Посев гонококка на сывороточный агар
Обновлено: 05.10.2024
1. Тема: Патогенные нейссерии. Менингококки. Гонококки.
2. Цели занятия : Изучить со студентами свойства менингококков и гонококков, их роль в патологии человека, методы диагностики, профилактики и лечения вызываемых заболеваний.
3. Задачи занятия :
3.1. Изучение свойств менингококков и гонококков.
3.2. Изучение патогенеза и клинической картины заболеваний, вызываемых менингококками и гонококками.
3.3. Изучение методов диагностики, профилактики и лечения заболеваний, вызываемых менингококками и гонококками.
3.4. Выполнение самостоятельной работы.
ухода за больными
терапии больным с
Работать с учебной
4. Продолжительность занятия в академических часах : 3 часа.
5. Контрольные вопросы по теме :
5.1. Морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические свойства менингококков.
5.2. Факторы патогенности менингококков и патогенез вызываемых заболеваний.
5.3. Методы диагностики, профилактики и лечения заболеваний, вызываемых менингококками.
5.4. Морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические свойства гонококков.
5.5. Факторы патогенности гонококков и патогенез гонореи.
5.6. Методы диагностики, профилактики и лечения заболеваний, вызываемых гонококками.
6. Задания и методические указания к их выполнению .
На занятии студенту необходимо выполнить:
6.1. Ответить на вопросы преподавателя.
6.2. Принять участие в обсуждении изучаемых вопросов.
6.3. Изучить схемы лабораторной диагностики заболеваний, вызываемых менингококками и гонококками.
6.4. Выполнить самостоятельную работу.
Теоретическая справка Нейссерии - грамотрицательные аэробные кокки. Относятся к роду
Neisseria . В состав этого рода входят такие патогенные для человека виды как Neisseria meningitidis (менингококк, возбудитель менингита) и Neisseria gonorrhoeae (гонококк, возбудитель гонореи). Несколько видов нейссерий обитают на слизистых оболочках человека и являются представителями нормальной микрофлоры носоглотки и верхних дыхательных путей ( N. sicca ,
N. flavescens , N. perflava , N. mucosa , N. lactamica ).
Менингококковая инфекция - это острое инфекционное заболевание человека, которое передается воздушно-капельным путем и характеризуется поражением слизистой оболочки носоглотки с последующим развитием менингококковой септицемии и воспалением мягких мозговых оболочек.
Морфология . Менингококки являются диплококками (клетки располагаются попарно) и имеют округлую форму. Поверхности, обращенные друг к другу, вогнутые. Грамотрицательные. Жгутиков не имеют, спор не образуют, образуют капсулу.
Культуральные свойства . Строгий аэроб. Требователен к питательным средам и условиям культивирования. Для его культивирования используют среды с добавлением крови, сыворотки крови, яичного желтка, аминокислот. Наиболее оптимальной бессывороточной средой является среда Мюллера-Хинтона, содержащая мясной экстракт и набор аминокислот. Оптимальное значение рН - 7,2-7,4. Температурный оптимум - 37°С. На сывороточном агаре образует круглые бесцветные мелкие колонии диаметром 0,5-1,5 мм. На кровяном агаре формирует колонии сероватого цвета с блестящей поверхностью без зон гемолиза.
Биохимическая активность низкая. Разлагает глюкозу и мальтозу до кислоты, не разжижает желатин, не образует индола и сероводорода, не восстанавливает нитраты.
Антигенная структура . По строению капсульных полисахаридных антигенов менингококки подразделяются на серогруппы (более 13). Штаммы серогруппы А вызывают эпидемические вспышки, В и С - спорадические случаи заболевания. По белкам наружной мембраны и липополисахаридам клеточной стенки менингококки подразделяют на серовары или серотипы
Факторы патогенности . Основной фактор патогенности - капсула ,
защищающая менингококки от фагоцитоза. Токсические проявления менингококковой инфекции обусловлены эндотоксином, который оказывает выраженное пирогенное действие и вызывает поражения сосудов и кровоизлияния во внутренние органы. К факторам патогенности относятся также пили , белки наружной мембраны , гиалуронидаза и нейраминидаза .
Пили и белки наружной мембраны способствуют адгезии менингококков к слизистой оболочке носоглотки, а гиалуронидаза и нейраминидаза – распространению возбудителя в тканях.
Резистентность . Менингококки слабоустойчивы во внешней среде. При температуре 10°С погибают через 2 часа, температура 55°С убивает их через 5 минут, 80°С - за 1-2 минуты, кипячение - моментально. Аналогичный эффект оказывает ультрафиолетовые лучи. Возбудитель чувствителен к действию антисептиков, дезинфектантов и антибиотиков. Под действием 1% раствора фенола, 0,5-1% раствора хлорамина, 70% этанола, 3-5% раствора карболовой кислоты менингококки погибают в течение 1 минуты.
Эпидемиология . Источник инфекции - больной человек (больные генерализованными формами или больные назофарингитом) и носители.
Механизм передачи - аэрогенный, путь передачи - воздушно-капельный.
Заболеваемость носит сезонный характер, увеличиваясь в осенне-зимний период. Болеют в основном дети до 15 лет и лица юношеского возраста. Возникновению вспышек способствует скученность детей в детских организованных коллективах, учащихся школ и техникумов, студентов.
Патогенез . Менингококки внедряются в организм человека через слизистые оболочки носоглотки. Размножаясь, они формируют первичный очаг воспаления. По окончаниям обонятельного нерва воспалительный процесс может распространиться на оболочки мозга. Возможно гематогенное распространение менингококка по организму.
Клиника . Различают следующие формы заболевания:
- локализованные формы (менингококконосительство, назофарингит);
- генерализованные формы (менингококцемия, менингит, менингоэнцефалит).
Эпидемический цереброспинальный менингит имеет 5-7-дневный инкубационный период. Начало заболевания острое. В начале болезни отмечаются сильная головная боль, рвота, высокая лихорадка, затем развиваются менингеальные симптомы.
Иммунитет . После переболевания развивается напряженный иммунитет, повторные случаи заболевания почти не наблюдаются. Новорожденные дети обладают естественным приобретенным пассивным трансплацентарным иммунитетом в течение 2-6 месяцев.
Микробиологическая диагностика . Материал для исследования -
носоглоточная слизь (от больных и носителей), ликвор, кровь. При менингите основным исследуемым материалом является ликвор, который берут в день госпитализации больного. Носоглоточную слизь берут специальным тампоном с задней стенки глотки. Материал транспортируют в утепленных контейнерах при 30-35°С.
Для микробиологической диагностики применяют бактериоскопический, бактериологический и серологический методы.
Бактериоскопическое исследование ликвора и крови позволяет определить наличие возбудителя. Для этого готовят мазки, которые окрашивают по Граму. При микроскопии в положительных случаях об-
наруживают менингококки с типичной морфологией, окруженные капсулой в виде бесцветного ореола. Носоглоточную слизь не микроскопируют из-за наличия в ней условно-патогенных нейссерий, морфологически сходных с менингококками.
- образование кислоты при ферментации глюкозы и мальтозы;
- принадлежность к серогруппам (в реакции агглютинации).
Лечение . Используют антибиотики (бензилпенициллин, ампициллин, оксациллин, левомицетин, рифампицин), а также симптоматические средства.
Профилактика . Проводится комплекс мер, направленных на ликвидацию источника инфекции (изоляция больных, выявление и санация носителей), разрыв путей передачи (разобщение коллективов), ликвидацию возбудителя (дезинфекция).
В очаге инфекции проводится специфическая активная и пассивная профилактика. Для создания активного иммунитета используют вакцины
из очищенных капсульных полисахаридов менингококков серогрупп А и С.
Для создания пассивного иммунитета детям дошкольного возраста вводят однократно иммуноглобулин . Профилактический эффект иммуноглобулина сохраняется в течение нескольких месяцев после введения.
Кроме того, в замкнутых коллективах при возникновении даже одного случая менингококковой инфекции проводят химиопрофилактику с применением антибиотиков.
Гонококковая инфекция - это острое или хроническое инфекционное заболевание человека, которое характеризуется гнойным воспалением слизистой оболочки мочеполовых путей (гонорея), конъюнктивы глаз (бленнорея) и других органов.
Морфология . Возбудителем гонореи является Neisseria gonorrhoeae . Он представляет собой неподвижные грамотрицательные диплококки бобовидной формы, образующие капсулу. Спор не образует.
Культуральные свойства . Аэроб. Для выращивания используют питательные среды с добавлением крови, сыворотки крови или асцитической жидкости. Оптимум рН 7,2-7,4, оптимальная температура выращивания - 37°С. На плотных питательных средах образует бесцветные мелкие колонии с ровными краями. В жидких питательных средах образует поверхностную пленку.
Биохимическая активность гонококков очень низкая. Разлагают только глюкозу с образованием кислоты. Протеолитическая активность отсутствует, аммиака, сероводорода и индола не образуют. Гемолитическая активность отсутствует.
Антигенная структура . Содержат соматический и капсульный антигены. По составу белков наружной мембраны выделяют 16 серотипов.
Факторы патогенности. Все свежевыделенные культуры имеют капсулу , которая обладает антифагоцитарным действием. Пили обеспечивают адгезию к эпителию. У авирулентных штаммов они отсутствуют. Клеточная стенка гонококков содержит эндотоксин , обладающий пирогенными свойствами. Наружная мембрана содержит белки трех классов. Поверхностный белок I класса обусловливает устойчивость к бактерицидным факторам слизистых оболочек, а также инвазивные свойства бактерий. Поверхностный белок II класса обусловливают прикрепление к эпителию, а также ингибируют фагоцитарные реакции. Протеаза расщепляет молекулы иммуноглобулинов в шарнирной области. Это инактивирует антитела, препятствующие адгезии, что облегчает прикрепление гонококков к рецепторам эпителиальных клеток, а также защищает бактерии от фагоцитоза, опосредованного антителами.
Устойчивость в окружающей среде . Гонококки очень неустойчивы во внешней среде. Они чувствительны к действию широко применяемых антисептиков, дезинфектантов, антибиотиков (пенициллинам, тетрациклинам, стрептомицину).
Эпидемиология . Источник инфекции - больной человек, особенно хронической бессимптомно протекающей формой гонореи. Механизм передачи - контактный, путь передачи - половой, крайне редко - бытовой. Восприимчивость к гонококкам очень высокая.
Клиника . Гонококковая инфекция проявляется в виде гнойного воспаления слизистой оболочки мочеполовых путей (гонорея), конъюнктивы глаз (бленнорея), других органов. Инкубационный период 2-4 дня. Заболевание характеризуется резью при мочеиспускании, выделению гноя из уретры. Заболевание имеет тенденцию к переходу в хроническую бессимптомную форму. Нелеченая гонорея является одной из основных причин бесплодия как у мужчин, так и у женщин. Нелеченая бленнорея ведет к слепоте.
Иммунитет после перенесенного заболевания не формируется, поэтому часто регистрируются повторные случаи заболевания.
Микробиологическая диагностика . Материал для исследования
– гнойное отделяемое из уретры, влагалища, шейки матки. При необходимости используют материал из прямой кишки, ротовой полости, с конъюнктивы глаза, а также сыворотка крови. При заборе материала соблюдают следующие правила. За 2-3 суток перед забором материала прекращают применение дезинфицирующих и антибактериальных препаратов, воздерживаются от мочеиспускания в течение 4-6 часов и проводят туалет окружающих кожных покровов. Забор материала должен проводить лечащий врач.
Для диагностики применяют бактериоскопический, бактериологический и серологический методы.
Бактериоскопическое исследование . Готовят два мазка, один из которых окрашивают по Граму, а второй - метиленовым синим. В мазке, окрашенном по Граму, в положительном случае обнаруживают грамотрицательные диплококки бобовидной формы, а в мазке, окрашенном метиленовым синим, - картину незавершенного фагоцитоза.
Бактериологическое исследование проводят в тех случаях, когда гонококки в мазках не обнаруживают или находят атипичные, измененные формы. Посев производят непосредственно после забора материала на чашки с сывороточным или асцитическим агаром, средой КДС-1. Перед посевом питательную среду нагревают в термостате, чашки с посевами инкубируют в эксикаторе в атмосфере углекислого газа.
Серологический метод используют при хронической гонорее, при отсутствии у больного выделений. Применяют РСК (реакция Борде-Жангу).
Лечение зависит от формы заболевания (острая или хроническая). При острой гонорее применяют препараты пенициллина. После антибиотикотерапии проверяют излеченность.
При хронической гонорее проводят иммунотерапию (гоновакцина, пирогенал и др.) или местное воздействие (химические, механические и термические раздражители). После этого проводят курс антибиотикотерапии.
Для контроля излеченности прибегают к провокации. Для этого используют различные методы: химический (инсталляция в уретру 0,5% раствора ляписа), механический (массаж уретры на буже), биологический (введение гоновакцины), алиментарный (острая или соленая пища, алкоголь), термический (прогревание диатермическим током половых органов). Через 24, 48 и 72 часа после провокации исследуют выделения. При отсутствии после провокации гонококков в мазках и посевах больного оставляют для диспансерного наблюдения, а через месяц повторяют комбинированную провокацию и делают уретроскопию. Общая продолжительность диспансерного наблюдения за больными, перенесшими гонорею, составляет 2 месяца. Если в течение этого срока возбудитель и клинические проявления болезни отсутствуют, то таких лиц снимают с диспансерного учета.
Профилактика . Проводится комплекс мер, направленных на ликвидацию источника инфекции (активное выявление и лечение больных). Большое значение имеет санитарно-просветительная работа, направленная на пропаганду здорового образа жизни. Для профилактики бленнореи новорожденным при первичной обработке сразу же после рождения в глаза закапывают нитрат серебра.
После обсуждения теоретических вопросов преподаватель объясняет порядок проведения самостоятельной работы.
1. Микроскопирование демонстрационных препаратов, зарисовка в рабочую тетрадь.
2. Выполнение тестовых заданий, касающихся характеристик менингококков и гонококков, их роли в инфекционной патологии человека.
7. Оценивание знаний, умений, навыков по теме занятия :
Ответы на вопросы и активность на занятии оцениваются по 5-балльной системе.
8. Литература для подготовки темы :
1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник для студентов медицинских вузов. Под ред. А.А. Воробьева. Учебники и учеб. пособия для высшей школы. Издательство: Медицинское информационное агентство, 2012. – 702 с.
2. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. В 2-х т. Том 1 : учеб. по дисциплине “Микробиология, вирусология и иммунология” для студентов учреждений высш. проф. образования, обучающихся по специальностям 060101.65 “Лечеб. дело”, 060103.65 “Педиатрия”, 060104.65 “Медико-профилакт. дело” / под ред. В.В. Зверева, М.Н. Бойченко. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 448 с.: ил.
3. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. В 2-х т. Том 2 : учеб. по дисциплине “Микробиология, вирусология и иммунология” для студентов учреждений высш. проф. образования, обучающихся по специальностям 060101.65 “Лечеб. дело”, 060103.65 “Педиатрия”, 060104.65 “Медико-профилакт. дело” / под ред. В.В. Зверева, М.Н. Бойченко. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 480 с.: ил.
1. Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: Учебник для студентов мед. вузов / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. - 5-е изд., испр. и доп. – СПб.: СпецЛит, 2012. – 759 с.: ил.
2. Медицинская микробиология: учебник. 4-е изд. Поздеев О.К. / Под ред. В.И. Покровского. – 2010. – 768 с.
3. Руководство по медицинской микробиологии. Общая и санитарная микробиология. Книга 1 / Колл. авторов // Под редакцией Лабинской А.С., Волиной Е.Г. – М.: Издательство БИНОМ, 2008. – 1080 с.: ил.
Методические указания переработаны и дополнены профессором Литусовым Н.В.
Обсуждены на заседании кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии.
Тут вы можете оставить комментарий к выбранному абзацу или сообщить об ошибке.
Это диплококки бобовидной формы, в мазках имеют вид кофейных зерен. Спор не образуют, жгутиков не имеют, в организме образуют капсулу. Грамотрицательные. Строгие аэробы.
Менингококки требовательны к питательным средам — растут только на средах, содержащих человеческий белок (сывороточный агар, асцитагар), при температуре 37 °С. На сывороточном агаре образуют нежные прозрачные колонии средней величины. В сывороточном бульоне дают рост в виде помутнения и осадка на дне.
Биохимически малоактивны, ферментируют только глюкозу и мальтозу, образуя кислоту, но не образуя газ. Крайне неустойчивы во внешней среде, чувствительны к перемене температуры, погибают при температуре ниже 37 °С.
По капсульному полисахаридному антигену менингококки подразделяют на четыре основные серогруппы (группы А, В, С, D) и три дополнительные (X, Y, Z).
Клинические формы могут быть различными: менингококковый назофарингит, цереброспинальный менингит, менингококкцемия (менингококковый сепсис), менингококковый эндокардит и др.
После перенесенного заболевания формируется стойкий видоспецифический антимикробный иммунитет. У детей младшего возраста имеется пассивный иммунитет, обусловленный полученными от матери IgG.
1) бактериологическое исследование; материал для исследования определяется клинической формой заболевания; среда —
сывороточный агар;
2) иммуноиндикация: иммунофлюоресценция, ИФА, реакции
преципитации, латексагглютинации;
3) серодиагностика: РПГА с парными сыворотками (для диагностики генерализованных форм инфекции). Лечение: этиотропная терапия: сульфаниламиды, пенициллины, хлорамфеникол.
химическая менингококковая вакцина, содержащая поли
сахаридные антигены серогрупп А и С (активный антимикробный иммунитет);
человеческий иммуноглобулин (пассивный антимикробный иммунитет).
Менингококковую инфекцию вызывают менингококки — Neisseria meningitidis (бактерии 3й группы патогенности). Материалом для исследования служит отделяемое носоглотки, спинномозговая жидкость, кровь, соскоб из элементов геморрагической сыпи на коже, секционный материал.
Менингококки очень чувствительны к колебаниям температуры, поэтому материал сразу же сеют на питательные среды или немедленно, не допуская охлаждения, отправляют в лабораторию, где до посева сохраняют в термостате.
Отделяемое слизистой оболочки носовой части глотки снимают специальным клювовидным (изогнутым под углом) тампоном. Наиболее результативным является немедленный посев носоглоточной слизи на плотные питательные среды с тщательным разобщением бактериальных клеток. Если время доставки в лабораторию превышает 3 ч., то тампон помещают в пробирку с 3 мл среды обогащения (содержит 0,1 % агарагара, 20% сыворотки и 20 ЕД/мл ристомицина) и ставят в термостат при 37 °С (после подращивания материал высевают на сывороточный агар).
Микроскопия. Микроскопическое исследование спинномозговой жидкости и крови дает возможность определить наличие возбудителя. Если спинномозговая жидкость имеет вид гноя, то мазки готовят без ее предварительной обработки; при незначительной мутности спинномозговую жидкость центрифугируют и из осадка делают мазки. Окрашивают их по Граму, водным раствором основного фуксина и/или метиленовым синим. При окраске по Граму форменные элементы спинномозговой жидкости могут изменяться, что осложняет обнаружение возбудителя. Менингококки имеют вид диплококков бобовидной формы, соприкасающихся вогнутыми краями и расположенных внутри цитоплазмы лейкоцитов. Часто обнаруживается нежная капсула. При менингококцемии менингококки иногда можно обнаружить в мазках крови. Для этого готовят препарат толстой капли и без фиксации окрашивают его 2 — 3 мин водным раствором метиленовой сини, лишнюю окраску смывают водопроводной водой и высушивают пре, парат на воздухе. На голубом фоне препарата видны окрашенные в темносиний цвет лейкоциты, а между ними множество мелких, темносиних кокков, расположенных в виде кучек, парно или по одному.
Экспресс-диагностика основана на обнаружении в спинномозговой жидкости или крови больного специфического антигена, Осуществляется с помощью латексагглютинации, ИФА, встречного иммуноэлектрофореза с групповыми преципитирующими сыворотками. Эти методы приобретают особое значение при неэффективности микроскопической диагностики и посевов.
Бактериологическое исследование. Менингококк растет на питательных средах с нативным белком (бульон или агар сывороткой, асцитической жидкостью или кровью). Для исследования материала, обильно контаминированного нормофлорой мазки из носоглотки), применяют посев на плотные селективыс среды с антибиотиками (ристомицином, ванкомицином и нистатином). Спинномозговую жидкость лучше сеять после центрифугирования (3000 об/мин в течение 5 мин). Засевают 2 — 3 капли полученного осадка на поверхность подогретой питательной среды в чашке и инкубируют при 37 "С в атмосфере с повышенным содержанием СО2 (используют СО2инкубатор, газогенераторные пакеты или эксикатор с зажженной свечой). Остаток спинномозговой жидкости используют для РВИЭФ и других методов индикации возбудителя. Как правило, одновременно с прямым посевом материал засевают на среду обогащения (например, полужидкую сывороточную среду) с последующим пересевом на плотные среды для выделения чистой культуры.
На 3й день исследования для идентификации чистой культуры у нее выявляют оксидазную активность и делают посев на среды с углеводами. Менингококки обладают оксидазой, ферментируют глюкозу и мальтозу с образованием кислоты, лактозу, сахарозу и фруктозу не ферментируют, полисахарид из сахарозы не образуют, не растут в присутствии 0,2% желчи. Для выявления оксидазной активности на кусочек фильтровальной бумаги, смоченной каплей свежеприготовленного 1%го раствора солянокислого парадиэтилфенилендиамина, петлей наносят культуру менингококков. Культуры, обладающие оксидазной активностью, в течение 30 — 60 с вызывают вначале порозовение, а затем почернение бумаги с реактивом. Для определения способности образовывать полисахарид культуры нейссерий засевают на бескрахмальную среду с 1 % сахарозы и инкубируют при 37 °С в течение 24 — 48 ч, после чего на рост наносят каплю йодного раствора Люголя. В случае образования полисахарида сразу развивается буро-лиловое окрашивание.
Для дифференциации менингококка и непатогенных нейссерий (Neisseria mucosa, Neisseria sicca и др.) используют свойство последних расти на простых питательных средах, а также способность образовывать колонии при комнатной температуре (22 °С).
Для обнаружения менингококка в крови во флаконы с 50 мл бульона, содержащего 0,1 % агарагара, засевают 5 —10 мл крови, асептически взятой из вены. Через сутки делают пересев культуры на сывороточный агар. Выделение и идентификация культур осуществляются таким же образом, как и при исследовании спинномозговой жидкости.
Серологическое исследование.Серодиагностику применяют в качестве вспомогательного метода (в основном для эпидемиологического анализа). Ставят РНГА с эритроцитами, нагруженными группоспецифическими полисахаридными АГ или ИФА с теми же антигенами.
Рис. Колонии менингококков.
Гонококки
Относятся к роду Neisseria, вид N. gonorrhoeas.
Это диплококки бобовидной формы, в мазках располагаются внутриклеточно в протоплазме лейкоцитов, имеют вид кофейных зерен.
Спор не образуют, неподвижны, образуют микрокапсулу, грамотрицательные. Являются облигатными аэробами.
Гонококки исключительно требовательны к питательным средам, растут только на средах, содержащих человеческие белки (сывороточном агаре, асцитагаре и др.). На сывороточном агаре образуют мелкие блестящие колонии в виде капель.
1)Биохимически малоактивны, расщепляют только глюкозу (до кислоты).
Гонококковая инфекция— антропонозная инфекция, источник заражения — больной человек, носительства не бывает. Путь передачи половой, возможно заражение новорожденного при прохождении через родовые пути больной матери.
Клинические формы гонококковой инфекции:
1) гонорея (урогенитальная, экстрагенитальная);
2) гонококковая септикопиемия;
3) специфический конъюнктивит новорожденных (возникает
только при прохождении через родовые пути больной гонореей матери).
По длительности течения гонореи и выраженности клинических признаков различают:
1) свежую гонорею (длительность течения не более 2 месяцев):
2) хроническую гонорею (вялотекущее заболевание продолжительностью более 2 месяцев или с неустановленным сроком).
По клиническому течению различают:
1) неосложненную гонорею (гнойное воспаление нижних отделов урогенитального тракта);
2) осложненную гонорею (процесс распространяется на верхние отделы мочеполовой системы).
Перенесенное заболевание не оставляет стойкого иммунитета. Диагностика:
1) при острой форме:
а) бактериоскопия мазка отделяемого уретры, шейки матки;
б) бактериологическое исследование;
2) при хронической форме:
б) бактериологическое исследование;
в) серодиагностика — РСК;
Особенность серодиагностики: диагноз ставится качественно по обнаружению в сыворотке обследуемого антител) по результатам однократной реакции (без парных сывороток). Это объясняется тем, что постинфекционный иммунитет при гонорее не формируется (нет постинфекционных антител).
Лечение: этиотропная терапия антибиотиками.
Специфическая профилактика не разработана.
Микроскопия.Готовят не менее двух мазков на предметном стекле. Мазки фиксируют в фиксирующей жидкости и окрашивают щелочным раствором метиленового синего и по Граму. При микроскопии гонококки имеют вид бобовидных грамотрицательных диплококков, расположенных, подобно менингококкам, внутри клеток (нейтрофильных гранулоцитов), а также внеклеточно. Окраска по Граму позволяет дифференцировать гонококки со стафилококками и другими бактериями.
При хронической гонорее в мазках обнаруживается большое количество сопутствующих микроорганизмов, а морфология возбудителя может меняться: наблюдаются диплококки с неодинаковыми по величине и форме клетками. При неадекватном лечении сульфаниламидами и антибиотиками происходят значительные изменения формы и величины гонококков: крупные шаровидные, величиной до размеров эритроцита, либо мелкие пылевидные — Lформы.
В связи с тем, что в исследуемом материале могут находиться и другие грамотрицательные бактерии, сходные с гонококками, применяют методы индикации. Так, мазки обрабатывают флюоресцирующими антителами против гонококков и при люминесцентной микроскопии наблюдают свечение клеток гонококков (прямая РИФ). Бактериоскопическое исследование, особенно при хронической, леченой гонорее, а также гонорее у женщин не всегда дает положительный результат, поэтому используют другие методы диагностики.
Бактериологическое исследование.Его проводят в тех случаях, когда гонококки в мазках не обнаруживают или находят нетипичные, измененные формы. Культуральное исследование необходимо для контроля излеченности, при диагностике заболевания у детей, для судебномедицинской экспертизы. Ввиду особой чувствительности гонококка к охлаждению материал для исследования по возможности не транспортируют. Кроме того, гонококк очень чувствителен ко многим антимикробным веществам, поэтому за 1 —2 дня до посева необходимо исключить применение больным антисептиков и прекратить антибактериальную терапию.
При хронической гонорее перед исследованием для повышения вероятности выявления возбудителя проводят провокацию биологическим методом: однократное внутримышечное введение гоновакцины взрослым в количестве 500 млн микробных тел, детям старше 3х лет — 100 — 200 млн микробных тел, детям старше 3х лет — 100 — 200 млн микробных тел. Детям до 3х лет гоновакцину не вводят. Провокация может быть также термической, механической и алиментарной.
Посев производят непосредственно после взятия материала.
Для культивирования гонококка используют МПА (рН 7,4) с добавлением асцитической жидкости — асцитагар.
Это диплококки бобовидной формы, в мазках располагаются внутриклеточно в протоплазме лейкоцитов, имеют вид кофейных зерен.
Спор не образуют, неподвижны, образуют микрокапсулу, грамотрицательные. Являются облигатными аэробами.
Гонококки исключительно требовательны к питательным средам, растут только на средах, содержащих человеческие белки (сывороточном агаре, асцит-агаре и др.). На сывороточном агаре образуют мелкие блестящие колонии в виде капель.
Биохимически малоактивны, расщепляют только глюкозу (до кислоты).
1) белковые антигены наружной мембраны;
2) липополисахаридные антигены клеточной стенки.
Общепринятого деления на серогруппы и серовары нет.
1) адгезины – фимбрии (пили);
2) эндотоксин; подавляет фагоцитоз, обеспечивая внутриклеточное расположение гонококков;
3) ферменты агрессии – гиалуронидаза, нейраминидаза.
Патогенны только для человека. Вызывают лишь специфические нозологические формы гнойно-воспалительных заболеваний.
Гонококковая инфекция – антропонозная инфекция, источник заражения – больной человек, носительства не бывает. Путь передачи половой, возможно заражение новорожденного при прохождении через родовые пути больной матери.
Клинические формы гонококковой инфекции:
1) гонорея (урогенитальная, экстрагенитальная);
2) гонококковая септикопиемия;
3) специфический конъюнктивит новорожденных (возникает только при прохождении через родовые пути больной гонореей матери).
По длительности течения гонореи и выраженности клинических признаков различают:
1) свежую гонорею (длительность течения не более 2 месяцев):
2) хроническую гонорею (вялотекущее заболевание продолжительностью более 2 месяцев или с неустановленным сроком).
По клиническому течению различают:
1) неосложненную гонорею (гнойное воспаление нижних отделов урогенитального тракта);
2) осложненную гонорею (процесс распространяется на верхние отделы мочеполовой системы).
Перенесенное заболевание не оставляет стойкого иммунитета.
1) при острой форме:
а) бактериоскопия мазка отделяемого уретры, шейки матки;
б) бактериологическое исследование;
2) при хронической форме:
б) бактериологическое исследование;
в) серодиагностика – РСК;
Особенность серодиагностики: диагноз ставится качественно (по обнаружению в сыворотке обследуемого антител) по результатам однократной реакции (без парных сывороток). Это объясняется тем, что постинфекционный иммунитет при гонорее не формируется (нет постинфекционных антител).
Лечение: этиотропная терапия антибиотиками.
Специфическая профилактика не разработана.
Данный текст является ознакомительным фрагментом.
Продолжение на ЛитРес
35. Менингококки. Гонококки. Их характеристики
35. Менингококки. Гонококки. Их характеристики Менингококкиотносятся к роду Neisseria, род N. meningitidis.Это диплококки бобовидной формы, в мазках имеют вид кофейных зерен. Спор не образуют, жгутиков не имеют, в организме образуют капсулу. Грамотрицательные. Строгие
В качестве основы используют 1,2-1,5% агар /рН=7,4/, приготовленный на бульоне из рыбного гидролизата, бульоне из перевара Хоттингера/аминный азот в бульоне 150-180 мг/мл/ или на сухом питательном агаре специального назначения. К 80 мл расплавленного и остуженного до температуры 50°С агара добавляют 20 мл инактивированной при температуре 56°С в течение 30 минут сыворотки, консервированной хлороформом, или без консерванта (при инактивировании сыворотки консервант улетучивается). После перемешивания среду разливают в чашки. Среда годна к употреблению только в течение 48 часов при хранении ее в холодильнике. Перед посевом чашки, хранившиеся в холодильнике, должны быть подсушены и подогреты до температуры 37°С.
10.2.Сывороточный агар с ристомицином.
К 80 мл расплавленного и остуженного агара (такого же, как и для приготовления сывороточного агара) добавляют 20 мл сыворотки и 0,1 мл. раствора ристомицина, содержащего 20.000 ед/мл (конечная концентрация антибиотиков 20 ед/мл питательной среды).
В связи с испытываемыми трудностями в снабжении ристомицином рекомендуется простой метод, позволяющий экономно расходовать антибиотик. Препарат разводят стерильным физиологическим раствором до рабочей концентрации и затем разливают по стерильным пенициллиновым флаконам или центрифужным пробиркам под ватными или резиновыми пробками и замораживают в морозильной камере. Количество рабочего раствора во флаконах или пробирках зависит от потребности лаборатории.
Рабочий раствор сохраняют в морозильной камере до момента использования. В случае необходимости раствор оттаивают и добавляют в среду. Например, во флакон, содержащий 100 мг (100 000 ед.) ристомицина, вносят 5 мл стерильного физиологического раствора. Полученное разведение препарата является рабочим. Его удобно разлить по 0,5 мл и заморозить В таком состоянии препарат может храниться несколько месяцев.
10.3.Сывороточный агар с линкомицином.
К 80 мл расплавленного и остуженного агара добавляют 20 мл сыворотки и 0,5 мл раствора линкомицина в концентрации 1000 мкг/мл.
Конечная концентрация антибиотика в среде - 5 мкг/мл питательной среды. Раствор линкомицина можно хранить при температуре +4°С в течение 6 месяцев.
10.4. Желчно-сывороточный агар.
5,0 мл сухой бычьей желчи*(11) растворяют в 100,0 мл дистиллированной воды, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, доводят рН до 7,2-7,4, стерилизуют текучим паром 3 дня подряд. К 80 мл расплавленного и охлажденного до 50°С питательного агара добавляют 4,0 мл стерильного раствора желчи, перемешивают, затем добавляют 20,0 мл сыворотки животных, снова хорошо перемешивают и разливают по чашкам Петри. Конечная концентрация желчи в среде - 0,2%. Посев испытуемых культур нейссерий производят штрихами на сектора чашки.
10.5. Плотные среды с углеводами.
Готовят на той же питательной основе, что и предыдущие. К 75 мл агаровой основы добавляют 0,9 г одного из углеводов (глюкоза, мальтоза, сахароза, лактоза, фруктоза) и 3,9 мл раствора индикатора фенолового красного. Агар стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 минут или однократно в течение 30 минут при 0,5 атм.
Таким образом, каждую культуру засевают на 1/4- 1/8 пяти чашек с различными углеводами. Учет результатов производят через 24 часа инкубации в термостате. При разложении какого-либо углевода с образованием кислоты красный цвет среды в секторе посева меняется на ярко-желтый.
Приготовление раствора индикатора фенолового красного (фенол-рот).
Смешивают 0,4 г порошка фенол-рот с 16 мл 0,1 N NaOH и выдерживают в термостате до полного растворения при частом встряхивании. Затем раствор доводят до объема 200 мл дистиллированной водой, разливают во флаконы и стерилизуют при 1 атм. в течение 20 минут.
10.6.Транспортные среды для выделения менингококков из носоглоточной
Слизи.
10.6.1.Бульон для приготовления смоченных тампонов.
Бульон готовят на любой питательной основе с добавлением 20% сыворотки животных и ристомицина из расчета 20 ед/мл Среды. Используют ватные тампоны на алюминиевых стержнях, вмонтированные в пробирку (п.6.6.). Перед выездом за материалом тампоны пропитывают бульоном из расчета 10-12 тампонов в 5 мл бульона, соблюдая стерильность. Тампоны к месту взятия материала и обратно в лабораторию доставляют, предохраняя их от холода. Длительность транспортировки материала с момента взятия до посева в питательную среду не должна превышать 3-х часов.
10.6.2.Приготовление жидких транспортных сред с линкомицином.
Используют любой питательный бульон или 2% пептонную воду, рН=7,2-7,6. К 100 мл стерильного бульона добавляют 0,5 мл линкомицина в концентрации 1000 мкг/мл. Конечная концентрация линкомицина - 5 мкг/мл. Среда сохраняется в холодильнике не более 2-х суток. Непосредственно перед взятием носоглоточной слизи (можно в помещении, где находятся обследуемые лица) среда без огня разливается по 1,0 мл в стерильные пробирки. Перед погружением тампона пробку извлекают, тампон вставляют в пробирку так, чтобы материал был погружен в среду; пробирку со вставленным тампоном снова закрывают. Пробирки транспортируют в вертикальном положении при температуре не ниже 22°С. По доставке в лабораторию тампоны отжимают о стенки пробирки и производят посев на сывороточный агар без антибиотиков в чашки Петри. На одной чашке можно разместить 2 посева. Транспортные среды с линкомицином применяют при необходимости транспортировки материала в течение более 3-х часов.
10.6.3. Приготовление полужидкой среды обогащения для носоглоточной слизи.
К 80 мл полужидкого питательного агара добавляют 20 мл любой сыворотки и 0,1 мл раствора ристомицина, содержащего 20 000 ед/мл (конечная концентрация 20 ед/мл питательной среды). Среду разливают в пробирки по 3 мл, выдерживают 2 суток в термостате для контроля и затем хранят в холодильнике.
10.7."Двухфазная " питательная среда.
Питательная среда содержит не только х, гамма факторы, необходимые для роста Н.influenzae, но витамины, что способствует росту других микроорганизмов, в том числе менингококков и пневмококков.
В этой связи среда может быть использована только для посева "стерильного" материала, взятого из закрытых полостей (СМЖ, кровь, эксудат и т.п.) со всеми предосторожностями от возможного загрязнения.
В основу двухфазной среды взята питательная среда "шоколадный агар" на триптическом переваре (Хоттингера, триптикоза - соевый и др.). При добавлении крови животного среда прогревается в течение 10 мин. при 65-80°С двукратно, употребление крови человека требует прогревания среды в течение 15 мин. при температуре 100°С (что разрушает анти-Y фактор в этой крови). Среда разливается в пробирки по 5,0 мл или флаконы по 50,0 мл и скашивается.
После затвердения "косяков" в пробирки добавляют по 3,0 - 5,0 мл, а во флаконы по 50,0 мл бульона на переваре "Хоттингера", к которому добавляется гретая кровь и экстракт пекарских дрожжей*(12).
Среда для употребления хранится в холодильнике, перед внесением в нее патологического материала согревается в термостате. Засеянные у постели больного пробирки тотчас доставляются в лабораторию. При невозможности осуществить доставку немедленно они помещаются в термостат с последующей передачей в лабораторию. В лаборатории из "двухфазной" среды делают посев на чашки с агаром. Уже через 3-4 часа жидкая часть среды мутнеет от роста в ней культуры, из которой можно сделать мазок для микроскопирования.
11. Методы серологической идентификации менингококков
или их антигенов
11.1 Реакция агглютинации на стекле (см. Инструкцию по применению сывороток).
11.2 Реакция агглютинации в полистироловых пластинах.
При постановке реакции агглютинации (РА) используют полистироловые пластины или большие стекла. Для каждой испытуемой культуры менингококков используют один ряд лунок пластины. Число горизонтальных лунок соответствует числу агглютинирующих группоспецифических сывороток. Жидкую сыворотку каждой серогруппы в лунке разводят вдвое (1 капля сыворотки плюс 1 капля взвеси культуры). В отдельной лунке каждого ряда готовят взвесь испытуемых культур. Для этого запаянной изогнутой пастеровской пипеткой бактериальную массу снимают с чашки Петри и тщательно эмульгируют в физиологическом растворе. Для получения оптимальной рабочей густоты к взвеси добавляют по 1,0 мл физиологического раствора. Взвесь разносят по 1 капле в горизонтальные лунки. Пластины встряхивают в течение 1 мин. руками или шуттеле-аппарате.
Учитывают реакцию в течение первых 3-х мин. Контролем служит лунка, в которой готовят исходную взвесь бактерий в физиологическом растворе.
11.3 Реакция преципитации для определения серогруппы менингококков и
Культуральные свойства гонореи. Культуры гонококков. Свойства гонококков. Биохимические свойства гонококков.
Гонококки неустойчивы во внешней среде, поэтому посев следует проводить сразу после забора материала от больного. Гонококки хорошо растут на свежеприготовленных влажных питательных средах с добавлением нативных белков крови, сыворотки или асцитической жидкости. Оптимальный рН 7,2-7,4, оптимальная температура 37 °С.
На плотных средах гонококки, содержащие в клеточной стенке белок II, образуют слегка мутные бесцветные колонии с ровными краями. Гонококки, лишённые белка II, образуют мелкие круглые прозрачные колонии, напоминающие капли росы. Гонококки типов TI и Т2 чаще образуют мелкие колонии, а бактерии типа Р- (ТЗ-Т5) — более крупные колонии.
В жидких питательных средах гонококки растут диффузно и образуют поверхностную плёнку, через несколько дней оседающую на дно. При пересевах на селективные среды вирулентность бактерий типов Т1 и Т2 может возрастать. Длительное культивирование на неселективных средах может приводить к снижению вирулентности штаммов, потере пилей и увеличению размеров колоний (то есть к переходу в бактерии типа Р-).
Свойства гонококков. Биохимические свойства гонококков.
Гонококки ферментируют только глюкозу с образованием кислоты без газа. Изменённые формы, в том числе L-формы, могут вообще не ферментировать углеводы. Протеолитичес-кую активность не проявляют, аммиак, сероводород и индол не образуют, не приводят к гемолизу на средах, содержащих кровь.
Штаммы гонококкоа, вызывающие диссеминированные инфекции, нуждаются в аргинине, гипоксантине и урациле (так называемые AHU+ штаммы). Бактерии отличает устойчивость к бактерицидному действию сывороточных IgM и IgG, а также комплемента.
Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.
Читайте также: