Посев мочи по голду

Обновлено: 18.09.2024

1. Тема: Культуральные свойства бактерий. Выделение чистой культуры бактерий.

2. Цели занятия : Изучить характер роста бактерий в жидких и на плотных питательных средах. Освоить технику пересева для выделения чистой культуры бактерий.

3. Задачи занятия :

3.1. Изучить характер роста бактерий в жидких и на плотных питательных средах.

3.2. Ознакомиться с основными характеристиками колоний бактерий.

3.3. Освоить технику пересева для выделения чистой культуры бактерий.

клинических наук в

бактерий на плотных

рост бактерий на

культур в жидкие и

ухода за больными

зарубежный опыт по

4. Продолжительность занятия в академических часах : 3 часа.

5. Контрольные вопросы по теме :

5.1. Характер роста бактерий на плотных питательных средах.

5.2. Характер роста бактерий в жидких питательных средах.

5.3. Методы выделения чистых культур бактерий.

6. Задания и методические указания к их выполнению .

На занятии студенту необходимо выполнить:

6.1. Ответить на вопросы преподавателя.

6.2. Принять участие в обсуждении изучаемых вопросов.

6.3. Выполнить самостоятельную работу.

Рост микробов на плотной питательной среде характеризуется образованием колоний. Колонии – видимые невооруженным глазом скопления бактериальных особей на поверхности или в толще плотной питательной среды. Для характеристики колоний используют следующие признаки:

1. По размеру выделяют следующие колонии:

- точечные - диаметр менее 1 мм;

- мелкие – диаметр 1-2 мм;

- средние – диаметр 2-4 мм;

- крупные – диаметр 4-6 мм и более.

2. Форма колонии:

- ризоидная (корневидная, напоминающая переплетающиеся корни деревьев). 3. Контуры края колонии (определяют при рассмотрении колонии под лупой

или микроскопом с малым увеличением):

- ровные края в виде четко выраженной линии;

- неровные края ( фестончатый, волнистый, эрозированный или зазубренный, бахромчатый).

4. Рельеф колонии характеризуется приподнятостью ее над поверхностью питательной среды и формой на вертикальном разрезе. Определяется невооруженным глазом или при помощи лупы при рассматривании сверху и сбоку:

- каплеобразные и куполообразные колонии правильной круглой формы; - плоско-выпуклые колонии; - конусообразные колонии;

- колонии с приподнятой серединой; - колонии с вдавленным центром; - плоские колонии.

5. Поверхность колонии изучают при помощи лупы или под микроскопом при малом увеличении:

- матовая или блестящая с глянцем; - сухая или влажная; - гладкая или шероховатая.

Гладкие колонии обозначают буквой S (англ. smooth – гладкий), шероховатые

- буквой R (англ. rough – шероховатый).

6. Цвет колонии . Определяется пигментом, который продуцирует культура микробов. Преобладающее большинство патогенных бактерий пигмента не образует (колонии бесцветны или молочно-мутного цвета). Пигментообразующие виды дают колонии кремовые, желтые, золотисто-оранжевые, синие, красные, сиреневые, черные и др.

7. Структура колоний . Определяется в проходящем свете при слабом увеличении микроскопа, суженной диафрагме или при несколько опущенном конденсоре:

- гиалиновые колонии; - зернистые колонии;

- нитевидные или волокнистые колонии.

8. Консистенция колоний . Исследуют прикосновением или взятием из нее части материала бактериологической петлей:

- пастообразные, вязкие или слизистые; - волокнистые или кожистые; - хрупкие сухие.

Характер роста бактерий в жидких питательных средах:

1. Рост бактерий с равномерным помутнением среды.

2. Придонный рост бактерий (образование осадка на дне).

3. Пристеночный рост бактерий (образование рыхлых хлопьев,

прикрепленных к внутренней поверхности стенок сосуда).

4. Поверхностный рост бактерий (образование пленки на поверхности жидкой питательной среды).

Рост в полужидкой питательной среде характеризуется помутнением всей толщи среды или образованием воронки цилиндрической или конической формы.

Выделение чистой культуры бактерий.

Чистая культура – культура микроорганизмов одного вида (потомство одной клетки). Методы выделения чистой культуры:

1. Метод Дригальского – последовательный пересев культуры шпателем в 3 чашки Петри с агаром.

2. Метод параллельных штрихов – посев культуры штрихами по поверхности агара.

3. Метод Голда – метод секторных посевов. При этом чашку с агаром делят на 3 сектора. На первый сектор засевают культуру петлей частыми штрихами, после чего петлю стерилизуют (фламбируют). Затем стерильной петлей уже более редкими параллельными штрихами переносят микроорганизмы из первого сектора во второй, после чего вновь фламбируют петлю. Аналогично стерильной петлей переносят микроорганизмы из второго сектора в третий.

4. Метод Коха (метод рассева в глубине среды) . Культуру последовательно разводят в расплавленном агаре в пробирках. Затем содержимое пробирок переносят

в чашки Петри и инкубируют в термостате. Изолированные колонии вырастают в толще агара. В настоящее время этот метод используется редко.

После обсуждения теоретических вопросов преподаватель объясняет правила выполнения самостоятельной работы

1. Описание бактериальных колоний, выросших на демонстрационных чашках Петри.

2. Описание характера роста бактерий в жидких питательных средах.

3. Пересев бактерий из изолированных колоний штрихом на плотные питательные среды с целью выделения чистой культуры.

7. Оценивание знаний, умений, навыков по теме занятия :

Ответы на вопросы и активность на занятии оцениваются по 5-балльной системе.

8. Литература для подготовки :

1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник для студентов медицинских вузов. Под ред. А.А. Воробьева. Учебники и учеб. пособия для высшей школы. Издательство: Медицинское информационное агентство, 2012. – 702 с.

1. Коротяев А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: Учебник для студентов мед. вузов / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. - 5-е изд., испр. и

доп. – СПб.: СпецЛит, 2012. – 759 с.: ил.

2. Медицинская микробиология: учебник. 4-е изд. Поздеев О.К. / Под ред. В.И. Покровского. – 2010. – 768 с.

3. Руководство по медицинской микробиологии. Общая и санитарная микробиология. Книга 1 / Колл. авторов // Под редакцией Лабинской А.С., Волиной Е.Г. – М.: Издательство БИНОМ, 2008. – 1080 с.: ил.

Методические указания переработаны и дополнены профессором Литусовым Н.В., аспирантом кафедры Зорниковым Д.Л.

Обсуждены на заседании кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии.

Тут вы можете оставить комментарий к выбранному абзацу или сообщить об ошибке.

Автор: Д.Уразбаева - Доктор медицинских наук, заместитель исполнительного директора Hak medical по вопросам лаборатории г.Алматы, Виткаускиене А.

В настоящее время остро встает вопрос о качестве медицинской помощи, в том числе диагностического лабораторного анализа. Для достижения достоверного качественного результата нужна стандартизация всех процессов исследования. Имеющаяся в Республике Казахстан нормативная база, касающаяся бактериологической диагностики, далека от совершенства, не учитывает современного развития технологий и не устраивает клинических микробиологов. Поэтому с позиций доказательной медицины актуальным является разработка стандартных процедур подготовки и проведения исследования.

Инфекции мочевого тракта занимают по распространенности одно из ведущих мест, встречаются у людей различного возраста, нередко приводят к осложнениям и хронизации. Эту патологию могут вызывать различные микроорганизмы. В норме моча является стерильной жидкостью, однако в дистальную часть уретры могут попадать бактерии с кожи, из половых органов и кишечника, что осложняет постановку правильного диагноза.
Инфекции мочевыводящих путей могут вызывать стафилококки, энтерококки, энтеробактерии, псевдомонады, микобактерии, микоплазмы, а иногда Candida albicans (1, 2, 3, 4).
Микробиологическое исследование является достаточно сложным, предъявляя строгие требования к сбору, хранению, транспортировке, выполнению исследования.

Пробы мочи могут быть получены с помощью цистоскопии, надлобковой пункции мочевого пузыря или катетеризации. Самым точным является второй способ, который подходит для младенцев и больных, которым нельзя объяснить, каким образом собирать мочу. Катетеризация мочевого пузыря может привести к заносу инфекции, поэтому необходимо избегать этого метода забора материала.

Чаще всего исследованию подлежит средняя порция утренней мочи. Существуют специальные рекомендации забора для избегания загрязнения пробы мочи микрофлорой кожи, уретры или влагалища. Биологический материал собирается в одноразовые контейнеры для мочи, срочно отправляется в лабораторию (в течение 1 часа после сбора).
Основными этапами исследования является:

1. Микроскопия

Фазово-контрастная или световая микроскопия окрашенного по Граму мазка. Определяется количество микроорганизмов, лейкоцитов и клеток плоского эпителия, оцениваются тинкториальные свойства микроорганизмов.
Ориентировочное соответствие первичной микроскопии и бактериурии (при использовании увеличения в 1000 раз):
1-3 микроорганизма в поле зрения – 105 микр/мл;
10-30 микроорганизмов в поле зрения – 106 микр/мл;
> 30 микроорганизмов в поле зрения - >106 микр/мл. Подчеркнем, что в мазке мочи здорового человека допускается наличие лишь нескольких бактериальных клеток или лейкоцитов. В мазках мочи, взятой у женщин, большое число слущенного эпителия независимо от того, обнаружены или не обнаружены бактерии, свидетельствует о контаминации мочи влагалищной микрофлорой, в связи с чем необходимо повторение анализа (1).

2. Бактериологическое исследование

Для рассева используются стандартные стерильные петли из полистирола 1 мкл и 10 мкл. Среды выбираются, исходя из результатов микроскопии.

Техника рассева мочи:
1. Петлю 1 мкл погрузить в контейнер с мочой, перемешать и одну каплю поместить на чашку Петри с 5% кровяным агаром, прочертив ею весь диаметр чашки.
2. Поперечными движениями рассеять мочу по всей чашке.
3. Повторно взять каплю мочи и тем же методом рассеять ее на половину чашки Петри с агаром Endo или MacConkey.
4. Вторую половину среды с агаром Endo или MacConkey рассеять петлей 10 мкл.
Инкубировать при температуре 35°С.

Если результаты посева не соответствуют результатом первичной микроскопии или моча взята методом инвазивных процедур, инкубация продлевается до 48 часов.

Один из самых точных и информативных лабораторных исследований качества мочи (урины) — бактериологический анализ мочи (бакпосев, посев на микрофлору). Этот метод диагностики выявляет патогенные микроорганизмы и определяет их чувствительность к антибактикам. Это позволяет сэкономить время и сразу назначить эффективное лечение.

Прием уролога, гинеколога — 1000 руб. Комплексное УЗИ малого таза — 1000 руб. Прием по результатам УЗИ или анализов — 500 руб (по желанию)

Недостатком анализа можно назвать особые требования к сбору материала и длительность теста. Однако лишь при посеве мочи врач получает точную уникальную информацию, которую часто не способны показать другие лабораторные исследования.

Показания для назначения бакпосева мочи

Анализ мочи на посев может быть назначен терапевтом, гинекологом , урологом или педиатром в следующих случаях:

при инфекциях мочевыделительной системы (рецидивирующий цистит , пиелонефрит , урологические патологии, мочекаменная болезнь );
при болезнях органов ЖКТ (энтерококк и дизентерия);
при сахарном диабете , беременности и бесплодии , иммунодефиците, туберкулёзе, ВИЧ;
для контроля эффективности проведённого лечения инфекции ;
для уточнения диагноза при неоднозначной симптоматике;
для выявления устойчивости микроорганизмов к антибактериальной терапии.

Также бакпосев мочи может назначаться при наличии следующих симптомов:

нарушение частоты мочеиспусканий (может свидетельствовать о поражении почек, простатите );
тошнота, рвота, общая слабость, повышение температуры (симптомы заболевания почек);
боль в пояснице (сигнал возможного развития бактерий в почечных канальцах);
изменение цвета мочи.

Какие патологии выявляет бактериологический анализ мочи

Бакпосев на патогенную флору поможет диагностировать такие заболевания, как:

хронический уретрит ;
рецидивирующий цистит;
пиелонефрит;
паранефрит.

Бактериологический анализ мочи выявляет следующие инфекции в зависимости от возбудителя:

Стафилококки и стрептококки . Выявляет все виды патогенных микроорганизмов, опасных при беременности для ребёнка; . Патогенные микроорганизмы в урине подтверждают сомнительный диагноз; . Назначается пациенту, если его партнёр — носитель вируса;
Бациллу Коха . Степень бактериурии определяет наличие туберкулёза и насколько поражены почки и мочевыводящие пути при таком заболевании;
Протеи . Протейная инфекция вызывает воспаление почек и мочевыводящих путей, может привести к острому пиелонефриту;
Энтерококки . Эти кишечные бактерии могут быть губительными для мочевыводящей системы;
Синегнойную палочку. Эта бактерия является причиной циститов, уретритов и пиелонефритов;
Коклюш . Анализ выявит болезнь даже на ранней стадии и при начальных
симптомах;
Клебсиеллы . Опасная бактерия, устойчивая к большинству антибиотиков. Вызывает воспалительные заболевания мочевыводящих путей и может привести к различным тяжёлым последствиям;
Дизентерийные соединения . Способен выявить сальмонеллез и дизентерию у пациентов любого возраста.

Методика исследования мочи на инфекции

Для идентификации инфекционного возбудителя анализ урины на посев проводится по следующему алгоритму:

Первичное исследование осадка мочевой жидкости под микроскопом (проводится не всегда).
Первичный посев мочи на стерильность для выявления типа возбудителя.
Накопление собранной в посеве культуры.
Изучение особенностей выявленных бактерий.
Окончательная идентификация возбудителя.

Для теста — посев мочи — необходим подбор определённой среды: для стафилококков – кровяной агар, стрептококков – сахарный раствор и т.д. Однако могут проводить посев и в нескольких средах (максимум 3-4).

Бактериологический анализ мочи в целом занимает 7-10 дней. Полученный результат будет содержать описание величины, формы, прозрачности, оттенка, структуры поверхности, роста колонии в высоту.

Методика определения чувствительности возбудителей к антибиотикам

Для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам (антибиотикограмма) анализ урины на посев проводится по следующему алгоритму:

Деление чаши Петри на несколько секторов и помещение в каждый из них полоски с антибиотиком.
Маркировка цветом каждого участка и засев выделенной культурой.
Помещение чаши в термостат с температурой 36,6.
Ведение ежедневного контроля. Отсутствие роста и размножения бактерий означает, что антибиотик их подавляет, а значит подобран верно.

В противном случае возбудитель устойчив к действию данного антибиотика, и его нужно заменить.

Антибиотикограмма проводится только при обнаружении бактерий более, чем 104 КОЕ/мл. Длительность такого анализа составляет 4-5 дней. Современные экспресс-методики позволяют получить результат уже через 2 дня. В экстренных случаях, когда результат необходим для лечения тяжелобольного пациента, предварительные данные могут быть предоставлены уже спустя 4 часа.

Подготовка к процедуре и сбор мочи на посев

Для получения реальной картины состояния внутренней микрофлоры крайне важно соблюсти все требования относительно подготовки и сбора мочи:

Анализ посев мочи при беременности

В период беременности женщина ещё больше, чем обычно, уязвима для различных болезней. К ним относятся и инфекции различного генеза, включая передающиеся половым путём. К тому же, исследованиями доказано, что 45% всех смертей плода ( замирание беременности , выкидыш ) случилось из-за внутриутробного инфицирования.

Бактериологический анализ мочи во время беременности обязателен, даже при отсутствии признаков инфекции. Инфекция длительно и бессимптомно могла протекать в организме женщины и активизироваться при наступлении беременности (до 6% беременных имеют скрытую бактериурию).

Важность проведения анализа мочи на посев во время беременности подтверждается следующим:

выявление и идентификация возбудителей инфекции;
проведение возможного лечения с учётом срока беременности;
предупреждение заражения плода и нанесения ему непоправимых органных изменений, несовместимых с жизнью.

Проводить бакпосев мочи нужно дважды за беременность – в 1 триместре и практически перед самыми родами (на 36 неделе). При наличии соответствующих показаний это значение может увеличиться. Врач может назначить беременной дополнительные бакпосевы мочи, если она страдает заболеваниями мочевого пузыря и почек, или при общем анализе мочи были обнаружены лейкоциты и белок.

Правила подготовки и сбора материала для беременной общие. На поздних сроках беременности плод давит на мочевой пузырь, поэтому женщине порой трудно дотерпеть до утра. Рекомендуется сходить в туалет по будильнику в 1-2 часа ночи, а затем уже утром собрать мочу для анализа.

Расшифровка результатов бакпосева мочи: норма и патология

Результат анализов выводится в КОЕ на 1 мл мочи. КОЕ (колониеобразующие единицы) – это абсолютное значение, показывающее количество клеток бактерий в 1 мл урины.

Лаборатория выдаст распечатку результатов, в которой будут указаны все виды микроорганизмов, их количество, измеренное в КОЕ/мл, и антибиотикограмма – группы препаратов, к которым чувствителен каждый вид бактерий.

Результат бакпосева не всегда однозначно положительный или отрицательный. Он имеет референсные значения, которые указывают на степень воспаления.

Менее 1000 КОЕ/мл	Норма, лечение не требуется.
1000-100000 КОЕ/мл	Требуется повторное исследование. Возможно, результат искажён из-за нарушения правил подготовки или сбора мочи.
Более 100000 КОЕ/мл	Наличие инфекции, необходимо срочно начинать лечение.

На бланке антибиотикограммы проставляются значки:

Обозначение	Уровень чувствительности к антибиотикотерапии
S	высокий
I	умеренный
R	полная резистентность (устойчивость) к антибиотикам

Где сдать анализ мочи на инфекции и сделать расшифровку бакпосева в СПБ?

Такое обследование в Санкт-Петербурге проводится в специализированной уролого — гинекологической клинике Диана. Здесь же можно пройти все виды экспертного УЗИ (стоимость 1000 руб), сдать все анализы и получить консультацию гинеколога, уролога, эндокринолога , онколога и дерматолога . Стоимость консультации любого специалиста — 1000 руб.

Перед посевом на дне чашки Петри разделяют среду на 4 сектора. Материал забирают стерильной и остуженной петлей, производят посев на первый сектор штрихами. Затем стерилизуют петлю в пламени спиртовки, остужают, проводят 4 перпендикулярных штриха по поверхности первого сектора и производят посев на поверхность второго сектора. Далее петлю стерилизуют и забирают материал с поверхности второго сектора, засевают третий сектор. Таким же образом производят посев на четвертый сектор (рисунок 23, 24). Посевы инкубируют в термостате обычно при температуре 37 °С в течение 24 часов.

Рис. 22 Метод посева исследуемого материала петлей по секторам

Рис. 23 Техника посева по секторам

Рис. 24 Рост культуры при посеве

Для выделения чистой культуры микробов, с трудом культивируемых на питательных средах (например, пневмококков), используют биологический метод – заражение наиболее восприимчивых к данному виду возбудителя животных. После гибели или появления признаков заболевания животных забивают и производят посев крови и органов на питательные среды и микроскопическое исследование мазков–отпечатков из органов. Далее исследование проводят по методу Дригальского.

Чистую культуру аэробных бактерий можно также получить, если на исследуемый материал воздействовать каким-либо физическим или химическим фактором, оказывающим избирательное антибактериальное действие. Например, для выделения чистых культур спорообразующих бактерий, исследуемый материал прогревают при температуре 80 °С в течение 20 минут или кратковременно кипятят для уничтожения вегетативных форм. Споры при этом сохраняются и при посеве материала на питательную среду прорастают. Далее чистую культуру получают обычным путем.

Для выделения чистой культуры возбудителя чумы посевы инкубируют при температуре 25 °С. Данный температурный режим подавляет рост сопутствующей микрофлоры.

Для получения чистой культуры кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулеза) исследуемый материал (мокроту) обрабатывают 2% серной кислотой, уничтожающей сопутствующую флору, нейтрализуют щелочью, после чего производят посев на питательную среду.