Посев на бледную трепонему

Обновлено: 07.07.2024

Анализ на сифилис RPR это удобный и доступный тест, который отлично подходит для скрининга и для наблюдения за результативностью лечения болезни, за её течением.

Расшифровка анализа на сифилис RPR

Положительная реакция теста появляется обычно на 3-5 неделе после заражения или спустя неделю после появления первичного шанкра на теле.

Анализ бывает положительным также в течение года после излечения сифилиса и при некоторых других заболеваниях (антифосфолипидный синдром). При проведении анализа в динамике титр антител RPR уменьшается. При полном излечении сифилиса RPR-анализ в 98% случаев становится отрицательным.

Если анализ на сифилис RPR впервые оказался положительным, то следующим шагом для подтверждения инфекции будет анализ на суммарные антитела к Treponema pallidum.

Ложноположительный результат анализа можно встретить при беременности, туберкулёзе, онкологии, сахарном диабете, подагре, пневмонии и аутоиммунных заболеваниях, а также при наличии в организме других видов трепонем, наркомании, вирусном гепатите и др.

Отрицательный результат анализа не может исключить полностью поздний третичный и ранний первичный сифилис.

Суммарные антитела к Treponema pallidum

Тест на суммарные антитела к Treponema pallidum (IgG и IgM ) даёт возможность подтвердить заболевание уже при первых клинических проявлениях и является методом ранней диагностики.

Суммарные антитела к Treponema pallidum: расшифровка

Результат анализа отрицательный при отсутствии инфекции или при раннем первичном сифилисе.

Тест на суммарные антитела к Treponema pallidum может иметь сомнительный результат. Тогда проводится повторный анализ на суммарные антитела спустя пару недель.

Прямые методы диагностики служат для выявления бледной трепонемы (Т. pallidum) или генетического материала этого возбудителя в образцах, взятых из очагов поражения. Прямое выявление возбудителя сифилиса является абсолютным доказательством наличия заболевания. Найденный генетический материал (ДНК/РНК) может свидетельствовать как об активном, так и о ранее леченном сифилисе.

На ранней стадии болезни, возбудитель сифилиса активно размножается в очаге инфицирования, при этом антитела к антигенам бледной трепонемы (Treponema pallidum) начинают появляться только со второй недели после инфицирования. Бледная трепонема располагается в тканевых щелях, между волокнами соединительной ткани, вокруг лимфатических и кровеносных сосудов, в стенках и даже просветах лимфатических капилляров.

При медицинском обследовании, у пациентов с подозрением на сифилис, все высыпания на коже или слизистых оболочках следует считать сифилитическими. Исследованию на бледную трепонему подлежат все эрозивные и язвенные шанкры, мокнущие и эрозивные папулы, широкие кондиломы на коже и слизистых оболочках рта, половых органов и анальной области.

Материалом, который необходим для бактериологического исследования на бледную трепонему, является тканевая жидкость (серум). Если нет возможности исследовать высыпания (например, в случаях раннего сифилиса), то рекомендуется проводить пункцию увеличенного регионарного лимфатического узла с соблюдением всех правил асептики, то есть стерильными инструментами и соблюдая правила, направленные на предотвращение распространения микроорганизмов. Кроме того, образцы могут быть получены путем взятия спинномозговой жидкости (ликвора) или плодной жидкости.

Важным условием для обнаружения бледной трепонемы в пат. материалах является правильное взятие проб из сифилитических элементов. Затем содержимое полученных проб изучают в лаборатории.

Обнаружение бледной трепонемы методом темнопольной микроскопии (ТПМ).

В России в качестве рутинного метода прямой визуализации T. pallidum традиционно используется метод темнопольной микроскопии (ТПМ, dark field microscopy, DFM).

1. Конденсор темного поля

Исследование на бледную трепонему в темном поле зрения проводится с помощью стандартного микроскопа, снабженного конденсором темного поля.

Конденсор представляет собой двояковыпуклую линзу, прикрепляемую снизу предметного столика с таким расчетом, чтобы линза конденсора располагалась под отверстием предметного столика. Конденсор служит для собирания (конденсации) пучка световых лучей, что обеспечивает наибольшее освещение исследуемого предмета.

Неокрашенные живые бледные трепонемы не видны в световой микроскоп при обычном освещении препарата. Необходимые условия создаются путем замены обычного конденсора микроскопа особым конденсором, в котором центральная часть затемнена и проникновение лучей света происходит через узкую щель.

Вследствие получающегося при этом бокового освещения достигается отраженное свечение всех твердых частиц на темном поле (это называется "эффектом Тиндаля"), в том числе бледной трепонемы. Для получения темного поля необходим сильный источник света.

2. Бледная трепонема, характерные особенности при темнопольной микроскопии

Исследование в темном поле микроскопа позволяет изучать бледную трепонему (БТ) в живом виде, а также достоверно отличать её от других трепонем как по морфологическим признакам, так и по характерным особенностям движения.

Чтобы отличать бледную трепонему от морфологически сходных типов сапрофитных трепонем, бледные трепонемы при исследовании должны быть живыми. Темнопольное исследование взятого материала должно быть проведено немедленно, сразу после получения образца, поэтому оборудование должно быть подготовлено заранее.

В затемненном поле зрения бледная трепонема выглядит, как движущаяся тонкая спираль или тонкий нежный пунктир с серебристым оттенком, слабо преломляющие свет. Помимо этих бактерий, в препарате все поле зрения усеяно массой мельчайших светящихся точек, находящихся в хаотичном броуновском движении.

Бледные трепонемы движутся характерным образом: вращаются вокруг своей продольной оси, перемещаются в одном направлении, качаются наподобие маятника или совершают волнообразные, сократительные или сгибательные движения ("шагающая трепонема"). Бледная трепонема движется плавно, что является важной особенностью этого микроогранизма.

T. phagedenis, электронная микроскопия

В полости рта и на половых органах встречаются сапрофитные трепонемы: T . refringens и T. phagedenis (reiteri) в урогенитальном тракте и T. denticola в полости рта.

Непатогенные трепонемы морфологически сходны с T. pallidum. От них бледную трепонему отличает толщина, характер движения и форма завитков.

T.refringens колонизирует наружные половые органы. Эта бактерия движется быстро и неравномерно, отличается большей толщиной, отсутствием сгибательных движений, и более пологими и широкими завитками. T.denticola является представителем нормальной микрофлоры полости рта, ее завитки короче и направлены под более острым углом. В нормальной флоре наружных половых органов человека встречается также T. phagedenis.

Наличие непатогенных трепонем затрудняет исследования материала, взятого из поражений в полости рта или прямой кишке. При дифференциации трепонем может ошибиться даже опытный исследователь, поэтому присутствие этих микроорганизмов делает малодостоверным проведение исследования с данным материалом. Если необходимо провести тестирование материала, полученного из одного из указанных выше мест, то предпочтительнее выполнить DFA или NAAT (лучше отдать предпочтение методу ПИФ или молекулярно-биологическим методам).

Методом темнопольной микроскопии невозможно отличить бледную трепонему от патогенных возбудителей других трепонематозов — T. pallidum carateum (пинта), T. pallidum pertenue (фрамбезия), T. pallidum endemicum (беджель).

3. Применение темнопольной микроскопии для диагностики сифилиса

Микроскопию в темном поле можно применять для диагностики первичных и вторичных поражений кожи при сифилисе в результате заражения половым путем. В редких случаях этот метод можно использовать при третичном сифилисе (в последнем случае — если материал взят из глубины инфильтрата или со дна язвы).

Также с помощью этого метода исследуют поражения при раннем врожденном сифилисе, когда заражение плода бледной трепонемой произошло в утробе матери. Чтобы подтвердить диагноз "врожденный сифилис", для приготовления препарата для микроскопии можно использовать ткань пуповины, органы плода, выжатый сок плаценты, амниотическую (плодную) жидкость, отделяемое слизистой оболочки носа, содержимое пузырей (при ладонно-подошвенной сифилитической пузырчатке), тканевой жидкости (серума) с раздраженных папул.

Метод темнопольной микроскопии, используемый для диагностики сифилиса, отличается простотой, дешевизной, быстротой и достаточно высокой чувствительностью. Однако у него есть известные недостатки – невозможность диагностики скрытых и поздних форм сифилиса и непригодность для контроля излеченности. Даже многократный отрицательный результат микроскопического исследования на бледную трепонему не может исключить сифилис.

Кроме того, для проведения исследования методом ТПМ микроорганизмы T. pallidum должны быть подвижными. В условиях применения пациентами различных антибактериальных препаратов, в том числе для лечения других заболеваний, диагностическая чувствительность ТПМ снижается. В подобных случаях необходимо исследование методом прямой иммунофлюоресценции (ПИФ) или проведение серологического обследования на сифилис.

Для повышения информативности лабораторной диагностики разрабатываются более чувствительные и специфичные прямые тесты на основе молекулярно-биологических технологий, например различные модификации метода ПЦР.

Метод прямой иммунофлюоресценции (ПИФ)

При необходимости микроскопия возбудителя в темном поле может быть дополнена прямой реакцией иммунофлюоресценции (ПИФ, direct fluorescent antibody test, DFA).

Прямой метод иммунофлюоресценции (по Кунсу) основан на взаимодействии антител, меченых флюорохромом, с антигеном, который находится на клетке, в клетке или в тканях. В качестве флюорохрома используют флюоресцеинизотиоционат (ФИТЦ).

Метод прямой иммунофлюоресценции предусматривает прямое выявление T. pallidum в образце при обработке материала специфическими моноклональными антителами. При этом на запарафинированные мазки или биопсийный материал накладываются противотрепонемные антитела, меченные флюоресцирующим красителем. Затем, образующиеся комплексы антиген—антитело исследуют под люминесцентным микроскопом.

В результате взаимодействия анти- T.pallidum антител, меченных ФИТЦ, и бледной трепонемы при люминесцентной микроскопии наблюдается специфическое ярко-зеленое свечение: бледная трепонема флюоресцирует ярко-зеленым цветом, сохраняя все морфологические признаки спирохеты.

Забор образцов производится таким же образом, как и для темнопольной микроскопии, при этом сам метод ПИФ является более точным, чувствительным и специфичным, чем ТПМ.

Метод ПИФ имеет преимущества перед темнопольной микроскопией для выявления бледной трепонемы. Флюоресцирующие микроорганизмы проще детектировать, вероятность спутать их с другими видами трепонем снижена. При этом возможна дифференцировка патогенных трепонем от непатогенных при исследовании материала со слизистых полости рта и прямой кишки, фиксация препаратов перед транспортировкой в лабораторию. Для исследования может быть использован материал, полученный при биопсии или аутопсии.

Кроме того, применение ПИФ ограничено из-за отсутствия промышленного производства и сертификации соответствующих ингредиентов в ряде стран, в частности, ФИТЦ-меченых моноклональных антител к патогенной бледной трепонеме.

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Для диагностики сифилиса применяется прямой метод определения ДНК бледной трепонемы — метод ПЦР; это один из методов амплификации нуклеиновых кислот (МАНК, nucleic acid amplification test, NAAT).

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) позволяет исследовать различные образцы (отделяемое сифилидов, биопсийный материал, биологические жидкости) в свежем, замороженном, фиксированном и парафинированном виде. В качестве объекта исследования методом ПЦР могут быть использованы соскобы шанкров и других высыпаний (папул, широких кондилом и т.д.), спинномозговая, амниотическая жидкость, сыворотка крови.

ПЦР–тесты для выявления ДНК бледной трепонемы были разработаны в 1991 году одновременно в нескольких лабораториях. Этот метод позволяет выявить и идентифицировать единственную молекулу ДНК бледной трепонемы среди сотен тысяч других молекул, что делает потенциально возможной диагностику нейросифилиса, третичного, врожденного сифилиса при наличии единичных трепонем в исследуемом материале.

Метод ПЦР высокоспецифичен, чувствителен и воспроизводим при правильном проведении и подготовке образцов. Однако, применительно к диагностике сифилиса, методы МАНК пока используется в исследовательских целях.

PCR в режиме реального времени (PCR-RT). Учет полученных результатов происходит автоматически в режиме реального времени по уровню свечения флюорохромных меток;
методика PCR-анализа с помощью обратной транскриптазы (PCR-ОТ);
мультиплексная PCR (PCR-М, М-ПЦР), которая позволяет в биологической пробе одновременно определять наличие возбудителей нескольких заболеваний.

Основными достоинствами метода ПЦР и его модификаций является универсальность (возможность обнаружить любые нуклеиновые кислоты), весьма высокая чувствительность (80 – 94,7 %) и высокая специфичность (до 100 %). Результат получается быстро, для анализа необходима проба малого объема (несколько микролитров). Современные методы ПЦР позволяют одновременно исследовать нескольких возбудителей заболеваний, а также получать документальный ответ в виде фотографий и вносить результаты диагностики на компьютерные информационные носители. К недостаткам метода ПЦР-анализа следует отнести высочайшие требования к оснащению лаборатории, качеству тест–наборов и регламенту исследования.

Метод ПЦР является дополнительным и может быть рекомендован, главным образом, для исследования отделяемого эрозивных и язвенных высыпаний при подозрении на первичный сифилис, особенно при их локализации на слизистой оболочке рта; при применении пациентами местных и системных антибактериальных средств накануне обращения к врачу; при отрицательных результатах серологических тестов в начале первичного периода, когда ошибка метода ТПМ особенно значима.

Развитие высокочувствительного метода ПЦР и разработка его модификаций, оценивается как весьма перспективное. Особую важность этот метод приобретает при диагностике первичного серонегативного сифилиса (при котором серологические исследования дают отрицательный результат), раннего скрытого, врожденного сифилиса и нейросифилиса.

Препятствием к широкому внедрению метода ПЦР для диагностики сифилиса является отсутствие в массовой доступности тест-систем, разрешенных к медицинскому применению. В США применение ПЦР рекомендовано лабораториям, располагающим соответствующими тест-системами (в том числе созданными в самих лабораториях, in house). В России и странах Восточной Европы широкое использование метода лимитируется небольшим количеством наборов реагентов, прошедших валидацию и разрешенных к медицинскому применению на территории соответствующих государст

NASBA

NASBA - Nucleic Acid Sequence-Based Amplification, амплификация, основанная на последовательности нуклеиновых кислот (другие переводы - реакция амплификации на основе нуклеотидной последовательности нуклеиновых кислот, реакция транскрипционной амплификации). Методика NASBA основана на выделении РНК микроорганизма (в отличие от полимеразной цепной реакции, где используется ДНК). Этот метод тестирования считается одним из самых перспективных и многообещающих направлений молекулярной диагностики.

Использование в качестве мишени для NASBA видоспецифических участков рибосомальной РНК обеспечивает методу высокую специфичность. Так как РНК — менее стабильный по сравнению с ДНК тип генетического материала, который быстрее деградирует при разрушении клеток, то на основании результатов выявления РНК можно судить о наличии в образце жизнеспособных микроорганизмов, например, после проведенного лечения. С практической точки зрения важно, что для проведения NASBA в лабораторных условиях используется то же оборудование, что и для проведения ПЦР в реальном времени (PCR-RT). Кроме того, исходный биоматериал после ПЦР может исследоваться методом NASBA. В результате этого существует возможность интегрирования указанного метода в протокол лабораторного обследования, что позволит верифицировать возбудителя

Отдельные исследовательские коллективы уже получают достаточно перспективные результаты при изучении сифилитической инфекции методом NASBA и NASBA-RT, используя в качестве качестве мишени фрагмент гена 16s рРНК бледной трепонемы. Полученные данные позволяют отнести метод NASBA к диагностически перспективным в изучении сифилитической инфекции наряду с имеющимися методами диагностики.

Заражение сифилисом лабораторных животных

Задолго до открытия бледной трепонемы многие ученые стали проводить эксперименты по заражению сифилисом разнообразных животных. В естественных условиях животные сифилисом не болеют, но возможно искусственное заражение некоторых их видов. Первые успешные опыты были проведены на шимпанзе в начале 20-го века. Дальнейшие опыты на обезьянах привели к ряду блестящих научных открытий, но ввиду трудностей содержания и дороговизны обезьян, основными лабораторными животными стали кролики. Опыты с другими животными (холоднокровными, птицами, различными млекопитающими) давали отрицательный или недостаточный для практического применения результат. Некоторое значение имели только данные, полученные на морских свинках и мышах.

Заражение сифилисом кроликов является старейшим методом прямого выявления бледной трепонемы, т.к. кролик является наиболее чувствительным и удобным лабораторным животным для привития сифилиса. Заражение кроликов производят инокуляцией (введением микроорганизмов в ткани, от латинского inoculatio - "прививка") инфекционного материала в яичко. Чувствительность кроликов к инфекции Treponema pallidum практически 100%, если во взятом для прививки материале содержится достаточное количество бледных трепонем.

Бледная трепонема (Treponema pallidum) – это специфическая патогенная бактерия, которая является возбудителем сифилиса.

Она имеет извитую форму и передается половым путем.

Анализ на бледную трепонему выполняется с целью достоверной диагностики сифилиса.

Для последующей эффективной этиотропной терапии, направленной на уничтожение возбудителя патологии.

Какие методики включает исследование на бледную трепонему?

Современные лаборатории для диагностики сифилиса используют различные методики определения специфических антител в крови пациента.

Антитела образуются иммунной системой в ответ на проникновение и развитие бледной трепонемы в организме.

О том как проходят анализы на
бледную трепонему рассказывает
подполковник медицинской службы,
врач Ленкин Сергей Геннадьевич

Содержание данной статьи проверено и подтверждено на соответствие медицинским
стандартам врачем дерматовенерологом, урологом, к.м.н.

Ленкиным Сергеем Геннадьевичем

Наименование	Срок	Цена
Микрореакция на сифилис качественно (RPR)	1 д.	500.00 руб.
ДНК Treponema pallidum	3 д.	300.00 руб.

Такие исследования разделяются на 2 основные группы:

I. Нетрепонемные тесты. В крови определяются антитела к кардиолипиновому антигену. Он образуется вследствие разрушения тканей под действием бледной трепонемы. Положительный результат данных тестов не является достоверным. И прямо не указывает на наличие бледной трепонемы в организме человека. Так как антитела к кардиолипиновому антигену могут продуцироваться и при других патологических состояниях. Поэтому нетрепонемные тесты применяются для ориентировочной диагностики сифилиса. Они включают РМП (реакция микропреципитации) и RPR (плазмореагиновый тест, являющийся аналогом РМП).
II. Трепонемные тесты. Лабораторные методики, при помощи которых определяются антитела непосредственно к бледной трепонеме. Данные тесты являются более специфичными, они проводятся для более углубленной диагностики сифилиса. К ним относятся:

ИФА;
РПГА;
иммуноблотинг;
реакция иммобилизации бледных трепонем (в сыворотку крови вносится взвесь живых бактерий, которые при наличии антител к ним обездвиживаются).

Выбор методики исследования на бледную трепонему определяется показаниями к его проведению и техническими возможностями лаборатории.

Также существует методика непосредственного выявления и идентификации генетического материала бледной трепонемы при помощи ПЦР.

На данный момент она еще не получила широкого распространения и не была включена в протоколы диагностики сифилиса.

С помощью бактериологического исследования, при котором проводится посев исследуемого материала на питательную среду, не может быть выявлена бледная трепонема. Устойчивость во внешней среде этих бактерий очень низкая, поэтому они быстро погибают и не дают роста колоний на питательной среде.

Когда проводится анализ на бледную трепонему?

Существует 2 основных вида показаний к проведению анализа на бледную трепонему.

К ним относится скрининговое и диагностическое исследование.

Скрининговое исследование проводится всем лицам, которые по разным причинам обращаются в лечебно-профилактическое учреждение.

Для его проведения используются нетрепонемные тесты (РМП или RPR).

В случае получения положительного результата нетрепонемного теста, проводится диагностическое исследование с применением трепонемных тестов.

Также трепонемные анализы делаются при обращении человека к врачу венерологу по поводу симптоматики, которая характеризует одну из стадий течения сифилиса (шанкр на половых органах, сыпь на коже),

Где выполняется анализ на бледную трепонему?

Нетрепонемные тесты для скринингового исследования на бледную трепонему проводятся в клинико-диагностической лаборатории при любом медицинском учреждении.

Трепонемные тесты являются более специфичными.

Они требуют специального оборудования и реактивов, поэтому они выполняются в специализированных лабораториях.

При необходимости сделать любой анализ на бледную трепонему, обращайтесь к автору этой статьи – венерологу, урологу в Москве с 15 летним опытом работы.

Оптимальные условия

Трепонема паллидум получает энергию без доступа к кислороду, а среда обитания микроорганизма должна быть теплой, иметь достаточную влажность и pH 7,4. При внедрении трепонемы внутрь организма первично поражается лимфатическая система, которая служит для нее идеальным местом размножения. Затем с током лимфы происходит ее перенос в другие органы и системы. Поглощение трепонемы лейкоцитами все равно оставляет ее жизнеспособной, что обуславливает резистентность к некоторым антибиотикам. При благоприятных условиях обитания размножение спирохеты происходит каждые 30 часов.

Существование при неблагоприятных условиях

Трепонема моментально погибает вне человеческого организма на сухой поверхности. Во влажной среде обитания способна существовать до нескольких дней. При кипячении спирохета погибает в течение нескольких секунд, а при 0 градусов – через 1–2 дня. Изменение pH как в кислую, так и в щелочную сторону губительно для трепонемы. Она не обладает устойчивостью к дезинфицирующим растворам при условии высокого их процентного содержания (например, 70–80%-й спирт уничтожает бактерию сразу, а 40%-й – в течение получаса).

Пути передачи

Половой – самый распространенный путь заражения. Наибольшее количество возбудителя находится во влагалищном секрете, сперме и выделениях из сифилитической язвы.
Бытовой путь – отмечается сравнительно реже. Передача спирохет происходит при несоблюдении правил личной гигиены, применении предметов обихода (полотенце, зубная щетка), которые использовал больной.
Трансфузионный (переливание крови).
Трансплантационный (трансплантация органов).
Профессиональный. У медицинских работников, косметологов, работников тату-салонов.
Вертикальный. Передача возбудителя от матери к плоду.

Симптомы

Клиническая картина заболевания может проявиться спустя неделю или полтора месяца после заражения. Первоначально поражаются кожные покровы: может образовываться сифилитическая сыпь, твердый шанкр на месте внедрения трепонемы. Шанкр не вызывает никакого дискомфорта, пока не начинается его изъязвление. Возникает воспалительный процесс в рядом расположенных лимфатических узлах, нарушается зрение, снижаются память и концентрация внимания. Значительно ухудшается состояние волос, сначала они становятся ломкими, затем начинают выпадать вплоть до образования очагов облысения. Помимо этого, наблюдается повышение температуры тела, ломота в мышцах и костях, головные боли и тошнота.

Диагностика

В нашем медицинском центре для диагностирования сифилиса помимо осмотра у врача-дерматовенеролога и сбора анамнеза проводятся лабораторные исследования.

Бледная трепонема в крови обнаруживается несколькими современными способами:

RPR – скрининговый метод, помогающий выявить антитела в крови, свидетельствующие о перенесенном либо прогрессирующем заболевании. Часто проводится не только для выявления заболевания, но также для контроля эффективности лечения;
РИФ – высокоспецифичный и точный метод, основанный на связывании меченых антител с возбудителем. Методика более сложная и длительная.

В зависимости от стадии заболевания и характера течения сифилиса, врачами-венерологами клиники могут быть использованы и другие методы диагностики. Для выявления сифилиса нами используются комплексные мероприятия.

Терапия

Сифилис главным образом лечится антибиотиками из группы пенициллинов. Очень важно начать лечение этого венерического заболевания в ранней стадии, когда спиралевидные формы возбудителя располагаются внеклеточно и интенсивно делятся. Этот период делает их восприимчивыми к антибактериальной терапии. При непереносимости препаратов пенициллинового ряда врач-венеролог назначает макролиды или тетрациклины. Для улучшения эффекта от лечения возможно применение препаратов висмута, а также средств, повышающих иммунитет организма.

Более подробно узнать о методах лечения вы можете, позвонив нам по указанным телефонным номерам. Записаться на прием к врачу-дерматовенерологу возможно в удобное для вас время. Мы проводим прием пациентов и диагностику ежедневно и гарантируем полную анонимность.

Содержание статьи проверил и подтвердил на соответствие медицинским стандартам главный врач клиники "Частная Практика"

Читайте также: