Посев пищевых продуктов на протей

Обновлено: 19.09.2024

ГОСТ 28560-90 Продукты пищевые. Метод выявления бактерий родов Proteus, Morganella, Providencia.

ГОСТ Р 50396.7-92 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Метод выявления бактерий рода Proteus;

ГОСТ 30364.2-96 Продукты яичные. Методы микробиологического контроля

При более длительном хранении чашек с посевами колонии мутнеют, а их центр приобретает бурую окраску. Из подозрительных колоний готовят мазки и окрашивают их по Граму.

К Proteus относят прямые подвижные (иногда встречаются неподвижные формы, лишенные жгутиков) грамотрицательные палочки с закругленными концами, не образующие спор и капсул. Клетки склонны к полиморфизму. Встречаются и кокковидные, а также нитевидные формы.

Для дальнейшего подтверждения принадлежности выделенных бактерий к роду Proteus культуры пересевают на скошенный МПА и выращивают в течение 24 ч при 37(±1)°С.

Суточные культуры с МПА пересевают методом укола в столбик и штрихом по скошенной поверхности одной из сред (среда Крумвиде-Олькеницкого, среда Клиглера, трехсахарный агар). Посевы термостатируют при 37(±1)°С в течение 24-48 ч. Бактерии рода Proteus ферментируют глюкозу с образованием кислоты и газа и образуют сероводород (о чем свидетельствует почернение столбика среды), расщепляют мочевину и не ферментируют лактозу и маннит.

Определение способности к дезаминированию фенилаланина проводят как описано в отдельной статье на сайте. Бактерии рода Proteus дезаминируют фенилаланин.

Выделенные бактерии относят к роду Proteus при обнаружении характерных полиморфных грамотрицательных не образующих спор палочек, сбраживающих глюкозу, образующих сероводород и дезаминирующих фенилаланин.

В ряде случаев достаточно проведения анализа в более сокращенном виде. При исследовании яичных продуктов выявляют только Н-форму (устанавливают морфологию клеток, подвижность, отношение к окраске по Граму, изучают способность сбраживать глюкозу и продуцировать сероводород) и на основании полученных таким образом результатов делают вывод о наличии Proteus в исследованном количестве продукта. При определении протеев в колбасных изделиях и в продуктах из мяса можно не выявлять способность выделенных микроорганизмов к дезаминированию фенилаланина.

б) Установление видовой принадлежности бактерий рода Proteus. По 1 см 3 продукта и (или) соответствующих разведений высевают в пробирки с 5 см 3 жидкой селективной среды с полимиксином. Посевы термостатируют при 36(± 1) °С в течение 48 ч.

При просмотре посевов учитывают пробирки с признаками роста микроорганизмов: помутнение среды, приобретение средой синего цвета вследствие расщепления мочевины. Из всех пробирок, в которых обнаружено помутнение среды, производят высев истощающим штрихом на поверхность дезоксихолат-цитрат-лактозного или дифференциально-диагностического агара. Посевы инкубируют при 36(±1)°С в течение 48 ч.

На вышеупомянутых плотных средах бактерии образуют круглые колонии диаметром 1-3 мм. Роящиеся Proteus отличаются ползучим ростом. Для дальнейшего исследования отбирают не менее пяти характерных колоний.

Для изучения физиолого-биохимических свойств используют суточные культуры, выращенные на МПА.

Определение способности к дезаминированию фенилаланина проводят как описано в отдельной статье на сайте. Бактерии рода Proteus дезаминируют фенилаланин. Положительную реакцию дают также бактерии родов Morganella и Providencia.

Определение способности к ферментации глюкозы и образованию сероводорода проводят как указано в отдельной статье на сайте. Бактерии рода Proteus образуют сероводород, бактерии родов Morganella и Providencia сероводород не образуют. Важно отметить, что Р. myxofaciens может образовывать сероводород и на 3-4-е сутки, вследствие чего целесообразно при отсутствии сероводорода через 48 ч продолжать инкубирование посевов до 4 суток.

Для дифференциации видов Р. vulgaris и Р. mirabilis культуры, образующие сероводород, исследуют на способность образовывать индол и декарбоксилировать орнитин.

Для выявления способности к образованию индола поступают как описано в отдельной статье на сайте. Р. vulgaris образует индол, а Р. myxofaciens и Р. mirabilis индола не образуют.

Для определения наличия орнитиндекарбоксилазы культуры высевают на среду с орнитином и инкубируют при 36(±1) °С в течение 48 ч. При положительной реакции среда мутнеет и изменяет свой цвет на фиолетовый. Р. mirabilis дает положительную реакцию, а Р. vulgaris и Р. myxofaciens орнитин не декарбоксилируют.

Суммируют полученные результаты и делают вывод об обнаружении бактерий рода Proteus (бактерии, дезаминирующие фенилаланин и образующие сероводород). К Р. vulgaris относят микроорганизмы дезаминирующие фенилаланин, образующие сероводород и индол, не декарбоксилирующие орнитин. Р. mirabilis дезаминируют фенилаланин, образуют сероводород и не образуют индол, декарбоксилируют орнитин.

Метод выявления бактерий родов Proteus, Morganella, Providencia

Food products. Method for detection of bacteria of Proteus, Morganella, Providencia genera

Дата введения 1991-07-01

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 24.05.90 N 1277

3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД, на который дана ссылка

Номер раздела, пункта

5. Ограничение срока действия снято по протоколу N 5-94 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 11-12-94)

6. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2010 г.

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления бактерий родов Proteus, Morganella, Providencia.

Метод основан на высеве определенного количества продукта или его разведений в жидкую селективную среду, культивировании посевов при (36±1) °С в течение 48 ч, последующем пересеве выросших культур на плотные дифференциально-диагностические среды, культивировании посевов при (36±1) °С в течение 48 ч, выделении характерных колоний и подтверждении с помощью биохимических тестов их принадлежности к бактериям родов Proteus и (или) Morganella и (или) Providencia или к видам Proteus vulgaris или Proteus mirabilis.

1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

Отбор проб - по ГОСТ 26668, подготовка к испытанию - по ГОСТ 26669.

2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104*, с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и пределом допускаемой погрешности ±2 мг (для взвешивания реактивов);

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104, с наибольшим пределом взвешивания до 1 кг и пределом допускаемой погрешности ±10 мг (для взвешивания продукта);

микроскоп световой биологический или импортный с аналогичными техническими характеристиками;

термостат с диапазоном рабочих температур от 28 до 55 °С, позволяющий поддерживать заданную температуру с погрешностью ±1 °С;

стерилизатор горячим воздухом;

метил бутанол (амиловый спирт);

натрия тиосульфат (NaSO5HO);

натрий аммония фосфат;

полимиксин В сульфат во флаконах по 25 мг (250000 ЕД) и по 50 мг (500000 ЕД);

полимиксин М сульфат во флаконах по 500000 ЕД;

L- или DL-фенилаланин;

L- или DL-орнитин;

желчь сухая или желчь натуральная крупного рогатого скота;

железа (III) цитрат;

железо хлорное (FeCl6HO)

3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

3.1. Приготовление растворов

3.1.1. Спиртовой раствор массовой концентрацией бромтимолового синего 16 г/дм: 1,6 г бромтимолового синего переносят в мерную колбу вместимостью 100 см и растворяют в этиловом спирте с массовой долей 96%. Раствор доливают этиловым спиртом до метки.

3.1.2. Раствор массовой концентрацией мочевины 500 г/дм: 50 г мочевины переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде, раствор доливают до метки.

3.1.3. Щелочной раствор фенолового красного массовой концентрацией 16 г/дм: 1,6 г фенолового красного растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см в растворе гидроксида натрия массовой концентрацией 100 г/дм. Раствор доливают раствором гидроксида натрия до метки.

3.1.4. Раствор хлорного железа массовой концентрацией 100 г/дм: 16,6 г (FeCl6HO) переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до метки.

3.1.5. Раствор гидроксида натрия массовой концентрацией 100 г/дм: 10 г гидроксида натрия переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до метки.

3.1.6. Раствор кристаллического фиолетового массовой концентрацией 1 г/дм: 0,1 г кристаллического фиолетового переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до метки.

3.1.7. Раствор для среды агара-дезоксихолат-цитрат лактозного: 17,0 г натрия лимоннокислого, 1,0 г натрия тиосульфата, 2,0 г железа (III) цитрата помещают в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки и выдерживают на водяной бане при (60±1) °С в течение 1 ч. Раствор хранят при комнатной температуре не более 3 мес.

3.1.8. Раствор дезоксихолата натрия массовой концентрацией 100 г/дм: 10 г дезоксихолата натрия переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до метки и выдерживают на водяной бане при (60±1) °С в течение 1 ч. Раствор хранят при комнатной температуре не более 6 мес.

3.1.9. Растворы полимиксин В сульфата или полимиксин М сульфата готовят непосредственно перед использованием, для этого во флакон со стерильным антибиотиком вносят 5 или 10 см стерильной дистиллированной воды.

3.1.10. Реактивы для определения индола:

Реактивы хранят в сосудах из темного стекла при температуре (4±2) °C не более 1 мес.

3.1.11. Вазелиновое масло готовят по ГОСТ 10444.1.

3.1.12. Спиртовой раствор массовой концентрацией бромкрезолового пурпурного 10 г/дм: 1 г бромкрезолового пурпурного переносят в мерную колбу вместимостью 100 см и растворяют в этиловом спирте с массовой долей 96%. Раствор доливают этиловым спиртом до метки.

3.2. Приготовление питательных сред

3.2.1. Агар мясо-пептонный готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2.2. Бульон мясо-пептонный готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2.3. Среда жидкая селективная. Основа среды: к 1 дм мясо-пептонного бульона по п.3.2.2 добавляют 1,0 г маннита, 50,0 смнатуральной бычьей желчи или эквивалентное количество сухой желчи, 0,8 г калия фосфорнокислого двузамещенного, 2,0 см раствора кристаллического фиолетового, приготовленного по п.3.1.6, 2,0 см спиртового раствора бромтимолового синего, приготовленного по п.3.1.1. Устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (6,9±0,1) при 25 °С. Стерилизуют текучим паром при 100 °С в течение 15 мин.

Для приготовления среды к основе добавляют асептически 10,0 см раствора мочевины, приготовленного по п.3.1.2, и 100000 ЕД полимиксина В сульфата или 120000 ЕД полимиксина М сульфата. Среду разливают в стерильные пробирки по 5 см. Хранят при (4±2) °С не более 7 сут. Готовая среда прозрачная, желто-бурого цвета.

3.2.4. Агар дезоксихолат-цитрат лактозный по Leifson модификация Hynes.

Основа среды: в 1 дм кипящей мясной воды, приготовленной по ГОСТ 10444.1, растворяют 5,0 г пептона, 10,0 г лактозы, 22,5 г агара, охлаждают до (45-50) °С, устанавливают рН таким образом, чтобы при 25 °С он составлял (7,4±0,1). Прибавляют 0,03 г нейтрального красного, разливают в мерные колбы, стерилизуют при (115±1) °С в течение 20 мин. Хранят при (4±2) °С не более 7 сут.

Допускается использовать вместо 1 дм мясной воды и 5,0 г пептона 1 дм мясо-пептонного бульона, приготовленного по п.3.2.2.

Текст ГОСТ 28560-90 Продукты пищевые. Метод выявления бактерий родов Рrоtеus, Моrgаnеllа, Рrоvidеnсiа

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

МЕТОД ВЫЯВЛЕНИЯ БАКТЕРИЙ РОДОВ PROTEUS, MORGANELLA, PROVIDENCIA

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Метод выявления бактерий родов Proteus, Morganella, Providencia

Food products. Method for detection of bacteria of Proteus, Morganella, Providencia genera

МКС 07.100.30 ОКСТУ 9109

Дата введения 01.07.91

Метод основан на высеве определенного количества продукта или его разведений в жидкую селективную среду, культивировании посевов при (36 ± 1) °С в течение 48 ч, последующем пересеве выросших культур на плотные дифференциально-диагностические среды, культивировании посевов при (36 ± 1) °С в течение 48 ч, выделении характерных колоний и подтверждении с помощью биохимических тестов их принадлежности к бактериям родов Proteus и (или) Morganella и (или) Providencia или к видам Proteus vulgaris или Proteus mirabilis.

1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

Отбор проб — по ГОСТ 26668, подготовка к испытанию — по ГОСТ 26669.

2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104*, с наибольшим предедом взвешивания до 200 г и пределом допускаемой погрешности ± 2 мг (для взвешивания реактивов);

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104, с наибольшим пределом взвешивания до 1 кг и пределом допускаемой погрешности ± 10 мг (для взвешивания продукта);

микроскоп световой биологический или импортный с аналогичными техническими характеристиками;

термостат с диапазоном рабочих температур от 28 до 55 °С, позволяющий поддерживать заданную температуру с погрешностью ± 1 °С; холодильник бытовой; стерилизатор горячим воздухом; адонит; мальтоза;

метил бутанол (амиловый спирт); мочевина;

) Издательство стандартов, 1990 © СТАНДАРТИНФОРМ, 2010

нейтральный красный; натрия дезоксихолат; натрия тиосульфат (Na2S20₃-5H₂0); натрий аммония фосфат;

полимиксин В сульфат во флаконах по 25 мг (250 000 ЕД и по 50 мг (500 000 ЕД); полимиксин М сульфат во флаконах по 500 000 ЕД;

L — или DL-фенилаланин;

L — или DL-орнитин; феноловый красный;

желчь сухая или желчь натуральная крупного рогатого скота;

железа (III) цитрат;

3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

3.1. Приготовление растворов

3.1.1. Спиртовой раствор массовой концентрацией бромтимолового синего 16 г/дм 3 : 1,6 г бромти-молового синего переносят в мерную колбу вместимостью 100 см 3 и растворяют в этиловом спирте с массовой долей 96 %. Раствор доливают этиловым спиртом до метки.

3.1.2. Раствор массовой концентрацией мочевины 500 г/дм 3 : 50 г мочевины переносят в мерную колбу вместимостью 100 см 3 , растворяют в дистиллированной воде, раствор доливают до метки.

3.1.3. Щелочной раствор фенолового красного массовой концентрацией 16 г/дм 3 : 1,6 г фенолового красного растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см 3 в растворе гидроксида натрия массовой концентрацией 100 г/дм 3 . Раствор доливают раствором гидроксида натрия до метки.

3.1.4. Раствор хлорного железа массовой концентрацией 100 г/дм 3 : 16,6 г (FeCl₃-6H₂0) переносят в мерную колбу вместимостью 100 см 3 , растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до метки.

3.1.5. Раствор гидроксида натрия массовой концентрацией 100 г/дм 3 : 10 г гидроксида натрия переносят в мерную колбу вместимостью 100 см 3 , растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до метки.

3.1.6. Раствор кристаллического фиолетового массовой концентрацией 1 г/дм 3 : 0,1 г кристаллического фиолетового переносят в мерную колбу вместимостью 100 см 3 , растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до метки.

3.1.7. Раствор для среды агара-дезоксихолат-цитрат лактозного: 17,0 г натрия лимоннокислого,

1,0 г натрия тиосульфата, 2,0 г железа (III) цитрата помещают в мерную колбу вместимостью 100 см 3 , растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки и выдерживают на водяной бане при (60 ± 1) °С в течение 1 ч. Раствор хранят при комнатной температуре не более 3 мес.

3.1.8. Раствор дезоксихолата натрия массовой концентрацией 100 г/дм 3 : 10 г дезоксихолата натрия переносят в мерную колбу вместимостью 100 см 3 , растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до метки и выдерживают на водяной бане при (60 ± 1) °С в течение 1 ч. Раствор хранят при комнатной температуре не более 6 мес.

3.1.9. Растворы полимиксин В сульфата или полимиксин М сульфата готовят непосредственно перед использованием, для этого во флакон со стерильным антибиотиком вносят 5 или 10 см 3 стерильной дистиллированной воды.

3.1.10. Реактивы для определения индола:

Реактив Ковача: 5,0 г парадиметиламинобензальдегида растворяют в 75 см 3 метил бутанола и добавляют 25 см 3 концентрированной соляной кислоты (р = 1,18—1,19 г/см 3 ).

Реактив Эрлиха: 4,0 г парадиметиламинобензальдегида растворяют в 380 см 3 этилового спирта с массовой долей 96 % и добавляют 80 см 3 концентрированной соляной кислоты (р =1,18 — 1,19 г/см 3 ). Реактивы хранят в сосудах из темного стекла при температуре (4 ± 2) °С не более 1 мес.

3.1.11. Вазелиновое масло готовят по РОСТ 10444.1.

3.1.12. Спиртовой раствор массовой концентрацией бромкрезолового пурпурного 10 г/дм 3 : 1 г бромкрезолового пурпурного переносят в мерную колбу вместимостью 100 см 3 и растворяют в этиловом спирте с массовой долей 96 %. Раствор доливают этиловым спиртом до метки.

3.2. Приготовление питательных сред

3.2.1. Агар мясо-пептонный готовят по РОСТ 10444.1.

3.2.2. Бульон мясо-пептонный готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2.3. Среда жидкая селективная. Основа среды: к 1 дм 3 мясо-пептонного бульона по и. 3.2.2 добавляют 1,0 г маннита, 50,0 см 3 натуральной бычьей желчи или эквивалентное количество сухой желчи, 0,8 г калия фосфорнокислого двузамещенного, 2,0 см 3 раствора кристаллического фиолетового, приготовленного по и. 3.1.6, 2,0 см 3 спиртового раствора бромтимолового синего, приготовленного по и. 3.1.1. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (6,9 ± 0,1) при 25 °С. Стерилизуют текучим паром при 100 °С в течение 15 мин.

Для приготовления среды к основе добавляют асептически 10,0 см 3 раствора мочевины, приготовленного по и. 3.1.2, и 100 000 ЕД полимиксина В сульфата или 120 000 ЕД полимиксина М сульфата. Среду разливают в стерильные пробирки по 5 см 3 . Хранят при (4 ± 2) °С не более 7 сут. Еотовая среда прозрачная, желто-бурого цвета.

3.2.4. Агар дезоксихолат-цитрат лактозный по Leifson модификация Hynes.

Основа среды: в 1 дм 3 кипящей мясной воды, приготовленной по ЕОСТ 10444.1, растворяют

5.0 г пептона, 10,0 г лактозы, 22,5 г агара, охлаждают до (45—50) °С, устанавливают pH таким образом, чтобы при 25 °С он составлял (7,4 ± 0,1). Прибавляют 0,03 г нейтрального красного, разливают в мерные колбы, стерилизуют при (115 ± 1) °Св течение 20 мин. Хранят при (4 ± 2) °С не более 7 сут.

Допускается использовать вместо 1 дм 3 мясной воды и 5,0 г пептона 1 дм 3 мясо-пептонного бульона, приготовленного по и. 3.2.2.

Для приготовления питательной среды к расплавленной и охлажденной до 45—50 °С основе прибавляют из расчета на 100 см 3 основы 5 см 3 раствора солей, приготовленных по и. 3.1.7, и 5 см 3 раствора дезоксихолата натрия, приготовленного по и. 3.1.8. Среду перемешивают и разливают по стерильным чашкам Петри по ЕОСТ 26670. Среду используют в день ее приготовления.

3.2.5. Агар тройной сахарный с цитратом железа: в 1 дм 3 мясо-пептонного бульона по и. 3.2.2 растворяют при нагревании 15 см 3 дрожжевого экстракта, 10,0 г пептона, 10,0 г лактозы, 10,0 г сахарозы, 1,0 г глюкозы, 0,3 г железа (III) цитрата, 0,3 г натрия тиосульфата, 0,024 г фенолового красного, 15,0 г агара. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С (7,4 ± 0,1). Разливают в пробирки и стерилизуют при (121 ± 1) °С в течение 10 мин, дают застыть в наклонном положении, чтобы максимальная высота столбика составляла 2,5 см. Среда имеет коричнево-красную окраску. Хранят при комнатной температуре не более 7 сут.

3.2.6. Среда для расщепления фенилаланина: 15 см 3 дрожжевого экстракта, 2,0 г ЛЕ-фенила-ланина или 1,0 г Z-фенилаланина, 1,0 г натрия фосфорнокислого двузамещенного, 5,0 г натрия хлорида, 12,0 г агара растворяют в 1 дм 3 кипящей дистиллированной воды. По 5 см 3 среды разливают в пробирки, стерилизуют при (121 ± 1) °С 10 мин, дают застыть в наклонном положении. Среду хранят при (4 ± 2) °С не более 7 сут.

3.2.7. Агар с цитратом: 0,2 г магния сульфата, 1,0 г однозамещенного фосфорнокислого аммония,

1.0 г натрия аммония фосфата, 2,0 г трехосновного натрия лимоннокислого, 5,0 г натрия хлорида, 0,08 г бромтимолового синего, 15,0 г агара растворяют в 1 дм 3 кипящей дистиллированной воды. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С (7,0 ± 0,1). Стерилизуют при (121 ± 1) °С в течение 15 мин и дают застыть в пробирках в наклонном положении. Среда имеет зеленую окраску, ее хранят при комнатной температуре не более 7 сут.

3.2.8. Агар дифференциально-диагностический: к 1 дм 3 расплавленного мясо-пептонного агара по и. 3.2.1 добавляют 15,0 см 3 дрожжевого экстракта, 10,0 г маннита, 10,0 г мальтозы, 80,0 см 3 натуральной бычьей желчи или эквивалентное количество сухой желчи, 2,0 г железа (III) цитрата, 0,5 г натрия тиосульфата, 0,5 см 3 раствора кристаллического фиолетового, приготовленного по и. 3.1.6, 2,0 см 3 щелочного раствора фенолового красного, приготовленного по и. 3.1.3, раствор антибиотика, приготовленного по и. 3.1.9 и содержащего 120 000 ЕД полимиксина М сульфата или 100 000 ЕД полимик-син В сульфата. Среду стерилизуют текучим паром (при 100 °С) в течение 15 мин и разливают по ЕОСТ 26670 после охлаждения по стерильным чашкам Петри. Среду хранят при (4 ± 2) °С не более 7 сут. Еотовая среда оранжево-красного цвета.

3.2.9. Триптон-триптофановая среда (Ljutov): 10,0 г триптона или пептона, 5,0 г натрия хлорида,

1.0 г 7)Е-триптофана или 0,5 г Z-триптофана растворяют в 1 дм 3 кипящей дистиллированной воды и фильтруют, устанавливают pH так, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С (7,5 + 0,1). Среду разливают по 5 см 3 в пробирки, стерилизуют при (121 ± 1) °С в течение 15 мин. Среду используют в день приготовления.

3.2.10. Среда для определения декарбоксилазы орнитина:

в 1 дм 3 дистиллированной воды растворяют при нагревании 5,0 г /.-орнитина или 10,0 г ЛГ-орнитина, 15,0 см 3 дрожжевого экстракта, 1,0 г глюкозы, 1,2 см 3 раствора бромкрезолового пурпурного, приготовленного по п. 3.1.12. Устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С (6,8 ± 0,1). Среду разливают в пробирки по 5 см 3 и стерилизуют при (121 ± 1) °С в течение 10 мин. Хранят при (4 ± 2) °С не более 7 сут. Готовая среда светло-фиолетового цвета.

4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

4.1. Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений по ГОСТ 26669 так, чтобы можно было определить предполагаемое минимальное количество продукта, содержащее бактерии родов Proteus и (или) Morganella, и (или) Providencia или видов Proteus vulgaris или Proteus mirabilis.

4.2. Из продукта и (или) соответствующих разведений высевают по 1,0 см 3 в жидкую селективную среду по п. 3.2.3. Посевы инкубируют при (36 ± 1) °С в течение 48 ч.

4.3. Положительными считают пробирки, в которых наблюдается помутнение среды. При росте бактерий, расщепляющих мочевину, наблюдается изменение цвета среды в синий. Отсутствие изменения цвета среды не является показателем отсутствия роста выявляемых бактерий.

4.4. Для подтверждения присутствия бактерий родов Proteus и (или) Morganella, и (или) Providencia или видов Proteus vulgaris или Proteus mirabilis из всех пробирок, в которых наблюдается помутнение среды, делают пересевы на одну из дифференциально-диагностических плотных сред, приготовленных по и. 3.2.4 или по и. 3.2.8, таким образом, чтобы получить рост изолированных колоний.

Посевы инкубируют при (36 ± 1) °С в течение 48 ч.

4.5. На дифференциально-диагностических плотных средах бактерии образуют колонии круглой формы диаметром 1—3 мм. Бактерии рода Proteus обладают свойством роения (ползучим ростом).

4.6. Из всех чашек с характерным ростом выбирают не менее 5 колоний для выделения чистых культур и дальнейшего изучения.

Для получения чистых культур используют скошенный в пробирке мясо-пептонный агар по п. 3.2.1 или мясо-пептонный бульон по п. 3.2.2. Посевы инкубируют при (36 ± 1) °С в течение 24 ч.

4.7. Биохимическое подтверждение принадлежности выделенных микроорганизмов к бактериям родов Proteus и (или) Morganella, и (или) Providencia.

4.7.1. Для определения наличия дезаминазы фенилаланина из 24-часовой культуры по п. 4.6 делают высев штрихами на поверхность скошенного в пробирке агара, приготовленного поп. 3.2.6, и культивируют при (36 ± 1) °С в течение 48 ч, после этого на поверхность агара пипеткой наносят 3—5 капель раствора хлорного железа, приготовленного по п. 3.1.4. При этом появление интенсивной зеленой окраски среды свидетельствует о положительной реакции. При отрицательной реакции цвет среды не меняется.

Бактерии родов Proteus, Morganella, Providencia дают положительную реакцию.

4.7.2. Для определения способности образовывать сероводород культуры по п. 4.6 высевают методом укола в столбик и штрихами по поверхности агаризованной среды, приготовленной по п. 3.2.5.

Посевы инкубируют при (36 ± 1) °С в течение 48 ч. При образовании сероводорода столбик среды чернеет. Бактерии рода Proteus образуют сероводород, при этом в столбике среды появляется газ, что указывает на ферментацию глюкозы с образованием кислоты и газа.

Допускается инкубирование посевов при отсутствии сероводорода через 48 ч продолжать до 4 сут, так как P.myxofaciens может образовывать сероводород на 3-и — 4-е сутки. Бактерии рода Morganella и Providencia сероводорода не образуют.

4.7.3. Для определения способности утилизировать цитрат культуры, не образующие сероводород по п. 4.7.2, пересевают на поверхность скошенного агара, приготовленного по п. 3.2.7. Посевы инкубируют при (36 ± 1) °С в течение 48 ч. Окрашивание среды в синий цвет — положительная реакция, отсутствие изменения— отрицательная реакция.

Бактерии рода Providencia утилизируют цитрат, бактерии рода Morganella не утилизируют цитрат.

4.8. Для дифференцирования видов P.vulgaris и P.mirabilis у культур, образующих сероводород по и. 4.7.2, проводят определение наличия декарбоксилазы орнитина и способности образовывать индол.

4.8.1. Для определения способности образовывать индол выделенные культуры высевают в триптон-триптофановую среду, приготовленную по и. 3.2.9. Посевы инкубируют при (36 ± 1) °С в течение 48 ч. После инкубирования добавляют 1 см 3 реактива Ковача или Эрлиха, приготовленных по и. 3.1.10. Темно-красное кольцо свидетельствует о положительной реакции.

P.vulgaris образует индол, P.mirabilis и P.myxofaciens индола не образуют.

4.8.2. Для определения наличия декарбоксилазы орнитина выделенные культуры высевают в среду, приготовленную по и. 3.2.10. Посевы инкубируют при (36 ± 1) °С в течение 48 ч. Положительной реакцией считают помутнение среды и изменение ее цвета в фиолетовый.

P.mirabilis дает положительную реакцию, P.vulgaris P.myxofaciens — отрицательную.

5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

5.1. Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.

5.2. Если при изучении культуральных и биохимических свойств обнаружены микроорганизмы, дезаминирующие фенилаланин, то их относят к бактериям родов Proteus, Morganella, Providencia.

5.2.1. Результаты испытания записывают следующим образом: фенилдезаминирующие бактерии родов Proteus, Morganella, Providencia обнаружены или не обнаружены.

5.3. Если при изучении культуральных и биохимических свойств обнаружены микроорганизмы, дезаминирующие фенилаланин и образующие сероводород, то их относят к бактериям рода Proteus.

Микроорганизмы, дезаминирующие фенилаланин, не образующие сероводород, утилизирующие цитрат, относят к бактериям рода Providencia.

Микроорганизмы, дезаминирующие фенилаланин, не образующие сероводород, не утилизирующие цитрат, относят к бактериям рода Morganella.

5.3.1. Результаты испытания записывают следующим образом: бактерии родов Proteus и (или) Morganella и (или) Providencia обнаружены или не обнаружены.

5.4. Если при изучении культуральных и биохимических свойств обнаружены микроорганизмы, дезаминирующие фенилаланин, образующие сероводород и индол, не декарбоксилизирующие орни-тин, то их относят к бактериям вида P.vulgaris.

Если при изучении культуральных и биохимических свойств обнаружены микроорганизмы, дезаминирующие фенилаланин, образующие сероводород, не образующие индол, декарбоксилирующие орнитин, то их относят к бактериям вида P.mirabilis.

5.4.1. Результаты испытания записывают следующим образом:

бактерии видов P.vulgaris и (или) P.mirabilis обнаружены или не обнаружены.

5.5. При записи результатов испытания указывают навеску продукта, в котором обнаружены или не обнаружены выявляемые микроорганизмы.

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 24.05.90 № 1277

В последние годы инфекционисты отмечают рост заболеваний, обусловленных нетрадиционными микроорганизмами. Особое место занимает протейная инфекция. Ее кишечная форма, вызванная бакетриями рода Протей — P. vulgaris протекает тяжелее у детей раннего возраста. Не менее опасны гнойно-воспалительные заболевания мочевыводящей системы, вызываемые P. mirabilis, P. rettgeri и P. morganii.

В греческой мифологии Протей – божество, способное менять облик. Отсюда название полиморфных, мелких, нитевидных палочек, отличающихся активной подвижностью. Размеры клеток составляют 0,5 — 3 мкм. P. morganii, P. rettgeri — менее полиморфны и малоподвижны.

Протейная инфекция: причины, развитие, опасность для организма

Возбудителями протейной инфекции являются грамотрицательные условно-патогенные микроорганизмы семейства энтеробактерий, которые присутствуют в нормальной микрофлоре кишечника, а также повсеместно распространены в воздухе, почве и воде. Бактерии рода Proteus в течение долгого времени не причислялись к возбудителям серьезных инфекционно-воспалительных заболеваний. Однако в связи с последними достижениями в области диагностики было обнаружено, что эти микроорганизмы способны вызывать трудно поддающиеся лечению патологии (протеозы), поражающие преимущественно ЖКТ и мочеполовую систему.

Протей – факультативный анаэроб, палочковидная, неспороносная, подвижная, грамотрицательная бактерия. В микробиологическом анализе кала протей встречается в комплексе с другими условно-патогенными бактериями семейства энтеробактерий. Кроме протея, в составе нормальной микрофлоры кишечника человека определяются: клебсиелла, энтеробактер, гафния, серратия, морганелла, провиденция, цитробактер. В 1 г кала должно быть меньше 10 4 общего количества этих бактерий. Большее количество перечисленных бактерий является признаком дисбактериоза.

В природе бактерии рода Proteus обнаруживаются: в сточных водах, в земле, в водоемах, на овощах, в разлагающихся органических веществах. Эти микроорганизмы — сапрофиты, они живут на слизистых оболочках, на коже, в кишечнике человека и животных. Протеи устойчивы во внешней среде и сохраняют жизнедеятельность в слабых растворах фенола и других средств. Выявлена также резистентность ко многим антибиотикам.

Причины протейной инфекции

Протейная палочка, присутствующая в кишечной микрофлоре в небольших количествах, не причиняет организму никакого вреда. При определенных обстоятельствах (снижение иммунитета, неправильное питание, длительный прием антибиотиков) она может активизироваться и начать интенсивно размножаться. Также инфицирующее количество этих бактерий способно проникнуть в организм из внешней среды.

Основными путями передачи инфекции являются пищевой и контактно-бытовой. Чаще всего заражение происходит при употреблении белковых продуктов (мяса, рыбы, молока, колбасы), которые хранились с нарушением надлежащих сроков и условий. Значительно реже инфицирование осуществляется через немытые руки, во время купания или при употреблении зараженной воды.

Инфицирование протеем может произойти через полуфабрикаты, сырые продукты или готовые блюда из мяса, рыбы, молока, колбасы, студня. В них происходит быстрое размножение бактерий с образованием токсинов. Реже отмечают водный путь передачи: при купании в загрязненных водоемах или употреблении инфицированной воды. Возможен и контактный путь передачи на инфицированных руках зараженного человека.

Развитие патологии

При непосредственном попадании протея в ЖКТ вместе с продуктами питания инфекционное заболевание развивается очень стремительно. Первые симптомы ярко выражены, а общая клиническая картина совпадает с проявлениями сильного пищевого отравления. При контактно-бытовом способе заражения развитие признаков инфекции обычно происходит медленнее.

Если инфекционный процесс протекает в легкой форме, больной испытывает слабость, у него отмечаются повышение температуры, рвота, боль в животе, частый водянистый стул, в котором могут обнаруживаться слизь и зеленые включения. При тяжелом течении заболевания приступы рвоты случаются около 10 раз за сутки и более, а температура обычно поднимается до 40°С.

При условии своевременного и адекватного лечения вся острая симптоматика протеоза легкой или средней степени тяжести исчезает спустя несколько дней, после чего больной быстро идет на поправку.

Протеи выделяют токсические вещества — эндотоксины с гемолитическими свойствами и с различной степенью биохимической активности. У штаммов P. vulgaris обнаружена лецитиназная активность. Протеи обладают способностью адгезии к уротелию при помощи ресничек. Отмечают, что резистентность к антибиотикам связана с адгезивной способностью уропатогенных протеев.

Острой кишечной протейной инфекцией, протекающей по типу гастроэнтерита, гастрита и колиэнтерита часто болеют дети раннего возраста с пониженным иммунитетом и после бесконтрольного назначения антибиотиков. Заболевание сопровождается симптомами токсикоза — повышением температуры, рвотой, метеоризмом, схваткообразными болями в животе, нарушением аппетита, кратковременными судорогами, появлением водянистого, зловонного, учащенного стула.

В тяжелых случаях могут развиться осложнения: гемолитико-уремический синдром, а также симптомы острой гемолитической тромбопении, анемии или острой почечной недостаточности.

Клинические проявления внутрибольничной инфекции протейной этиологии весьма разнообразны: поражения мочевыводящей системы, отиты, холециститы, нагноения ран и септические состояния. Попадание протеев в пупочную ранку новорожденного может привести к бактериемии или развитию менингита.

Данные заболевания могут развиться: при передаче возбудителя контактно-бытовым или воздушно-капельным путями, при заносе с катетером, другими урологическими инструментами.
Ультратонкий срез клетки Proteus alcalifaciens. Увеличение *83000
Если в мазках исследуемого материала (участки ожоговой ткани, гной, раневое отделяемое, испражнения) обнаруживаются грамотрицательные палочки, то бактериоскопический метод позволяет сделать предварительное заключение. Бактериологическим методом на средах определяют колонии протея в виде тонкого стелющегося налета. Активно размножаются протеи на белковой питательной среде вызывают гниение мяса, рыбы, других белковых продуктов.

Важнейшие профилактические меры — это соблюдение санитарного режима в детских учреждениях и стационарах, проведение общесанитарных мероприятий. Для профилактики протея каждому необходимо соблюдать правила личной гигиены, исключить потребление подозрительных продуктов в питании, избегать контактов с больными детьми и взрослыми.

При лечении протейной инфекции следует придерживаться лечебной щадящей диеты с исключением жареных, острых блюд, белковых продуктов. В острый период протейного инфицирования, при поражении желудочно-кишечного тракта — необходимо обеспечить восполнение потерянной жидкости. Полезно употреблять отвары трав – тысячелистника, алтея, зверобоя, ромашки, календулы; морсы, компоты с клюквой, черной смородиной, абрикосами, черникой, яблоками. Применять антибиотики можно только по назначению врача, в соответствии с данными анализов чувствительности бактерии протея к ним.

Обязательно нужно принимать препараты – пробиотики, пребиотики, синбиотики для восстановления нормальной флоры кишечника.

Синбиотические комплексы Нормофлорины, содержащий живые активные лакто- и бифидобактерии, секретирующие молочную, уксусную, масляную, пропионовую кислоты, оказывающие защитное, антисептическое, противовоспалительное, сорбционное действие – уменьшает интоксикацию, улучшает моторику кишечника, функцию печени, повышает иммунную реактивность. Это помогает в борьбе с протейной инфекцией, восстанавливает работу желудочно-кишечного тракта, общее самочувствие, повышает иммунитет.

Схема (возрастные дозировки для детей или взрослых): (взрослый) нормофлорин Л – 20 мл (при диарее) – 40 (при запорах) мл утром перед едой, Д — 40 мл вечером за 20 мин до еды, Б – 20-30 мл на ночь в клизме. При диарее в обед можно добавить Д – 30-40 мл, при запорах в обед + Л – 30-40 мл.

Курс приема нормофлоринов — 1 — 1,5 месяца, для выведения токсинов, патогенной микрофлоры, восстановления полезных собственных бактерий. Уникальный состав нормофлоринов, не содержащих белков коровьего молока, молочного сахара, консервантов позволяет при протейной инфекции успешно применять его у детей с первых дней жизни, беременных, кормящих, больных сахарным диабетом, аллергическими заболеваниями, т.е. у взрослых при любой сопутствующей патологии.

Опасность протейной инфекции

Протейная инфекция

Тяжелые формы патологии могут осложняться состояниями, требующими срочной госпитализации больного, такими как сильное обезвоживание, судороги, инфекционно-токсический шок.
protey_mirabilis
Помимо острых инфекций пищеварительной системы бактерии Proteus способны поражать другие органы, распространяясь через кровь или по лимфатическим сосудам. Очаг воспаления может локализоваться в мочеполовой системе, глазах, ушах, легких и даже в костной ткани или мозговых оболочках. Данные патологии достаточно часто переходят в хроническую форму с упорным рецидивирующим течением, которая тяжело поддается терапии.

Если протейная инфекция заносится на незажившие поверхности кожи и слизистых оболочек (послеоперационные раны, ожоги), вызванный ею воспалительный процесс значительно замедляет регенерацию тканей и снижает эффективность лечебных мероприятий.

Следует отметить, что даже незначительное превышение нормального количества протейной палочки в кишечной микрофлоре может негативно отразиться на состоянии здоровья. Так, если у человека имеются аутоиммунные болезни, существует высокий риск их обострения из-за возросшей активности протейной палочки. Атопический дерматит, астма, аллергические заболевания и другие иммунозависимые патологии могут впервые развиться или обостриться под воздействием бактерий Proteus.

Читайте также: