Посев на вирусные инфекции
Обновлено: 26.08.2024
— Владислав Александрович, расскажите, бакпосев – что это за анализ? Когда его назначают и для чего он нужен?
— Бактериологический посев представляет собой исследование биологического материала, помещённого в особую питательную среду, подходящую для роста бактерий. Данный анализ назначается при подозрении на бактериальную инфекцию и в целях профилактики. Он помогает очень точно выявить типы бактерий (возбудителей многих инфекций), и, кроме того, определить их чувствительность к антибиотикам. Это немаловажно с точки зрения назначения правильного и действенного лечения.
Анализ на бакпосев применяется в гинекологии, урологии, онкологии, хирургии. Его также используют дерматологи, гастроэнтерологи, оториноларингологи и другие специалисты.
— Какой материал может использоваться для бакпосева?
— Это может быть любая биологическая жидкость и выделения, патологическое отделяемое и т. п., а также ткань практически с любого участка человеческого организма. Например:
- слизистая из горла и носа;
- слизистая глаз;
- мазок из уретры;
- мазок из цервикального канала;
- содержимое уха;
- суставная жидкость;
- плевральная жидкость;
- секрет простаты;
- желчь;
- кал;
- моча;
- гной;
- кровь;
- грудное молоко;
- содержимое кист, воспалительных очагов, отделяемое раны и др.
— Что показывает анализ на бакпосев?
— Как я уже говорил, бакпосев – максимально точный способ распознавания инфекций, вызываемых болезнетворными бактериями и грибками. Его цель – установить, какие микроорганизмы находятся в исследуемом материале. При проведении анализа можно обнаружить, например, кишечную палочку, трихомонады, хламидии, стафилококк, стрептококк, пневмококк, сальмонеллы, различные грибки и проч.
— Как правильно сдавать анализ на бакпосев? Нужна ли какая-то особая подготовка? И если да, какие есть особенности, отличия в подготовке в зависимости от того, какой материал сдаётся для исследования?
— Для получения достоверного результата по согласованию с лечащим врачом за 7 дней до взятия материала прекращают приём антибиотиков или антибактериальных препаратов. Если проводится местное лечение, также прекращают медикаментозную обработку очага поражения.
Перед сдачей некоторых анализов необходимо соблюдать определённые инструкции. Если ими пренебрегать, это может привести к получению сомнительных данных, и анализ придётся проводить повторно. В зависимости от того, какой биологический материал берётся для анализа, лечащий врач, назначая исследование, расскажет пациенту, как к нему подготовиться.
Возьмём, к примеру, анализ на бакпосев мочи. Как его правильно сдавать? Забор мочи нужно производить в специально предназначенную для этого стерильную одноразовую ёмкость, которую можно приобрести в любой аптеке. Нельзя сдавать мочу в нестерильные, бывшие ранее в употреблении ёмкости. Наиболее достоверно исследование средней утренней порции мочи – после ночного сна и до завтрака.
Мазок на бакпосев из цервикального канала также нужно сдавать, соблюдая конкретные правила. За несколько дней до назначенной процедуры нельзя применять вагинальные свечи, контрацептивные средства, спринцевания. Необходимо также воздержаться от сексуальных контактов за сутки до исследования. Анализ нужно сдавать приблизительно через 7 дней после прекращения менструации.
— Сколько дней нужно для получения результатов анализа?
— От 5 до 13 рабочих дней, в зависимости от того, на какой микроорганизм был взят материал для исследования.
— Как прочитать полученный результат бакпосева?
— По итогам исследования лаборатория выдаёт заключение. В нём указывается, какие микроорганизмы были обнаружены, их численность, а также чувствительность каждого из них к медикаментам. В любом случае, точно прочитать полученный результат и сделать по нему назначение может только специалист.
— Помимо бакпосева есть и другие методы, которые позволяют обнаруживать микроорганизмы – например ПЦР. Не могут ли они полностью заменить бакпосев?
Хотите узнать больше о лабораторных анализах? Читайте статьи в нашей рубрике
Беседовала Марина Воловик
Редакция рекомендует:
Для справки
Чередниченко Владислав Александрович
Другие статьи по теме
Что такое С-реактивный белок? О чём может рассказать врачу результат анализа на. Анализ на С-реактивный белок: для чего он нужен?
Несмотря на множество теорий развития злокачественных опухолей специалисты и сегодня нередко затрудняются. BRCA1 и BRCA2: что делать, если обнаружена мутация в этих генах?
Метод определения Полимеразная цепная реакция с детекцией в режиме реального времени (Real-time PCR).
Определение РНК/ДНК возбудителей острых респираторных вирусных инфекций в соскобе эпителиальных клеток ротоглотки и носоглотки методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени.
Острую респираторную вирусную инфекцию (ОРВИ), помимо вируса гриппа, чаще вызывают представители трех семейств РНК-содержащих вирусов: парамиксовирусы (респираторно-синцитиальный вирус, метапневмовирус человека, вирусы парагриппа 1-4), коронавирусы и пикорнавирусы (риновирусы) и двух семейств ДНК-содержащих вирусов: аденовирусы (виды B, C, E), парвовирусы (бокавирус человека).
Респираторно-синцитиальный вирус (РС-вирус) является основным возбудителем бронхиолитов и пневмоний у младенцев и детей младшего возраста во всем мире. В группу риска тяжелого течения PC-вирусной инфекции входят недоношенные младенцы, дети до двух лет, дети и взрослые с ослабленной вследствие заболеваний или лечения иммунной системой, пожилые люди (старше 65 лет).
Основными заболеваниями, развивающимися при инфицировании метапневмовирусами у детей, являются бронхиолиты, пневмония и бронхиальная астма. Вирусы парагриппа часто обнаруживаются у детей младшего возраста. Ко второму году жизни каждый ребенок хотя бы один раз переболевает ОРВИ, вызванной вирусами парагриппа. Вирусы парагриппа 2-го и 4-го типов чаще обнаруживают у детей первого года жизни, по сравнению с другими возрастными группами, где превалируют вирусы парагриппа 1-го и 3-го типов.
Аденовирусы подразделяют на семь видов: A, B, C, D, E, F, G. Аденовирусная инфекция вызывает острые заболевания, протекающие с умеренно выраженным интоксикационным синдромом и симптоматикой, зависящей от вида вируса: с поражением слизистых оболочек верхних дыхательных путей, лимфоидной ткани, глаз или кишечника. Известны случаи бессимптомного носительства аденовирусов, служащих источником возбудителя, в лимфоидной ткани верхних дыхательных путей на протяжении нескольких месяцев и лет.
У человека острую респираторную инфекцию вызывают четыре вида коронавирусов: 229E, OC43, NL63, HKUI. Заболевание чаще протекает с поражением верхних дыхательных путей легкой или средней степени тяжести, в редких случаях – с поражением нижних дыхательных путей. Кишечная разновидность инфекции встречается гораздо реже, в основном у детей. ОРВИ, вызванная коронавирусами, обычно длится в течение нескольких дней и заканчивается полным выздоровлением. Однако в ряде случаев заболевание может протекать в форме атипичной пневмонии или тяжелого острого респираторного синдрома (ТОРС). Эта патология характеризуется высокой летальностью, поскольку сопровождается острой дыхательной недостаточностью.
Самым распространенным возбудителем ОРВИ среди взрослого населения и детей всех возрастных групп являются риновирусы, вызывающие воспаление слизистой оболочки верхних дыхательных путей. Инфекция проявляется насморком и кашлем, нередко осложняется трахеитом.
В 2005 г. был описан бокавирус человека. Бокавирус обычно обнаруживается у младенцев и детей, нередко в сочетании с другими возбудителями ОРВИ. Бокавирусная инфекция проявляется лихорадкой, кашлем, насморком и диареей. У взрослых при тесном контакте с больными детьми бокавирус может вызывать легкие симптомы острого респираторного заболевания (ОРЗ), в редких случаях вирус обнаруживается при пневмонии, возникшей на фоне иммунодефицита.
Метод ПЦР обладает большей диагностической чувствительностью и специфичностью, по сравнению с другими методами выявления возбудителей ОРВИ (например, с иммунохроматографией и иммунофлуоресценцией).
определяемый фрагмент – специфический участок нуклеиновых кислот возбудителей острых респираторных вирусных инфекций человека (ОРВИ): РНК респираторно-синцитиального вируса (human Respiratory Syncytial virus, hRSv), метапневмовируса (human Metapneumovirus, hMpv), вирусов парагриппа 1, 2, 3 и 4-го типов (human Parainfluenza virus 1-4, hPiv), коронавирусов (human Coronavirus, hCov), риновирусов (human Rhinovirus, hRv), ДНК аденовирусов групп B, C и E (human Adenovirus B, C, E, hAdv) и бокавируса (human Bocavirus, hBov);
специфичность обнаружения – отсутствие неспецифических реакций в отношении других вирусных и бактериальных возбудителей ОРЗ.
Диагностика инфекционных заболеваний является одной из самых сложных проблем в клинической медицине. Лабораторные методы исследования при ряде нозологических форм играют ведущую, а в целом ряде клинических ситуаций решающую роль не только в диагностике, но и в определении конечного исхода заболевания.
Диагностика инфекционных заболеваний почти всегда предусматривает использование комплекса лабораторных методов.
- бактериологические;
- серологические;
- метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для обнаружения ДНК или РНК возбудителя инфекционного заболевания в исследуемом материале.
У одних пациентов для диагностики этиологии инфекционно-воспалительного процесса достаточно провести бактериологическое исследование, в других клинических ситуациях решающее значение имеют данные серологических исследований, в третьих, предоставить полезную информацию может только метод ПЦР. Однако наиболее часто в клинической практике врачу-клиницисту необходимо использовать данные различных методов лабораторных исследований.
Бактериологические методы исследования
Бактериологические исследования наиболее часто проводят при подозрении на гнойно-воспалительные заболевания (составляют 40-60% в структуре хирургических заболеваний) с целью их диагностики, изучения этиологической структуры, определения чувствительности возбудителей к антибактериальным препаратам. Результаты бактериологических анализов способствуют выбору наиболее эффективного препарата для антибактериальной терапии, своевременному проведению мероприятий для профилактики внутрибольничных инфекций.
Возбудителями гнойно-воспалительных заболеваний являются истинно-патогенные бактерии, но наиболее часто условно-патогенные микроорганизмы, входящие в состав естественной микрофлоры человека или попадающие в организм извне. Истинно-патогенные бактерии в большинстве случаев способствуют развитию инфекционного заболевания у любого здорового человека. Условно-патогенные микроорганизмы вызывают заболевания преимущественно у людей с нарушенным иммунитетом.
Бактериологические исследования при заболеваниях, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами, направлены на выделение всех микроорганизмов, находящихся в патологическом материале, что существенно отличает их от аналогичных исследований при заболеваниях, вызванных истинно патогенными микроорганизмами, когда проводится поиск определенного возбудителя.
Для получения адекватных результатов бактериологического исследования при гнойно-воспалительных заболеваниях особенно важно соблюдать ряд требований при взятии биоматериала для анализа, его транспортировки в лабораторию, проведения исследования и оценки его результатов.
- микроскопическое исследование мазка (бактериоскопия) из доставленного биоматериала;
- выращивание культуры микроорганизмов (культивирование);
- идентификацию бактерий;
- определение чувствительности к антимикробным препаратам и оценку результатов исследования.
Доставленный в бактериологическую лабораторию биоматериал первоначально подвергается микроскопическому исследованию.
Микроскопическое исследование мазка (бактериоскопия), окрашенного по Граму или другими красителями, проводят при исследовании мокроты, гноя, отделяемого из ран, слизистых оболочек (мазок из цервикального канала, зева, носа, глаза). Результаты микроскопии позволяют ориентировочно судить о характере микрофлоры, ее количественном содержании и соотношении различных видов микроорганизмов в биологическом материале, а также дают предварительную информации об обнаружении этиологически значимого инфекционного агента в данном биоматериале, что позволяет врачу сразу начать лечение (эмпирическое). Иногда микроскопия позволяет выявить микроорганизмы, плохо растущие на питательных средах. На основании данных микроскопии проводят выбор питательных сред для выращивания микробов, обнаруженных в мазке.
Культивирование микроорганизмов. Посев исследуемого биоматериала на питательные среды производят с целью выделения чистых культур микроорганизмов, установления их вида и определения чувствительности к антибактериальным препаратам. Для этих целей используют различные питательные среды, позволяющие выделить наибольшее количество видов микроорганизмов. Оптимальными являются питательные среды, содержащие кровь животного или человека, а также сахарный бульон, среды для анаэробов. Одновременно производят посев на дифференциально-диагностические и селективные (предназначенные для определенного вида микроорганизмов) среды. Посев осуществляют на стерильные чашки Петри, в которые предварительно заливают питательную среду для роста микроорганизмов.
Микроскопия мазков, окрашенных по Граму
1 - стрептококки; 2 - стафилококки; 3 - диплобактерии Фридленда; 4 - пневмококки
Колонии отсевают на плотные, жидкие, полужидкие питательные среды, оптимальные для культивирования определенного вида бактерий.
Выделенные чистые культуры микроорганизмов подвергают дальнейшему изучению в диагностических тестах, основанных на морфологических, ферментативных, биологических свойствах и антигенных особенностях, характеризующих бактерий соответствующего вида или варианта.
Определение чувствительности к антибактериальным препаратам. Чувствительность к антимикробным препаратам изучают у выделенных чистых культур микроорганизмов, имеющих этиологическое значение для данного заболевания. Поэтому в направлении на бактериологические анализы требуется указать диагноз заболевания у больного. Определение чувствительности бактерий к спектру антибиотиков помогает лечащему врачу правильно выбрать препарат для лечения больного.
Оценка результатов исследования. Принадлежность условно-патогенных микроорганизмов к естественной микрофлоре организма человека создает ряд трудностей при оценке их этиологической роли в развитии гнойно-воспалительных заболеваний. Условно-патогенные микроорганизмы могут представлять нормальную микрофлору исследуемых жидкостей и тканей или контаминировать их из окружающей среды. Поэтому для правильной оценки результатов бактериологических исследований необходимо знать состав естественной микрофлоры изучаемого образца. В тех случаях, когда исследуемый биоматериал в норме стерилен, как, например, спинномозговая жидкость, экссудаты, все выделенные из него микроорганизмы могут считаться возбудителями заболевания. В тех случаях, когда исследуемый материал имеет собственную микрофлору, как, например, отделяемое влагалища, кал, мокрота, нужно учитывать изменения ее качественного и количественного состава, появление несвойственных ему видов бактерий, количественную обсемененность биоматериала. Так, например, при бактериологическом исследовании мочи степень бактериурии (число бактерий в 1 мл мочи), равная и выше 10 5 , свидетельствует об инфекции мочевых путей. Более низкая степень бактериурии встречается у здоровых людей и является следствием загрязнения мочи естественной микрофлорой мочевых путей.
Установить этиологическую роль условно-патогенной микрофлоры помогают также нарастание количества и повторность выделения бактерий одного вида от больного в процессе заболевания.
Врач-клиницист должен знать, что положительный результат бактериологического исследования в отношении биологического материала, полученного из в норме стерильного очага (кровь, плевральная жидкость, спинномозговая жидкость, пунктат органа или ткани), всегда тревожный результат, требующий немедленных действий по оказанию медицинской помощи.
Серологические методы исследования
В основе всех серологических реакций лежит взаимодействие антигена и антитела. Серологические реакции используются в двух направлениях.
2. Установление родовой и видовой принадлежности микроба или вируса. В этом случае неизвестным компонентом реакции является антиген. Такое исследование требует постановки реакции с заведомо известными иммунными сыворотками.
Серологические исследования не обладают 100%-й чувствительностью и специфичностью в отношении диагностики инфекционных заболеваний, могут давать перекрестные реакции с антителами, направленными к антигенам других возбудителей. В связи с этим оценивать результаты серологических исследований необходимо с большой осторожностью и учетом клинической картины заболевания. Именно этим обусловлено использование для диагностики одной инфекции множества тестов, а также применение метода Western-blot для подтверждения результатов скрининговых методов.
В последние годы прогресс в области серологических исследований связан с разработкой тест-систем для определения авидности специфических антител к возбудителям различных инфекционных заболеваний.
Авидность - характеристика прочности связи специфических антител с соответствующими антигенами. В ходе иммунного ответа организма на проникновение инфекционного агента стимулированный клон лимфоцитов начинает вырабатывать сначала специфические IgM-антитела, а несколько позже и специфические IgG-антитела. IgG-антитела обладают поначалу низкой авидностью, то есть достаточно слабо связывают антиген.
Затем развитие иммунного процесса постепенно (это могут быть недели или месяцы) идет в сторону синтеза лимфоцитами высокоспецифичных (высокоавидных) IgG-антител, более прочно связывающихся с соответствующими антигенами. На основании этих закономерностей иммунного ответа организма в настоящее время разработаны тест-системы для определения авидности специфических IgG-антител при различных инфекционных заболеваниях.
Высокая авидность специфических IgG-антител позволяет исключить недавнее первичное инфицирование и тем самым с помощью серологических методов установить период инфицирования пациента. В клинической практике наиболее широкое распространение нашло определение авидности антител класса IgG при токсоплазмозе и цитомегаловирусной инфекции, что дает дополнительную информацию, полезную в диагностическом и прогностическом плане при подозрении на эти инфекции, в особенности при беременности или планировании беременности.
Метод полимеразной цепной реакции
Полимеразная цепная реакция (ПЦР), являющаяся одним из методов ДНК-диагностики, позволяет увеличить число копий детектируемого участка генома (ДНК) бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы. Тестируемый специфический для данного генома отрезок нуклеиновой кислоты многократно умножается (амплифицируется), что позволяет его идентифицировать.
Сначала молекула ДНК бактерий или вирусов нагреванием разделяется на 2 цепи, затем в присутствии синтезированных ДНК-праймеров (последовательность нуклеотидов специфична для определяемого генома) происходит связывание их с комплементарными участками ДНК, синтезируется вторая цепь нуклеиновой кислоты вслед за каждым праймером в присутствии термостабильной ДНК-полимеразы. Получается две молекулы ДНК. Процесс многократно повторяется. Для диагностики достаточно одной молекулы ДНК, то есть одной бактерии или вирусной частицы.
Введение в реакцию дополнительного этапа - синтеза ДНК на молекуле РНК при помощи фермента обратной транскриптазы - позволило тестировать РНК-вирусы, например, вирус гепатита С. ПЦР - это трехступенчатый процесс, повторяющийся циклично: денатурация, отжиг праймеров, синтез ДНК (полимеризация). Синтезированное количество ДНК идентифицируют методом иммуноферментного анализа или электрофореза.
В ПЦР может быть использован различный биологический материал - сыворотка или плазма крови, соскоб из уретры, биоптат, плевральная или спинномозговая жидкость и т.д. В первую очередь ЦПР применяют для диагностики инфекционных болезней, таких как вирусные гепатиты В, С, D, цитомегаловирусная инфекция, инфекционные заболевания, передающиеся половым путем (гонорея, хламидийная, микоплазменная, уреаплазменная инфекции), туберкулез, ВИЧ-инфекция и т.д.
Комплексное молекулярно-генетическое исследование, которое позволяет выявить генетический материал наиболее вероятных возбудителей острых кишечных инфекций в кале и установить этиологию заболевания.
Синонимы русские
Синонимы английские
Acute intestinal infection screening; Bacterial and viral diarrhea screening, PCR, fecal samples.
Метод исследования
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
- Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.) и на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.
Общая информация об исследовании
Острые кишечные инфекции (ОКИ) – группа заболеваний, обусловленных вирусами, бактериями или паразитами, для которых характерен фекально-оральный механизм передачи. Общими для данных инфекций являются факторы передачи: пищевые продукты, вода, инфицированные бытовые предметы и грязные руки. Первые симптомы возникают через несколько часов или дней после инфицирования, начало резкое, с появлением частого жидкого стула, рвоты, боли в животе, признаков интоксикации (лихорадки, озноба, тошноты). Заболевание может носить групповой характер и проявиться у нескольких человек, употреблявших инфицированную пищу или воду.
Согласно официальной статистике, в России до 65-67% заболеваний этой группы составляют ОКИ неуточненной этиологии. Если возбудитель инфекции неизвестен, эффективность противоэпидемических мероприятий ограничивается. Соотношение частоты выявления вирусных и бактериальных патогенов варьируется в разных возрастах: у детей до 3 лет на долю вирусных агентов приходится 80-90% заболеваний, на долю бактериальных – 10-20%; среди взрослых пациентов доля вирусных возбудителей снижается до 30%.
Shigella species и Esherichia coli – грамотрицательные палочковидные микроорганизмы из семейства энтеробактерий. К роду Shigella относятся патогенные бактерии S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei, которые являются возбудителями шигеллеза (бактериальной дизентерии). Энтероинвазивные E. coli (EIEC) очень близки с шигеллами, синтезируют и выделяют шигеллоподобный токсин, способны проникать в клетки слизистой кишечника и разрушать энтероциты, что приводит к образованию язвенных дефектов в слизистой кишечника. За значительную часть случаев "бактериологически неподтвержденной дизентерии", особенно у детей, ответственен энтероинвазивный эшерихиоз.
Бактерии рода Salmonella относятся к семейству энтеробактерий. S. typhi и S. parathyphi являются возбудителями брюшного тифа и паратифа. Существует множество серовариантов Salmonella species, способных вызвать у человека инфекцию по типу гастроэнтероколита, а также стать причиной внутрибольничных инфекций. Сальмонеллез может протекать в форме острой кишечной инфекции, тяжелой генерализированной инфекции или бессимптомного носительства. Окончательный диагноз ставится только после выделения возбудителя или обнаружения его ДНК.
Кампилобактерии являются одними из наиболее сложных для культивирования (которое требуется в ходе анализа) микроорганизмов. Это объясняется их микроаэрофильностью и возможностью подавления их роста сопутствующей флорой. Род кампилобактерий объединяет как возбудителей ОКИ (термофильные виды), так и сапрофитные и условно-патогенные виды, о чем необходимо помнить при выявлении этих микроорганизмов в клиническом материале. Применение наборов на основе ПЦР для определения термофильной группы кампилобактерий позволяет не только избежать трудоемкой и высокозатратной бактериологической работы, но и четко ограничить детекцию тех видов кампилобактерий, которые имеют этиологическую связь с острой кишечной инфекцией (С. jejuni, C. coli, C. lari, C. upsaliensis).
В соответствии с данными зарубежной литературы, норовирус – наиболее частый возбудитель вспышек ОКИ небактериальной этиологии. Эта особенность связана с низкой инфицирующей дозой и высокой устойчивостью в окружающей среде. ПЦР является "золотым стандартом" в клинической диагностике норовирусных инфекций.
Несмотря на несколько меньшую в сравнении с рота- и норовирусами распространенность, астровирусы составляют значительный пласт кишечных инфекций, у трети пациентов протекающий с явлениями колита. Ротавирусы группы А являются наиболее частой причиной спорадических заболеваний ОКИ у детей, а ДНКсодержащий аденовирус F (серотипы 40 и 41) нередко вызывает вспышки гастроэнтеритов у детей младшего возраста.
Для выявления и дифференциальной диагностики кишечных инфекций используются культуральные и молекулярно-генетические методы исследования генетического материала возбудителя в кале и определение концентрации специфических иммуноглобулинов в крови. ПЦР обладает преимуществом перед культуральными методами благодаря быстрому получению результатов, высокой специфичности и чувствительности исследования. Данный анализ позволяет со 100-процентной точностью определить возбудителя кишечного заболевания, а быстрая диагностика острых кишечных инфекций помогает избежать лишних процедур и оперативных вмешательств, своевременно начать лечение и ограничить очаг распространения инфекции.
Читайте также: