Посев на дифтерию из носа и зева

Обновлено: 04.10.2024

Микробиологический посев на дифтерийную палочку позволяет выделить возбудителя дифтерии с помощью специальных питательных сред. После идентификации вида проводится постановка антибиотикограммы диско-диффузионным методом с учетом рекомендаций по антибиотикорезистентности возбудителей.

В каких случаях обычно назначают посев на дифтерийную палочку?

Дифтерийная палочка вызывает заболевание дифтерией у детей и взрослых. Взрослые нередко могут быть бессимптомными носителями возбудителя дифтерии. Инфицирование происходит воздушно-капельным и контактно-бытовым путем. Посев на дифтерийную палочку в эпидемиологических целях показан при профилактических осмотрах и при госпитализации в стационары. Анализ показан при подозрение на дифтерию и в диагностически трудных случаях при ангинах (фолликулярной, кандидозной), а так же при дифференциальной диагностике инфекционного мононуклеоза, эпидемического паротита, лейкоза, паратонзилярного абсцесса.

Анализ обязателен для контроля лечения дифтерии через 14 дней после окончания антибиотикотерапии.

Что именно определяется в процессе анализа?

Выявляется рост возбудителя дифтерии на питательных средах при его наличии во взятом на анализ биологическом материале.

Что означают результаты теста?

У здорового человека посев должен дать отрицательный результат. Рост возбудителя дифтерии подтвердит диагноз дифтерия при наличии соответствующих симптомов и выявит носителей дифтерийной палочки в случае бессимптомного носительства. Анализ требуется врачу инфекционисту для выявления бактерионосителей и больных дифтерией, а так же для подбора антибактериальных препаратов с целью лечения данных состояний.

О бычный срок выполнения теста:

Нужна ли специальная подготовка к анализу?

Специальная подготовка не требуется. Необходимо сдать анализ до начала антибактериальной терапии или через 2 недели после проведенного лечения.

Выберите требуемый вид биоматериала

В течение суток перед исследованием не применять местные антисептики и антибиотики, в течение 2 часов исключить любые местные процедуры (полоскания, спреи, капли). Материал для исследования из зева берется утром до чистки зубов, или в течение дня не ранее чем через 2 часа после последнего приема пищи. Исследование проводится до начала антибактериальной терапии. Контроль излеченности - не ранее чем через 2 недели после окончания лечения.

Материал собирается по указанию врача

В норме роста нет.
Обнаружение Corynebacterium diphtheriae указывает на наличие инфекции или бактерионосительство.

Дифтерия относится к инфекционным болезням, развитие которых обусловлено заражением организма бактериями. Для патологии характерно появление пленочного налета на поверхности пораженных органов, например, в ротоглотке, носовых ходах, глазах или ушной раковины. Для постановки диагноза при подозрении на инфекционное заболевание врач направляет пациента на мазок на дифтерию из носа и зева.

Содержание статьи

Заподозрить активацию палочки Леффлера (инициатора развития дифтерии) можно на основании некоторых симптомов:

острое начало;
фебрильная гипертермия, когда температура превышает 38 градусов;
цефалгия (головные боли);
недомогание;
учащенное сердцебиение;
лимфаденит, при котором близко расположенные с воспалительном очагу лимфоузлы увеличиваются в диаметре, при прощупывании становятся болезненными, уплотненными.

Через 3 суток от начала болезни температура снижается до субфебрильных показателей, а фибринозные пленки уплотняются, приобретают перламутровый окрас.

Не пытайтесь самостоятельно удалить пленки с миндалин, носа. Это приводит к обнажению раневой поверхности и появлению кровоточивости.

Акцентируем внимание, что существует токсическая форма болезни. Для нее характерна гектическая лихорадка, выраженная слабость. Признаком прогрессирования дыхательной, кардиальной недостаточности является появление акроцианоза (посинение ушей, носа, носогубной зоны, пальцев), а также снижение артериального давление и нарастание тахикардии.

При этом пациента могут беспокоить галлюцинации, как проявление интоксикации, гипоксического поражения структур головного мозга. Также наблюдается возбуждение, тошнота, гнусавость голоса, затрудненное дыхание, одышка и отечность шеи.

Дифтерийный токсин приводит к развитию крупа, когда поражается трахея и бронхиальное дерево. Симптоматически патология проявляется лающим кашлем, который постепенно становится беззвучным и развивается асфиксия.

В связи с высокой токсичностью возбудителя в детском возрасте проводится вакцинация с последующей ревакцинацией. Несвоевременное лечение болезни приводит к развитию:

инфекционно-токсического шока;
асфиксии;
почечной дисфункции (нефроз, ренальная недостаточность);
поражению нервов;
миокардита;
полиорганной недостаточности (при токсической и гипертоксической формах).

Показания для анализа

В ряде случаев мазок на дифтерию и другую патогенную флору проводится при подозрении на развитие заболевания. Однако с профилактической целью исследование показано:

при трудоустройстве в лечебные, детские учреждения, в пищевую сферу;
перед посещением учебных учреждений;
беременным для определения риска возможных осложнений;
после контакта с больным человеком;
для подбора лекарственной терапии.

Таким образом, профилактическое исследование дает возможность предупредить развитие эпидемий, связанных с распространение инфекционных возбудителей.

Особенности диагностики

Различают несколько штаммов палочки Леффлера. Они отличаются по культуральным, структурным и ферментативным свойствам. Для подтверждения диагноза врач бактериальный анализ на дифтерию. Исследуя материал, специалист обнаруживает бациллу Леффлера, что в сочетании с клинической картиной является достоверным фактором болезни.

Для обнаружения инфекционного агента может потребоваться до полусуток, при условии, если пациент не принимал лекарственные препараты.

Когда мазок из зева берется на фоне антибактериальной терапии, рост бактерий значительно замедляется, а результаты диагностики не считаются достоверными. В таком случае целесообразно использовать серологические методы исследований.

Чаще всего для этого назначается РПГА, которая проводится в течение первых 3 суток и спустя неделю постановки диагноза. Диагностический метод дает возможность выявить антитела к токсину дифтерийной бактерии. Положительный результат отмечается при увеличении антител в 4 и более раз. Таким образом, можно найти людей с низким уровнем иммунной защиты против дифтерийного токсина.

При отсутствии антител на дифтерийный токсин проводится вакцинация с помощью АКДС.

Подготовка к сдаче мазков

Когда требуется мазок на дифтерию, как сдавать анализ разберем несколько позже. Сейчас остановимся на подготовительном этапе. Он включает:

прекращение приема антибактериальных средств за 10 дней до диагностики;
использование растворов для полоскания ротовой полости, ротоглотки с антисептическими компонентами запрещается за 5 суток до исследования;
анализ сдается натощак;
в день диагностики не рекомендуется чистить зубы.

Забор материала

Необходимый материал для диагностики берется из зева и носа. Вначале пациент наклоняет назад голову, максимально широко открывает ротовую полость. Специалист фиксирует язык металлическим или деревянным пластырем, принимая его ко дну полости рта.

Стерильным тампоном на удлиненной петле специалист проводит по слизистой оболочке ротоглотки. В процессе введения и выведения из ротовой полости тампона он не должен соприкасаться с другими поверхностями. Материал на тампоне опускается в пробирку, благодаря которой он транспортируется в лабораторию без повреждений и гибели микробов.

Набранный материал следует посеять в первые 2 часа. В процессе забора материала человек может испытывать неприятные ощущения или позыв на рвоту (особенно те пациенты, у которых повышен рвотный рефлекс).

Далее врач приступает к взятию мазка из носового хода. Для этого пациент также наклоняет голову назад, очищается носовой ход от слизи, а кожные покровы обрабатываются спиртом.

Стерильный тампон на удлиненной петле необходимо вводить поочередно в носовые ходы, плотно соприкасаясь с поверхностью слизистой оболочки. После этого тампон опускается в стерильную пробирку, и отправляют ее в лабораторию.

Микроскопическое исследование

Взятый из ротоглотки материал подвергается микроскопии. Для этого врач наносит его на предметное стекло, окрашивает специальными красителями и изучает клеточный состав.

Морфологические признаки дифтерийной палочки настолько различны, что микроскопия используется, как предварительное исследование перед посевом. Оно дает возможность проанализировать состав флоры. Окраска может проводится по Граму, Леффлеру (наиболее информативный, часто используемый) и Нейссера.

В мазках дифтерийные палочки расположены, как римская цифра 5.

Посев материала

Для обеспечения оптимальных условий для роста и размножения бактерий необходимо подобрать специальную питательную среду. Посев на дифтерию осуществляется в стерильном боксе на свернутую сыворотку Ру, теллуритовые дифсреды, сывороточно-/кровяно-теллуритовый агар или среду Клауберга.

Материал помещают в среду, затем рассеивают по поверхности. Для этого применяется чашка Петри. Инкубация посевов осуществляется в условиях термостата. Ежедневно контролируется рост и характер вырастающих колоний. С целью выделения чистой культуры пересеиваются колонии на селективные питательные среды.

Благодаря бакпосеву и дополнительной диагностике удается подтвердить диагноз инфекционного заболевания и своевременно принять меры по лечению больного человека и предупреждению распространения инфекции среди его окружения.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции

1. РАЗРАБОТАНЫ Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Е.Б.Ежлова, А.А.Мельникова, Н.А.Кошкина); ФБУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора (М.В.Зароченцев, И.В.Новокшонова); ФБУН "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н.Габричевского" Роспотребнадзора (И.К.Мазурова, О.Ю.Борисова, С.Ю.Комбарова, В.Г.Мельников, Н.М.Максимова, Т.Н.Якимова); ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в г.Москве" Роспотребнадзора (Н.Я.Салова, И.П.Требунских).

2. РЕКОМЕНДОВАНЫ К УТВЕРЖДЕНИЮ Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 30 мая 2013 года N 1).

3. УТВЕРЖДЕНЫ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 14 июля 2013 г.

1. Область применения

Методические указания (далее - МУ) предназначены для специалистов бактериологических лабораторий санитарно-эпидемиологической службы, лечебно-профилактических организаций независимо от их организационно-правовой формы и формы собственности и научно-исследовательских институтов, осуществляющих лабораторную диагностику дифтерийной инфекции.

2. Общие положения. Сущность метода

Бактериологическое исследование проводят с целью лабораторной диагностики дифтерийной инфекции, выявления источников инфекции, подтверждения эпидемиологических связей и наблюдения за распространением токсигенных коринебактерий дифтерии. Цель бактериологического исследования - выявление возбудителя дифтерии с помощью минимального количества диагностических тестов, необходимых, достаточных и специфичных для получения достоверного ответа в максимально сжатые сроки: не менее трёх суток - отрицательный ответ, трёх-четырёх суток - ответ о выделении токсигенных коринебактерий дифтерии (возбудителя дифтерии), четырёх-пяти суток - ответ о выделении нетоксигенных коринебактерий дифтерии или других представителей этого рода.

Возбудитель дифтерии - коринебактерии дифтерии (Corynebacterium diphtheriae), продуцирующие дифтерийный токсин (экзотоксин). Источником инфекции является больной или бактерионоситель токсигенных С.diphtheriae.

Нетоксигенные С.diphtheriae не вызывают дифтерийную инфекцию. "Этиологическая" значимость этих микроорганизмов при фарингите, артрите, эндокардите и др. гнойно-септических заболеваниях требует специальных доказательств. При выделении нетоксигенных штаммов C.diphtheriae от больных с подозрением на дифтерийную инфекцию следует обратить внимание на правильность проведения бактериологического исследования и оценку токсигенных свойств.

Способность С.diphtheriae вырабатывать экзотоксин опосредован феноменом фаговой (или лизогенной) конверсии. Конверсию нетоксигенных штаммов С.diphtheriae в токсигенные и наоборот можно воспроизвести в особых экспериментальных (лабораторных) условиях. В тех случаях, когда при первичном посеве исследуемого материала от больных дифтерией или бактерионосителей выделяют токсигенные, а при повторных обследованиях после лечения антибиотиками - нетоксигенные коринебактерии дифтерии, можно предположить, что токсигенные и нетоксигенные С.diphtheriae колонизировали слизистые ротоглотки и носа одновременно. При лечении антибиотиками в первую очередь исчезают токсигенные штаммы, как более чувствительные к их действию, а нетоксигенные штаммы продолжают выделяться. Обнаружение только нетоксигенных штаммов у бактерионосителей при повторных обследованиях после лечения нельзя трактовать как утрату способности токсигенных штаммов продуцировать экзотоксин.

Таксономически близкими к виду C.diphtheriae являются Corynebacterium ulcerans и Corynebacterium pseudotuberculosis - природные патогены крупного и мелкого рогатого скота, лошадей, домашних животных, способные вырабатывать дифтериеподобный экзотоксин, в редких случаях могут вызывать заболевания у человека.

Известны случаи выделения токсигенных C.ulcerans при клинической картине заболевания, сходной с дифтерией, а также токсигенных C.pseudotuberculosis, вызывающих лимфадениты. Инфекции, вызванные этими микроорганизмами, у человека встречаются крайне редко, не имеют эпидемического распространения, а, следовательно, значение этих случаев в медицине невелико.

На слизистых оболочках ротоглотки и носа в норме часто встречается Corynebacterium pseudodiphtheriticum (ложнодифтерийная палочка Гофмана). Умение выделять и идентифицировать данные микроорганизмы, а также нетоксигенные C.diphtheriae служит критерием оценки качества работы бактериологов, особенно в период снижения и спорадической заболеваемости дифтерией.

C.diphthereiae растут на питательных средах, сбалансированных по своему составу, и не растут на простых питательных средах. Требуется кровь любого животного или человека (донора), как источник аминокислот, ростовых факторов, железа и пр. Не всегда коммерческие среды удовлетворяют этим требованиям, поэтому контроль качества питательных сред и всех ингредиентов в лабораториях обязателен.

Кровяные теллуритовые среды (КТА, Клауберг II) остаются лучшими селективными дифференциально-диагностическими средами, обеспечивающими рост колоний через 24 ч, что на одни сутки сокращает сроки выдачи окончательного бактериологического ответа. КТА прост в приготовлении: основой этой среды является коммерческий сухой питательный агар (СПА), в качестве кровяных добавок используют кровь, однако не исключены любые гемолизированные кровяные добавки.

Трудоемкость бактериологического метода и стоимость анализа сокращается при использовании двух половин одной чашки с селективной дифференциально-диагностической питательной средой (далее плотная питательная среда) для посева материала из зева и носа от одного обследуемого. Использование чашки для посева таких образцов на плотной питательной среде недопустимо, так как не позволяет, в большинстве случаев, получить рост изолированных колоний и провести исследование в установленные сроки.

Посев материала из зева и носа на кровяной агар производить нецелесообразно, так как очень сложно получить рост изолированных колоний C.diphtheriae на данной среде из-за обильного роста другой сопутствующей микрофлоры.

Колонии, морфология которых характерна для микроорганизмов рода Corynebacterium, в подавляющем большинстве не подлежат микроскопии и должны быть изучены по всем необходимым идентификационным тестам. "Сомнительные" колонии с нехарактерными морфологическими свойствами подвергают микроскопии. Если в мазках обнаруживают коринеформные микроорганизмы, исследование следует продолжить по всем необходимым идентификационным тестам.

Окрашивание мазков осуществляют по Лёффлеру (щелочной метиленовый синий) или с использованием других синих красителей. Окраску по Граму не применяют, т.к. в процессе окраски клетки грамположительных C.diphtheriae легко обесцвечиваются спиртом и могут выглядеть грамотрицательными (розовый оттенок). Чаще всего это явление наблюдают при окрашивании токсигенных C.diphtheriae (клеточная стенка токсигенных C.diphtheriae ближе по организации и структуре к грамотрицательным микроорганизмам).

В бактериологической практике опираться только на морфологические свойства микробной клетки или колоний при идентификации C.diphtheriae недостаточно. Описаны случаи бактериологической гипо- и гипердиагностики (в 55,0 и 14,5% случаев соответственно), когда использовали учет только морфологических признаков.

При идентификации C.diphtheriae необходим комплекс идентификационных тестов. Основной специфический тест для выявления возбудителя дифтерии, правильная постановка которого является залогом успешной диагностики дифтерийной инфекции, - определение у выделенной культуры способности к продукции дифтерийного токсина. Определять продукцию токсина следует начинать уже в первый день появления роста изолированных колоний на чашках с плотной питательной средой, исключая этап накопления чистой культуры. Несоблюдение этого правила увеличивает сроки исследования на одни сутки.

Во избежание ошибок при определении токсигенных свойств коринебактерий необходимо изучать данный признак у максимального числа выросших колоний (двадцать и более) с чашек первичного посева. При множественном росте подозрительных колоний нельзя ограничиться формированием только одной-двух бляшек. Кроме того, необходимо изучать токсигенные свойства отдельных изолированных колоний, чтобы не потерять нетоксигенные штаммы C.diphtheriae, присутствие которых также возможно при наличии токсигенных C.diphtheriae в патологическом материале.

Используют два способа постановки пробы на токсигенность:

1) модифицированная проба Элека с бумажными полосками, утверждённая для бактериологической практики в нашей стране в 1961 г.;

2) проба Фельдмана Ю.Г. и соавторов с бумажными дисками, разработанная в нашей стране и утвержденная в 1988 г., получившая одобрение Международной рабочей группы ВОЗ по лабораторной диагностике дифтерийной инфекции к применению в зарубежных лабораториях.

В пробе на токсигенность следует использовать только антитоксин - противодифтерийные антитоксические антитела, очищенные методом специфической сорбции, что позволяет избежать появления неспецифических линий преципитации микробного происхождения. В исключительных случаях при отсутствии антитоксина допускается использование лечебной противодифтерийной антитоксической лошадиной сыворотки. В таком случае возможно появление неспецифических линий преципитации микробного происхождения, которые необходимо отличить от специфических линий токсического происхождения.

Обязательными являются биохимические тесты - на цистиназу, уреазу, расщепление глюкозы, сахарозы и крахмала. Тест на нитраты проводят только при положительной уреазной реакции. Использование других тестов, применяемых в некоторых зарубежных странах, необоснованно увеличивает продолжительность, трудоемкость, стоимость исследования и не всегда приводит к точной идентификации "недифтерийных" микроорганизмов (других представителей рода Corynebacterium). При лабораторной диагностике дифтерии не является обязательным определение видовой принадлежности "недифтерийных" коринебактерий рода Corynebacterium, тем более что их идентификация требует отдельных хемотаксономических и молекулярно-генетических методов исследования.

C.diphtheriae подразделяют на культурально-биохимические варианты (биовары) gravis, mitis, intermedius, belfanti. В бактериологической практике определению подлежат биовар gravis и объединенная группа "митисных форм" - mitis, intermedius, belfanti, т.е. группа микроорганизмов C.diphtheriae, которая не обладает амилазной активностью (не разлагает крахмал). Биовар belfanti не подлежит отдельному определению, так как этот микроорганизм не способен продуцировать экзотоксин. В бактериологической диагностике отдельного выделения биовара intermedius так же не требуется, так как относительно условными дифференцирующими признаками от биовара mitis являются только размер колоний и наличие липофильности. Таким образом, в бактериологической диагностике определяются токсигенные и биохимические свойства C.diphtheriae биовара gravis и группы микроорганизмов, у которых отсутствует амилазная активность, объединённые в группу C.diphtheriae биовар mitis.

Молекулярно-генетические методы для лабораторного выявления C.diphtheriae находятся в стадии разработки. Имеющиеся тест-системы для метода ПЦР не могут различить ген дифтерийного токсина токсигенных штаммов от "молчащего" гена дифтерийного токсина нетоксигенных токснесущих штаммов C.diphtheriae, не способных продуцировать токсин из-за мутаций в этом гене. Это может привести к гипердиагностике. Поэтому их использование в лабораторной диагностике дифтерии может иметь только вспомогательное значение - поиск нетоксигенных токснесущих штаммов C.diphtheriae среди нетоксигенных штаммов.

3. Характеристика возбудителя дифтерийной инфекции

Род Corynebacterium гетерогенный, как и группа, условно объединившая его и другие роды грамположительных палочек, не образующих споры размером 0,3-0,81,5-8,0 мкм, неподвижных, обладающих различной степенью полиморфизма и плеоморфизма. C.diphtheriae имеют размер 0,2-0,61,0-7,0 мкм. Арабиногалактановый полимер клеточной стенки C.diphtheriae отличает этот вид от всех других видов рода Corynebacterium. Клеточная стенка С. diphtheriae имеет от 3-5 до 7-9 слоёв. Известно, что клеточная стенка токсигенных C.diphtheriae лучше дифференцирована и более тонкая по сравнению с клеточной стенкой нетоксигенных C.diphtheriae и других коринеформных микроорганизмов этого рода, что определяет их отношение к антибиотикам - токсигенные более чувствительны, чем нетоксигенные к пенициллину, эритромицину, тетрациклину и макролидам. Однако появляются штаммы C.diphtheriae устойчивые к некоторым антибиотикам, преимущественно выделенные от бактерионосителей.

Патогенные для животных Corynebacterium ulcerans и Corynebacterium pseudotuberculosis, некоторые комменсалы кожи со слизистых оболочек человека, например, Corynebacterium pseudodiphtheriticum (ложнодифтерийная палочка Гофмана), Corynebacterium xerosis, Corynebacterium striatum таксономически близки к виду C.diphtheriae.

Большинство видов лучше растет в аэробных условиях, в том числе и микроорганизмы вида C.diphtheriae. Вместе с тем, C.diphtheriae являются факультативными анаэробами (генерируют энергию, используя как молекулярный О, так и органические соединения), что крайне важно учитывать при изучении их ферментативной активности.

Все коринебактерии, в т.ч. и C.diphtheriae, являются мезофилами и растут при 36-37 °С.

Устойчивость к факторам внешней среды

Культурально-морфологические свойства

Обычно колонии микроорганизмов из рода Corynebacterium на плотных питательных средах (например, на кровяном агаре) имеют серовато-белую или желтую окраску, непрозрачные или полупрозрачные, приподнятые, округлой формы, диаметром 1-3 мм. Чаще всего они бывают мягкой, маслянистой консистенции, хотя некоторые виды рода Corynebacterium могут образовывать шероховатые R-колонии и крошиться при прикосновении. На питательных средах, сбалансированных по своему составу и удовлетворяющих требованиям культивирования C.diphtheriae, через 24-48 ч роста вариант mitis образует колонии S-типа - приподнятые, гладкие, диаметром 1-2 мм; S-R-колонии варианта gravis обычно выпуклые, с приподнятым центром, диаметром 2-3 мм; колонии варианта intermedius - S-типа, мелкие, плоские, гладкие, с ровным краем, диаметром 0,5-1 мм.

На селективных дифференциально-диагностических средах - кровяной теллуритовый агар (КТА) и Клауберг II через 24-48 ч роста колонии C.diphtheriae варианта gravis имеют серо-черную или черную окраску с металлическим оттенком ("цвет мокрого асфальта"), непрозрачные, матовые, приподнятые с выпуклым центром, округлой формы, диаметром 1-3 мм, имеют радиальную исчерченность (форма "маргаритки") или выраженную краевую изрезанность, часто крошатся при прикосновении; колонии C.diphtheriae варианта mitis имеют серо-черную или черную окраску ("цвет мокрого асфальта"), непрозрачные, матовые, приподнятые с выпуклым центром, иногда плоские, округлой формы, диаметром 1-2 мм, чаще всего бывают мягкой, маслянистой консистенции или могут крошиться при прикосновении; колонии C.diphtheriae варианта intermedius имеют серо-черную окраску, мелкие, плоские, гладкие, с ровным краем, диаметром 0,5-1,0 мм, мягкой, маслянистой консистенции.

Морфология колоний C.ulcerans и C.pseudotuberculosis на КТА через 24-48 ч роста идентична морфологии колоний С.diphtheriae варианта gravis, серо-черной или черной окраски ("цвет мокрого асфальта"), иногда с коричневым оттенком, колонии непрозрачные, матовые, приподнятые с выпуклым центром, округлой формы с радиальной исчерченностью (или без неё), диаметром 1-2 мм. Колонии C.pseudodiphtheriticum - серого цвета с характерным светлым ободком, непрозрачные, приподнятые, матовые, округлой формы, диаметром 1-2 мм.

На теллуритовой среде без крови (коринебакагар) колонии C.diphtheriae через 24 ч роста мелкие (иногда 0,2-0,6 мм), через 48 ч роста размер колоний увеличивается до 1,0-1,2 мм, иногда наблюдаются "гигантские" колонии. Однако морфология колоний изменяется - исчезает исчерченность края, к 48 ч колонии меняют характерную для C.diphtheriae архитектонику - плоские, "расползающиеся" по поверхности агара, иногда меняется цвет колоний.

Помимо относительно условной оценки морфологии колоний на питательной среде первичного посева существует несколько других признаков, позволяющих различать биовары gravis, mitis, intermedius. Например, характерный рост на бульоне в пробирке: для биовара gravis - поверхностная пленка, бульон прозрачен, на дне пробирки через 24 ч организуется осадок; для биовара mitis - диффузное помутнение среды с образованием осадка, для биовара intermedius - тонкое гранулярное помутнение с последующим оседанием гранул на дно пробирки.

На кровяном агаре можно наблюдать гемолиз эритроцитов (кроличьих и крупного рогатого скота) при росте биовара mitis, гемолиз только кроличьих эритроцитов при росте биовара gravis и отсутствие гемолиза при росте биовара intermedius. Однако только биовар intermedius обладает липофильностыо - способностью усиливать рост на среде с 0,3% твина - 80.

Микробиологическое исследование, позволяющее выявить возбудителя дифтерии (C. diphtheriae) в исследуемом биоматериале.

Синонимы русские

Посев на бациллы Леффлера, посев на BL, посев на дифтерийную палочку.

Синонимы английские

Corynebacterium diphtheriae сulture, Diphtheria сulture.

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из зева и носа.

Как правильно подготовиться к исследованию?

За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.

Общая информация об исследовании

Corynebacterium diphtheriae (бациллы Леффлера) – это грамположительные бактерии рода Corynebacterium, являющиеся возбудителями дифтерии и способные к выработке дифтерийного токсина. Заболевание передается воздушно-капельным путем, источником инфекции являются больные люди или бактерионосители.

Инкубационный период составляет в среднем 2-5 дней. Происходит фибринозное воспаление слизистых оболочек ротоглотки и дыхательных путей с формированием псевдомембран и с симптомами общей интоксикации.

При токсической форме дифтерии также может поражаться сердце и нервная система. В некоторых случаях возможно бессимптомное носительство.

Диагноз "дифтерия" основывается на клинических данных, посев на дифтерию проводится для подтверждения.

Для чего используется исследование?

Для подтверждения диагноза "дифтерия".
Для дифференциальной диагностики заболеваний, протекающих со сходными симптомами, таких как ангины различного происхождения, паратонзиллярный абсцесс, инфекционный мононуклеоз, острый ларинготрахеит, эпиглоттит, бронхиальная астма.
Чтобы оценить эффективность проводимой антибактерильной терапии.

Когда назначается исследование?

При подозрении на дифтерию.
Когда известно, что пациент контактировал с больными дифтерией.
После проведения антибактериальной терапии – не менее чем через 2 недели после окончания курса антибиотиков.
В некоторых случаях перед госпитализацией в стационар (с профилактической целью).

Что означают результаты?

Референсные значения: нет роста.

Выявление возбудителя дифтерии подтверждает диагноз "дифтерия" или, если симптомы заболевания отсутствуют, свидетельствует о бактерионосительстве. При отрицательном результате посева у больного с подозрением на дифтерию диагноз может быть подтвержден в том случае, когда у контактных лиц результат посева положительный, то есть выделяется возбудитель дифтерии.

Причины положительного результата

Дифтерия или бессимптомное носительство C. diphtheriae.

Причины отрицательного результата

Отсутствие дифтерии. Исключение составляют случаи, когда на момент исследования проводилось лечение антибиотиками.

Что может влиять на результат?

Важные замечания

Диагноз "дифтерия" основывается на клинической картине заболевания, поэтому лечение должно быть начато до получения лабораторного подтверждения заболевания. При положительном результате посева необходимо исследовать выделенный штамм С. diphtheriae на токсигенность.

Читайте также: