Посев на среду чапека

Обновлено: 05.10.2024

Настоящий стандарт распространяется на технические изделия (далее - изделия) исполнений Т, ТВ, ТМ, ОМ, О, В всех категорий размещения, кроме категории 4.1 по ГОСТ 15150, и устанавливает четыре метода лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов (далее - грибостойкость).

2 - влияние на грибостойкость внешних загрязнений в процессе сборки и (или) эксплуатации, и (или) хранения изделий;

Методы применяют для изделий, к которым в стандартах или технических условиях предъявляют требования по грибостойкости.

Допускается не проводить испытание, если материалы и технологические процессы изготовления изделий, производимых одним предприятием, не отличаются от испытанных ранее изделий или изделия предназначены для размещения в герметичных корпусах или оболочках.

Метод испытания, критерии оценки грибостойкости изделий устанавливают в стандартах или технических условиях на изделия и (или) в программе испытаний (далее - НТД).

Испытательное оборудование, применяемое при испытаниях, должно быть аттестовано по ГОСТ 24555. Средства измерений испытательных режимов должны быть проверены в соответствии с действующими стандартами.

1. МЕТОД 1

1.1. Сущность метода заключается в том, что образцы, очищенные от внешних загрязнений, заражают водной суспензией спор грибов и выдерживают в условиях, оптимальных для их развития, в течение 28 сут.

ЧАПЕКА СРЕДА, бульон (агар) Чапека, жидкая или твердая синтетическая питательная среда, использующаяся для культивирования плесневых грибов в лабораториях. Разработана чешский ботаником Фридрихом Чапеком в 1902 году для выращивания Aspergillus niger и Penicillium camemberti. Также хорошо подходит для культивирования многих сапрофитных грибов и почвенных бактерий, таких как Aspergillus, Candida, Penicillium и Paecilomyces.

Оригинальный рецепт среды Чапека включает:

1000 г дистиллированной воды;
30 г тростникового сахара;
1 г дигидроортофосфата калия KH₂PO₄;
0,5 г сульфата магния MgSO₄;
0,5 г хлорида калия KCl;
0,01 г сульфата железа FeSO₄;

В 1909 году американский биохимик Артур Уэйланд Докс предложил добавить в среду Чапека 2 г нитрата натрия NaNO₃, чтобы дать культивируемым организмам источник неорганического азота. Но ни Чапек, ни Докс не использовали в своих средах агар, который стали добавлять впоследствии, для получения твердой среды.

Рост Aspergillus tubingensis на среде Чапека

См. также:

Плесневые грибы

ПЛЕСНЕВЫЕ ГРИБЫ, микроскопические грибы, образующие характерные налёты (плесени) на поверхности органических субстратов (пищевые продукты, бумага, кожа, текстиль и др.). Принадлежат к различным систематическим группам: зигомицетам (мукор), несовершенным грибам (аспергилл, пеницилл, триходерма и др.) .

АГАР, агар-агар, полисахаридный препарат, получаемый из некоторых красных морских водорослей. Состоит из агарозы, линейные молекулы которой построены из чередующихся остатков D- и L-галактозы, и агаропектина, в котором остатки галактозы частично этерифицированы серной кислотой.

Культура микроорганизмов

КУЛЬТУРА МИКРООРГАНИЗМОВ, популяция микроорганизмов на питательной среде, находящаяся в состоянии размножения или закончившая его. Чистая культура состоит из микроорганизмов одного вида, смешанная (первична выделенная из природных источников — почвы, воздуха, воды и др.) — из нескольких.

Эта среда является полусинтетической средой с нитратом натрия в качестве единственного источника азота. Ее используют для культивирования грибов.

Состав**:

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 49,0 г порошка М075 или 35,0 г порошка М076 в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин.

Принцип и оценка результата:

Эта среда готовится по прописи, разработанной Thom и Church (1). Она является полусинтетической средой с нитратом натрия в качестве единственного источника азота. Это одна из наиболее широко распространенных сред общего назначения для культивирования грибов. Ее можно использовать также для определения хламидоспор у грибов Candida albicans. Благодаря присутствию солей, она хорошо забуферена, рН имеет слабощелочное значение. На этом агаре обильно растут почти все сапрофитные аспергиллы, образуя характерный мицелий и конидии (2).

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий кремово-белый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю (М075).

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет светло-желтую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в пробирках или чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водные растворы М075 (4,9% вес/об) или М076 (3,5% вес/об) имеют рН 7,3 ± 0,2.

При составлении питательных сред для микроорганизмов необходимо учитывать их потребность в элементах питания. По составу питательные среды подразделяются на две группы: естественные (натуральные) и синтетические.

Естественными обычно называют среды, которые состоят из продуктов животного или растительного происхождения, имеющих сложный неопределенный химический состав.

На естественных средах хорошо развиваются многие микроорганизмы, так как в этих средах имеются, обычно, все компоненты, необходимые для роста и развития. Однако среды с неопределенным составом малопригодны для изучения физиологии обмена веществ микроорганизмов, поскольку они не позволяют учесть потребление ряда компонентов среды, а с другой стороны, выяснить, какие вещества образуются по ходу развития микроорганизмов. Это связано с тем, что состав естественных сред очень сложен; кроме того, он не является постоянным, так как существенно колеблется в зависимости от сырья и способа приготовления сред. Это заметно влияет на рост микроорганизмов. Естественные среды неопределенного состава используются главным образом для поддержания культур микроорганизмов, накопления их биомассы и для диагностических целей.

Для грибов, наиболее широко используют полноценные среды, приготовленные на основе солодового сусла. В состав сусла входят глюкоза, фруктоза, сахароза, мальтоза, мальтотриоза, небольшое количество пентоз – арабиноза, ксилоза, рибоза. Эти вещества и являются основными источниками углерода и энергии для грибов. В сусле имеются также аминокислоты, витамины и минеральные вещества. Для культивирования грибов в питательных средах обычно устанавливают рН 5–6, поскольку грибы в большинстве своем являются ацидофильными микроорганизмами.

Синтетические среды − это такие среды, в состав которых входят только определенные, химически чистые соединения, взятые в точно указанных концентрациях. Синтетические среды следует готовить на дистиллированной воде. Для разработки синтетических сред, обеспечивающих нормальный рост изучаемого микроорганизма или максимальный биосинтез какого-либо продукта его жизнедеятельности, необходимо знать особенности обмена веществ данного организма и его потребности в источниках питания. В настоящее время в распоряжении микробиологов имеется достаточное количество синтетических сред, не уступающих по своим качествам сложным средам неизвестного состава. Синтетические среды могут иметь относительно большой набор компонентов, но могут быть и довольно простыми по составу. Синтетические среды наиболее удобны для исследования обмена веществ микроорганизмов. Зная точный состав и количество входящих в среду компонентов, можно изучить их потребление и превращение в соответствующие продукты обмена.

Для курсового проекта были использованы следующие питательные среды:

- сусло-агар (СА). Поскольку основой служит сусло-бульон с кислой среды, для получения плотных агаризованных сред берут небольшой избыток агар-агар в расчете на то, что в процессе стерилизации часть его подвергнется температурно-кислотному гидролизу. Во флаконы с сусло-бульоном вносят агар-агар до концентрации 2–2,5% для плотной среды и 1,0-1,5% для полужидкой. Стерилизуют при 0,5 ати 30 мин.

- питательный агар для грибов (агар Чапека)

Для приготовления агара Чапека берут 20−30 г агар-агара, заливают его 1000 мл дистиллированной воды и вымачивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Воду сливают и измеряют ее объем для определения количества воды, впитавшейся агаром. Затем агар промывают 2−3 раза дистиллированной водой.

Взвешивают остальные компоненты среды (сахароза − 30,0 г, азотнокислый натрий −3,0 г, фосфорнокислый однозамещенный калий −1,0 г, сернокислый магний − 0,5 г, хлористый калий − 0,5 г, сернокислое закисное железо−0,01 г) и растворяют в дистиллированной воде, которую берут в объеме, равном количеству воды, слитой при вымачивании агара. К раствору добавляют отмытый агар, после чего среду варят в автоклаве текучим паром в течение часа.

Полученную среду фильтруют, разливают по пробиркам или колбам и стерилизуют в автоклаве при температуре 110−112°С (под давлением 0,05 МПа по показанию манометра) в течение 20 мин.

Для ее приготовлении к 100 см 3 дистиллированной воды добавляют 1,8 г агара и оставляют на 30 мин для его набухания, затем добавляют 4 г мальтозы или глюкозы и 1 г пептона, нагревают до полного растворения (при наличии осадка фильтруют). Стерилизуют среду при температуре 115 0 С в течение 15 минут.

Для повышения селективности, т.е. подавления развития посторонних микроорганизмов, в среду Сабуро добавляют растворы антибиотиков – пенициллина (50 ЕД/см 3 ), левомицетина (10 мкг/см 3 ). [6]

Кроме того, в курсовом проекте был использован физиологический раствор (ФР). Для его приготовления 8,5 г хлористого натрия растворяют в 1 л дистиллированной воды. Стерилизуют при 0,15 МПа в течение 20 минут [19].

Читайте также: