки и специфи­ческие антигены. Начальные этапы инфекции опосредуются структурами, обеспечивающими взаимодействие с поверхностным эпителием. К ним относятся поверхностные структуры 3-го типа: фимбрии 3-го типа, фибриллярные белки, белки наружной мембраны, О-антиген. Установлено 4 типа механизмов взаимодейс­твия возбудителей ОКИ с поверхностным эпи­телием кишечника (табл. 16.10).

Антигенная структура энтеробактерий пред­ставлена соматическим О-антигеном. Могут также встречаться жгутиковый Н-антиген и поверхностный (капсульный) К-антиген. Антигенной активностью обладают также фимбрии 3-го типа. Представители некоторых родов, в частности рода Yersinia, имеют допол­нительные видоспецифические антигены.

Основу микробиологической диагностики инфекционных процессов, вызванных пред­ставителями семейства Enterobacteriaceae, со­ставляет бактериологический метод исследо­вания. Используются также серологический метод и ПЦР.

­Основной метод бактериологический, (неисключено применение серологического метода) который предусматривает выделение чистой культуры из испражнений, крови, гноя, кал, гнойно-слизистые-кровяные образования, рвотные массы, промывные воды желудка, желчь.

Комплексное молекулярно-генетическое исследование, которое позволяет выявить генетический материал наиболее вероятных возбудителей острых кишечных инфекций в кале и установить этиологию заболевания.

Синонимы русские

Синонимы английские

Acute intestinal infection screening; Bacterial and viral diarrhea screening, PCR, fecal samples.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
  • Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.) и на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Острые кишечные инфекции (ОКИ) – группа заболеваний, обусловленных вирусами, бактериями или паразитами, для которых характерен фекально-оральный механизм передачи. Общими для данных инфекций являются факторы передачи: пищевые продукты, вода, инфицированные бытовые предметы и грязные руки. Первые симптомы возникают через несколько часов или дней после инфицирования, начало резкое, с появлением частого жидкого стула, рвоты, боли в животе, признаков интоксикации (лихорадки, озноба, тошноты). Заболевание может носить групповой характер и проявиться у нескольких человек, употреблявших инфицированную пищу или воду.

Согласно официальной статистике, в России до 65-67% заболеваний этой группы составляют ОКИ неуточненной этиологии. Если возбудитель инфекции неизвестен, эффективность противоэпидемических мероприятий ограничивается. Соотношение частоты выявления вирусных и бактериальных патогенов варьируется в разных возрастах: у детей до 3 лет на долю вирусных агентов приходится 80-90% заболеваний, на долю бактериальных – 10-20%; среди взрослых пациентов доля вирусных возбудителей снижается до 30%.

Shigella species и Esherichia coli – грамотрицательные палочковидные микроорганизмы из семейства энтеробактерий. К роду Shigella относятся патогенные бактерии S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei, которые являются возбудителями шигеллеза (бактериальной дизентерии). Энтероинвазивные E. coli (EIEC) очень близки с шигеллами, синтезируют и выделяют шигеллоподобный токсин, способны проникать в клетки слизистой кишечника и разрушать энтероциты, что приводит к образованию язвенных дефектов в слизистой кишечника. За значительную часть случаев "бактериологически неподтвержденной дизентерии", особенно у детей, ответственен энтероинвазивный эшерихиоз.

Бактерии рода Salmonella относятся к семейству энтеробактерий. S. typhi и S. parathyphi являются возбудителями брюшного тифа и паратифа. Существует множество серовариантов Salmonella species, способных вызвать у человека инфекцию по типу гастроэнтероколита, а также стать причиной внутрибольничных инфекций. Сальмонеллез может протекать в форме острой кишечной инфекции, тяжелой генерализированной инфекции или бессимптомного носительства. Окончательный диагноз ставится только после выделения возбудителя или обнаружения его ДНК.

Кампилобактерии являются одними из наиболее сложных для культивирования (которое требуется в ходе анализа) микроорганизмов. Это объясняется их микроаэрофильностью и возможностью подавления их роста сопутствующей флорой. Род кампилобактерий объединяет как возбудителей ОКИ (термофильные виды), так и сапрофитные и условно-патогенные виды, о чем необходимо помнить при выявлении этих микроорганизмов в клиническом материале. Применение наборов на основе ПЦР для определения термофильной группы кампилобактерий позволяет не только избежать трудоемкой и высокозатратной бактериологической работы, но и четко ограничить детекцию тех видов кампилобактерий, которые имеют этиологическую связь с острой кишечной инфекцией (С. jejuni, C. coli, C. lari, C. upsaliensis).

В соответствии с данными зарубежной литературы, норовирус – наиболее частый возбудитель вспышек ОКИ небактериальной этиологии. Эта особенность связана с низкой инфицирующей дозой и высокой устойчивостью в окружающей среде. ПЦР является "золотым стандартом" в клинической диагностике норовирусных инфекций.

Несмотря на несколько меньшую в сравнении с рота- и норовирусами распространенность, астровирусы составляют значительный пласт кишечных инфекций, у трети пациентов протекающий с явлениями колита. Ротавирусы группы А являются наиболее частой причиной спорадических заболеваний ОКИ у детей, а ДНКсодержащий аденовирус F (серотипы 40 и 41) нередко вызывает вспышки гастроэнтеритов у детей младшего возраста.

Для выявления и дифференциальной диагностики кишечных инфекций используются культуральные и молекулярно-генетические методы исследования генетического материала возбудителя в кале и определение концентрации специфических иммуноглобулинов в крови. ПЦР обладает преимуществом перед культуральными методами благодаря быстрому получению результатов, высокой специфичности и чувствительности исследования. Данный анализ позволяет со 100-процентной точностью определить возбудителя кишечного заболевания, а быстрая диагностика острых кишечных инфекций помогает избежать лишних процедур и оперативных вмешательств, своевременно начать лечение и ограничить очаг распространения инфекции.

Читайте также: