Посев на культуре клеток герпес

Диагностика при наличии симптомов: посев вируса на культуре клеток

Симптомы герпеса у разных людей могут значительно отличаться. Если человек испытывает признаки инфекции, мы рекомендуем ему пройти посев на культуре клеток для выявления герпесвируса (мазок с высыпаний) на протяжении 48 часов с момента их возникновения. Результаты обычно бывают готовы через неделю.

Главным преимуществом посева на культуре клеток является высокая точность исследования в случае положительного результата. Кроме того, по культуре клеток можно определять, вирусом простого герпеса какого типа – первого или второго, была вызвана инфекция. Если результат лабораторной диагностики на культуре клеток окажется у вас положительным, можете быть уверенным, что у вас вирус герпеса.

Основным недостатком посева на культуре клеток является высокий процент ложноотрицательных результатов. Поскольку для посева вирус должен находиться в активном состоянии, если герпетический пузырек или язвочка маленького размера или уже начинает заживать, то для нормального исследования количества вируса может быть недостаточно. При проведении диагностики позднее, чем через 48 часов после появления симптомов, высока угроза ложноотрицательного результата. Посев вируса на культуре клеток бывает еще менее достоверным при диагностике во время рецидивов (положительные результаты получают лишь в 30% случаев повторных вспышек герпеса).

Введение к анализам крови

Анализы крови могут использоваться в случаях, когда человек не имеет видимых симптомов, но беспокоится о наличии у себя герпеса. Анализы крови выявляют не вирус непосредственно, а антитела к нему (иммунный ответ организма), которые могут находиться в крови.

Существует множество доступных анализов крови, но большинство из них не достаточно точны, поскольку не могут отличить антитела к ВПГ 1-го типа и ВПГ 2-го типа. Поэтому достаточно высока вероятность ложноположительного результата, особенно для ВПГ-2.

Когда человек контактирует с герпесом, его иммунная система реагирует на это, вырабатывая антитела для борьбы с вирусом: иммуноглобулины класса IgG и класса IgM. Анализы крови могут выявлять эти антитела, поскольку самого вируса в крови нет. IgG повышаются вскоре после инфицирования и остаются в крови на всю жизнь. IgM являются первыми иммуноглобулинами, которые возникают сразу после контакта с инфекцией, но через определенное время их уровень снижается.

Тесты на IgM не рекомендуются по трем основным причинам:

Многие полагают, что в случае выявления во время теста IgM, это будет говорить о том, что герпесом они заразились недавно. Тем не менее, исследование показывает, что IgM могут повышаться у трети тестируемых во время повторных вспышек герпеса, и одновременно отсутствовать у половины людей, которые недавно заразились герпесом, но выявили его во время посева вируса на культуре клеток. Таким образом, тесты на IgM могут давать ложные результаты, а также недостоверную информацию о том, как и когда человек заразился ВПГ. По этой причине мы не рекомендуем использовать анализы крови для определения сроков давности инфицирования. К сожалению, большинство людей с диагностированным герпесом не смогут выяснить, как давно они имеют эту инфекцию.

Кроме того, тесты на IgM не могут точно дифференцировать антитела к ВПГ-1 и ВПГ-2, что легко приводит к ложноположительным результатам по ВПГ-2. Это важно в свете того, что большинство взрослого населения США имеют антитела к ВПГ-1, который является основной причиной простуды на губах. Человек, имеющий антитела к ВПГ-1, может получить ложноположительный результат теста на ВПГ-2.

Точные анализы крови определяют антитела к иммуноглобулину IgG. В отличие от теста на IgM, этот тест может точно определить разницу между ВПГ-1 и ВПГ-2. Недавнее исследование подтверждает эту информацию: лаборатории, использовавшие для выявления герпеса тесты, не определяющие антитела к иммуноглобулину IgG, имели высокий процент ложноположительных результатов к антителам ВПГ-2 (от 14 до 88% тестов показывало, что проба крови была позитивной к ВПГ-2) в пробах, которые на самом деле были положительными только для антител к ВПГ-1. Однако все лаборатории, использующие тесты на иммуноглобулины класса G, в подобных случаях показывали, что пробы отрицательны к ВПГ-2.

Проблема в данном случае заключается в том, что время, необходимое для того, чтобы антитела к IgG достигли количества, при котором они могли бы быть обнаружены, отличается для каждого отдельного человека. У одного это займет несколько недель, а у другого – несколько месяцев. Поэтому, даже если тест оказался точным, человек может получить ложноотрицательный результат, если анализы были проведены вскоре после его контакта с вирусом. Для наиболее точных результатов рекомендуется подождать 12-16 недель с момента последнего возможного контакта с вирусом, прежде чем сдавать анализы для определения типа ВПГ, чтобы антитела к IgG достигли количества, при котором они могли бы быть обнаружены.

Точные анализы крови

На данный момент существует 4 анализа крови на основании IgG, одобренные Управлением по контролю над продуктами и лекарствами (США). Они могут точно определять наличие герпеса. Как любой другой анализ крови, эти тесты не могут определить, является ли инфекция оральной или генитальной. Тем не менее, поскольку в большинстве случаев генитальный герпес вызывается ВПГ-2, положительный результат на антитела к вирусу герпеса 2-го типа зачастую свидетельствует о генитальном герпесе.

Вы можете спросить об этих тестах у своего врача, указав их точное название. Точными анализами крови, определяющими тип вируса, являются:

Другие виды лабораторной диагностики

Тесты методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) являются очень чувствительными (то есть они хорошо определяют вирус, если он присутствует в пробе). В будущем тесты методом ПЦР должны заменить посев вируса на культуре клеток, но на данный момент последние анализы более распространены, а ПЦР тесты недоступны широкому потребителю из-за своей высокой цены.

Существуют и другие тесты на герпес, но они имеют серьезные ограничения. Некоторые из них, например, тесты на антигены к вирусу, хотя и являются достаточно точными, пока недоступны широкому потребителю, кроме того, их точность снижается, когда пузырьковые высыпания начинают заживать. Другие, например, проба Тцанка, требуют обязательного звонка в лабораторию для того, чтобы узнать результат анализа от врача или лаборанта.

Генитальный герпес (ГГ), возбудителем, которого является вирус простого герпеса (ВПГ) – одно из наиболее распространенных инфекционных заболеваний урогенитального тракта.

Негативное влияние ВПГ-инфекции на репродуктивные органы, как у женщин, так и у мужчин и, особенно, на мужскую фертильность, превращает эту проблему в серьезную макросоциальную задачу. По литературным данным вирусом простого герпеса инфицированы органы мочеполовой системы (МПС) у 40-60% взрослого населения. При ВПГ-инфекции гениталий поражаются кожа и слизистые оболочки половых органов (герпес наружных гениталий), а также органы малого таза (герпес внутренних гениталий).

Клинически герпес наружных гениталий может протекать в типичной, атипичной и субклинической формах.

Клинические формы ГИ органов малого таза (ОМТ) у мужчин целесооб¬разно разделить на:

1. герпес нижнего отдела урогенитального тракта, анальной области и ампулы прямой кишки и
2. герпес верхнего отдела полового тракта.

Еще недавно изучением ГГ традиционно занимались дерматовенерологи. Сегодня стало понятно, что эта проблема выходит за рамки дерматовенерологии и становится предметом обсуждения как гинекологов, так урологов и андрологов.

Герпетический простатит

В современной этиопатогенетической классификации простатитов вирусные простатиты расцениваются как инфекционные каналикулярные осложнения вирусных уретритов. В развитии вирусных простатитов чаще наблюдается уретрогенный путь передачи, а нисходящий (урогенный) путь встречается редко.

В клинической практике диагноз хронического герпетического простатита ставится урологами редко. Между тем, при абактериальных простатитах нельзя исключить, что патогенным агентом является именно вирус. По оценкам разных авторов, простатит вызывается или поддерживается ВПГ в 2,9 - 21,8% случаев (Weidner et al., 1981).

В клиническом течении хронических простатитов (ХП) отмечаются функциональные сдвиги, репродуктивные изменения, болевой (с иррадиацией в наружные половые органы, промежность, поясницу) и дизурический синдромы.

Обострению вирусного простатита обычно предшествует появление герпетических высыпаний в области гениталий. Появление везикулезно-эрозивных элементов на коже и слизистых оболочках может совпадать с появлением жалоб со стороны предстательной железы (ПЖ). Нередко у больных РГГ простатит протекает субклинически: у этих пациентов диагноз простатита ставится на основании появления лейкоцитоза в секрете простаты и уменьшения числа лецитиновых зерен.

Герпетический простатит может существовать, в виде изолированной формы ГИ. В этом случае рецидивы ГГ отсутствуют и, ВПГ не определяется в отделяемом уретры. Этиологический диагноз основывается на обнаружении ВПГ в секрете ПЖ, при этом, патогенная флора в секрете простаты и в третьей порции, мочи отсутствует.

При ультразвуковом исследовании предстательной железы в области парауретральных зон простаты определяются гиперэхогенные фиброзные очаги размером 3-9 мм. У больных с герпетическим простатитом по сравнению с абактериальными простатитами неясной этиологии отмечается большая выраженность фиброзных отделов в области периферических зон. Наряду с этим имеет место расширение семенных пузырьков, указывающие на нарушение их дренирования в заднюю уретру, что позволяет пред¬положить поражение простатической маточки (Т.Б.Семенова, В.Б. Стоянов 2001).

Вирусоспермия

До сих пор нет однозначного понимания всех причин патоспермии. Мужская репродуктивная система весьма чувствительна к повреждающему и модифицирующему действию самых разнообразных патогенных факторов, ведущих к нарушению процесса сперматогенеза.

Одним из факторов нарушения мужской фертильности и развития патоспермии являются инфекционно-воспалительные процессы различных отделов урогенитального тракта. Известно, что в сперме мужчин, наблюдающихся по поводу различных видов беспло¬дия, наряду с разнообразными патогенными бактерия¬ми выявляются герпесвирусы (ВПГ, ЦМВ, ВЭБ), вирус папилломы человека, вирус гепатита С, аденовирусы.

Если роль бактериальных микроорганизмов, включая ряд ИППП, в нарушении репродуктивной функции у мужчин считается доказанной, то до последнего времени оставалась невыясненной роль вирусов, в частности ВПГ, при мужской инфертильности. Основной вопрос состоит в том, является ли присутствие вируса в эякуляте результатом контаминации или имеет место истинное внутриклеточное инфицирование.

Целью настоящего исследования явились:

1. оценка влияния герпетической инфекции на репродуктивное здоровье мужчин,
2. изучение роли ВПГ как этиологического фактора в развитии рецидива хронического простатита.

1. Мужчины с первичным и вторичным идиопатическим бесплодием.
2. Мужчины, чьи жены наблюдались у гинекологов, в связи с различными формами патологии беременности (синдромом потери плода, смертью плода и новорожденного, при аутопсии, ко¬торых определялась внутриутробная ВПГ-инфекция).
3. Мужчины с хроническим простатитом и РГГ.

Для обследования пациентов был использован новый метод электронно-микроскопического исследования спермы (ЭМИС), разработанный научным коллективом авторов МГУ под руководством д.б.н. Е.Е.Брагиной. Внедрение ЭМИС в практику позволило существенно расширить границы понимания причин идиопатического бесплодия. С помощью ЭМИС стало возможным выявление нарушений в сперматозоидах, которые ранее при светооптической микроскопии были не доступны: удалось установить аномалии центриоли, хроматина, обнаружить внутриклеточную вирусную инфекцию. Было проведено электронно-микроскопическое исследование эякулята 391 пациента с нарушениями фертильности. В каждом образце эякулята производили подсчет сперматозоидов, содержащих внутриклеточные капсиды ВПГ, общее количество исследованных сперматозоидов – не менее 100. В образцах эякулята 161 пациента (41%) были выявлены сперматозоиды, содержащие капсиды ВПГ. Количество ВПГ-содержащих сперматозоидов составляло от 2 до 20% от общего количества (Брагина Е.Е. с соавт., 2000; Бочарова Е.Н. с соавт., 2003).

Исследования показали, что ВПГ присутствует не только в семенной жидкости или на поверхности клеток, но и внутри самих сперматозоидов. Серьезного внимания заслуживает тот факт, что внутриклеточное инфицирование ВПГ было выявлено во фракции подвижных сперматозоидов с нормальной морфологией. Это позволяет сделать предположение о возможности оплодотворения яйцеклеток инфицированными сперматозоидами, что, в случаях зачатия, может с большой вероятностью привести к осложнениям беременности, развитию патология плода и новорожденного.

Для оценки состояния репро¬дуктивной системы группа мужчин (70 человек в возрасте от 26 до 38 лет) прошла в Герпетическом центре стандартное клинико-лабораторное обследование: диагностика и, при необходимости, лечение ИППП, иссле-дование эякулята, обследование простаты и добавочных половых желез, исследование им¬мунного, а, при необходимости, гормонального статуса. Всем мужчинам было проведено углубленное вирусологическое обследование органов МПС с использованием методов культуральной (посев) и ПЦР диагностики, а также электронно-микроскопического исследования спермы (ЭМИС). Для исключения возможной контаминации вирусов из мочевого пузыря или уретры последовательно забирали материал сначала из уретры, затем исследовали секрет простаты, мочу и эякулят. За рамками исследования остались микст-инфекции – вирусно-вирусные и вирусно-бактериальные ассоциации.

В ходе исследования были поставлены следующие задачи:

1. Изучить роль ВПГ в этиологии хронического простатита у мужчин с рецидивирующим герпесом гениталий (РГГ) – 1 группа (18 чел.)
2. Проанализировать частоту выделения ВПГ в эякуляте и секрете простаты у мужчин с субклинической и бессимптомной формами ГГ, поступивших на обследование по поводу бесплодного брака – 2 группа (52 чел.)

Приведенный материал свидетельствует о необходимости целенаправленного вирусологического обследования мужчин, в семьях, где планируется беременность. Мы убеждены, что бессимптомные формы ВПГ-инфекции органов МПС встречаются значительно чаще, чем принято считать.

Лечение вирусоспермии

Учитывая пожизненное носительство ВПГ в организме человека, основной целью терапии ГИ является достижение стойкой ремиссии, результатом которой, в рассматриваемых нами случаях, будет наступление беременности (в проблемных по ВПГ-инфекции супружеских парах) и физиологическое ее завершение.

Нарушение репродуктивной функции мужчин является актуальной проблемой в современном обществе и, по данным различных клиник, составляет 15-45% среди обратившихся пар. Причины, влияющие на состояние мужской репродуктивной системы весьма разнообразны, однако большое значение имеют различные инфекции, как вирусные, так и бактериальные.

При уточнении этиологии мужского бесплодия, считается, что ранее перенесенные бактериальные инфекции чаще всего приводят к обтурационной аспермии, возникающей вследствие обструкции семявыносящих путей. К таким осложнениям приводят острая гонорея, хламидийная инфекция, длительно протекающие микст-инфекции в виде различных сочетаний микоплазм, уреаплазм, трихомонад, листерий, стафилококков, кишечной палочки и др. Однако при микст-инфекции роль инфекционного фактора отходит на второй план, а ведущими являются тканевые пролиферативные реакции, нейроэндокринные реакции, аутоиммунный компонент.

Кроме того, необходимо помнить о проблеме гипердиагностики бактериальных инфекций мужской половой сферы. Определить роль инфекционного фактора в структуре причин бесплодия достаточно сложно, т.к. мало статистических данных, они не всегда корректны, не каждый мужчина идет обследоваться по поводу нарушения фертильности, а результаты разных лабораторий часто несопоставимы. [1]

Сами по себе урогенитальные инфекции практически не нарушают морфогенез, однако оказывают влияние на подвижность сперматозоидов и ведут к изменению физико-химических параметров семенной плазмы, в частности ее кислотности и вязкости, в связи с наличием окислительного стресса и увеличением провоспалительных интерлейкинов [1, 7] Так же следует учитывать, что если изначальное качество эякулята было хорошим, то преходящие изменения состава и свойств семенной жидкости не оказывают, как правило, значимого влияния на фертильность.

Так как многие исследователи публикуют противоречивые данные о влиянии бактериальной инфекции, в частности, хронического бактериального простатита (ХБП) на различные параметры эякулята, группа китайских авторов провела мета-анализ с Medline, PubMed, EMBASE и двух китайских баз данных (CNKI и ВАН Fang) для выявления соответствующих исследований. Было показано, что жизнеспособность сперматозоидов, общая подвижность, а также процент сперматозоидов с прогрессивным движением у пациентов ХБП значительно ниже, чем в контрольных группах. Тем не менее, ХБП не оказал существенного влияния на объем спермы, концентрацию сперматозоидов и продолжительность разжижения семенной жидкости [13].

Роль вирусов и, особенно, вирусов семейства герпеса в развитии бесплодия как у женщин, так и у мужчин велика и часто этиологическим фактором является вирус простого герпеса (ВПГ). Широкая распространенность герпесвирусной (ГВ) инфекции общеизвестна, а наличие ее у человека принимает разнообразные формы от бессимптомного носительства до выраженных клинических проявлений.

Однако некоторые авторы считают не совсем доказанным влияние различных инфекций, передаваемых половым путем, в том числе, ВПГ на развитие бесплодия, хотя не отрицают ухудшение качества спермы при хронических инфекциях, как вирусных, так и бактериальных [8, 9]. Тем не менее, большинство ученых рассматривают вирусные инфекции как прямую и/или косвенную причину мужского фактора бесплодия. Кроме того, инфицирование половых клеток предполагает возможность вертикальной передачи вируса при оплодотворении яйцеклетки пораженной гаметой, что может стать причиной самопроизвольного аборта или внутриутробной инфекции плода [5].

По данным, Amirjannati N., распространенность ВПГ в эякуляте мужчин, с нарушением фертильности и не имеющих клинических проявлений вирусной инфекции, составляет 12% при диагностике методом ПЦР. Как правило, других причин, объясняющих бесплодие, нет. При серологическом обследовании этих же пациентов (исследователи выявляли IgM к ВПГ) получено всего лишь 3,2% положительных проб [6]. В исследовании Monavari S.H. у пациентов с бесплодием и бессимптомным течением герпесвирусной инфекции выявление в эякуляте ДНК ВПГ-1 составило 22,9%, а ВПГ-2 – 14,3%. У обследованных ВПГ инфекция не была связана с подвижность и наличием морфологических дефектов сперматозоидов, но коррелировала с более низким количеством сперматозоидов в семенной жидкости. [10]

Частота выявления ДНК ВПГ в эякуляте у мужчин с нарушением фертильности в разных странах следующая 3,2-3,7% в Германии, в Китае – 4,8%, в Греции – 2,1-49,5%, 24% в Японии [4].

По данным российских исследователей, у мужчин с первичным бесплодием в браке по сравнению с практически здоровыми ВПГ достоверно чаще встречается как в цельном эякуляте (31% против 17%; p = 0,049), так и во фракции активно-подвижных сперматозоидов (30% против 8%; p = 0,016). Показано, что обнаружение ВПГ в эякуляте прямо коррелирует со снижением количества активно-подвижных сперматозоидов (p = 0,0001) и уменьшением доли морфологически нормальных форм половых клеток (p = 0,002).

Частота выявления вирусов герпеса имеет большой разброс, что, соответственно, связано с чувствительностью и специфичностью метода детекции, тем не менее, максимальные и минимальные значения совпадают. Есть данные о сезонности выявления ГВ в эякуляте, с преобладанием в зимнее время с декабря по февраль, соответственно для ВПГ 34% против 24,5% (р=0,019) в остальные месяцы. Эти данные имеют большое клиническое значение для профилактики горизонтальной и вертикальной передачи ВПГ при планировании беременности. [4, 5]

Читайте также:

  
• Посадили 3 ряда смородины по 8 кустов в каждом сколько всего кустов
  
• Такси посадка 50 рублей
  
• Размножение дерена с помощью деления куста
  
• Интенсивное озеленение крыш это
  
• Оборудование площадки для посадки вертолета