Посев спинномозговой жидкости бактериология посев

Обновлено: 07.07.2024

На сайте указан максимально возможный срок выполнения исследования. Он отражает время выполнения исследования в лаборатории и не включает время на доставку биоматериала до лаборатории.

Номенклатура МЗРФ (Приказ №804н): A26.23.006.000.01 Микробиологическое (культуральное) исследование спинномозговой жидкости (и др. биологических жидкостей) на аэробные микроорганизмы и грибы

Подготовка к исследованию

Взятие биологического материала проводится строго до начала примения антибактериальных и химиотерапевтических препаратов или не ранее, чем через 10-14 дней после их отмены.

Описание

Диагностика инфекций центральной нервной системы и других органов и систем у детей, заключающаяся в посеве пробы ликвора и других биологических жидкостей пациента в питательные среды, обеспечивающие рост аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (бактерий и грибов). Микробиологическое исследование патологического материала проводят при пневмонии, инфекционном эндокардите, остеомиелите, менингите, инфекциях мочеполовых путей, тогда, когда возможно проникновение микроорганизмов в ликвор и другие органы и системы организма. Флаконы с питательными средами инкубируют в термостате, при обнаружении микробного роста выделяют культуру микроорганизма, определяют его этиологическую значимость и производят определение его чувствительности к антимикробным препаратам. Выявление возбудителя в исследуемом материале позволяет поставить точный этиологический диагноз заболевания и назначить адекватную терапию.

Показания к назначению

подозрение на бактериальную и/или грибковую природу воспаления;
определение возбудителя и подбор адекватной антибактериальной/антимикотической терапии.

Интерферирующие факторы

Причины отклонения показателей от нормы (повышенные значения)

Выделение представителей патогенной флоры свидетельствует об этиологическом факторе выделенного возбудителя в клинической картине. Решение вопроса о постановки чувствительности к антибактериальным препаратам осуществляется врачом микробиологом и регламентируется методическими указаниями. R-возбудитель, S возбудитель чувствителен I- возбудитель умеренно устойчив к антибактериальному препарату. Выявление условно-патогенной флоры и ее значимость в развитии заболевания зависит от количества выделенного возбудителя для данной локализации

Причины отклонения показателей от нормы (сниженные значения)

Отсутствие патогенной флоры -норма. Присутствие условно- патогенной флоры в количестве не превышающем диагностического значения-норма для данной локализации

Метод:

Анализатор:

Автоматический бактериологический анализатор культур крови BACT/ALERT® 3D, bioMerieux, Франция; Система идентификации микроорганизмов методом масс-спектрометрии VITEK MS, bioMerieux, Франция; Автоматизированная система для окрашиванию по Граму PREVI Color Gram, bioMerieux, Франция; Бактериологический автоматический анализатор VITEK 2, bioMerieux, Франция; Бактериологический анализатор Adagio, Bio-Rad Laboratories, США;

Выпускается несколько систем для посева крови. Большинство из них представляет собой сосуды с 50-100 мл бульона, который ускоряет рост бактерий и грибов (в первую очередь, дрожжей). Для использования в педиатрической практике производятся специальные сосуды меньшей емкости. В некоторые питательные среды добавляют смолы, которые адсорбируют антибактериальные препараты и повышают эффективность обследования больных, получающих антибактериальную терапию. Во многих лабораториях применяются автоматизированные системы, которые позволяют быстрее идентифицировать микроорганизм: более чем в 80% случаев результат удается получить в течение суток.

Очень важна тщательная дезинфекция кожи. Если используется повидон-йод, перед взятием крови кожу необходимо полностью высушить. Дезинфекцию также можно осуществлять этиловым спиртом, который быстро приводит к гибели бактерий. Йод — мощный антисептик, но после нанесения его следует смыть спиртом, чтобы избежать раздражения кожи. Не рекомендуется получать кровь для посева с помощью центральных венозных катетеров, поскольку в этом случае невозможно решить, играют ли этиологическую роль коагулазаотрицательные стафилококки и другие представители микрофлоры кожи.

Если кровь берется из катетера, необходимо одновременно взять кровь и из периферической вены. Делать это следует, по возможности, до начала антимикробной терапии. При подозрении на бактериемию или фунгемию целесообразно делать 2-3 посева крови. 4 посева крови и более требуются редко, даже при бактериальном эндокардите. Для посева набирают не менее 2 мл крови. Чтобы повысить вероятность высевания возбудителя, требуется больший объем крови. Это особенно касается детей, поскольку у 10-20% из них уровень бактериемии невелик. В большинстве случаев всю полученную для посева кровь вводят в единственную емкость с аэробной средой (бактериемия, вызванная анаэробными организмами, у детей встречается редко).

Посев на анаэробные микроорганизмы показан детям с факторами риска анаэробного сепсиса (иммунодефицит, инфекции головы, шеи, брюшной полости. Повысить надежность диагностики грибковых инфекций можно с помощью посева крови метода лизиса-центрифугирования (для этого Wampoь Cranbury, NJ выпускает специальную систему). Оптимальные методики посева крови для развивающихся стран, где высока частота бактеремий, вызванных Salmonella spp., не разработаны.

Посев спинномозговой жидкости (СМЖ). Спинномозговая жидкость (СМЖ) необходимо быстро доставить в лабораторию, где ее подвергают центрифугированию, чтобы повысить концентрацию микроорганизмов для микроскопического исследования. Обычно СМЖ высевают на кровяной или шоколадный агар, на которых хорошо растут основные возбудители менингита. Если подозревается туберкулезный менингит, это обязательно отмечают в направлении.

Посев мочи. Мочу получают путем сбора средней порции струи, катетеризации или надлобковой пункции. Моча, собранная с помощью пластикового пакета, прикрепленного к промежности, обычно загрязнена сопутствующей микрофлорой и для посева непригодна (невозможно интерпретировать его результаты). Мочу необходимо быстро доставить в лабораторию. Это обусловлено тем, что время деления энтеробактерий составляет 20-30 мин и любая задержка с посевом делает подсчет концентрации микроорганизмов ненадежным. Если немедленно доставить мочу невозможно, ее помещают в холодильник.

Системы для посева, содержащие покрытые питательной средой лопаточкой обеспечивают быстрый посев, однако обнаружить с их помощью изолированный рост сложно, поскольку для исследования на чувствительность к антимикробным средствам требуются отдельные колонии. Если моча получена с помощью катетера, диагностически значимым считается наличие 103 микроорганизмов в 1 мл, а если путем cбора средней струи — 105 микроорганизмов в 1 мл. Тем не менее у девушек-подростков и молодых женщин иногда при инфекциях мочевых путей число микроорганизмов не достигает вышеприведенных цифр (особенно это относится к бактериальному уретриту и грибковым инфекциям). При окраске по Граму наличие 1 микроорганизма в поле зрения при работе с иммерсионным объективом) соответствует 105 микроорганизмам и более в 1 мл мочи.

Посевы при инфекциях половых органов. При подозрении на ЗППП мазки берут из половых органов, прямой кишки и зева, чтобы максимально поысить надежность диагностики. Neisseria gonorrhorea быстро погибает, поэтому сразу после взятия материал высевают на среду Тайера-Мартина или аналогичную, подогретую до комнатной температуры. Для получения культуры Chlamydia trachomatis берут мазки из мочеиспускательного канала с помощью специального ватного тампона на алюминиевом стержне. Для взятия мазков-отпечатков из канала шейки матки используются также тампоны на пластиковом или алюминиевом стержне. Chlamydia trachomatis выращивают в культуре клеток, которые затем исследуют методом прямой иммунофлюоресценции. В последнее время все шире применяется иммуноферментный анализ (ИФА).
Прямая иммунофлюоресценция или ПЦР. Эти методы более эффективны, чем посев на хламидии.

Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021

Бакпосев спинномозговой жидкости и чувствительность к антибиотикам

Спинномозговая жидкость или ликвор - это жидкость, которая непосредственно контактирует с центральной нервной системой, то есть головным и спинным мозгом.

Ликвор вырабатывается в сосудистых сплетениях желудочков головного мозга и обеспечивает постоянство внутренней среды, путем транспорта биологически активных веществ, выведении продуктов метаболизма нервных клеток, регулирует внутричерепное давление и защищает от механических воздействий. У здорового человека ликвор стерилен, он может содержать глюкозу, белок и некоторые химические элементы.

Наличие микрофлоры в ликворе - это признак тяжелейших заболеваний, которые требуют оперативного лечения, для предотвращения тяжелейших неврологических нарушений, таких как парезы, параличи и т.д.

Несвоевременное лечение может привести к летальному исходу, что требует от врачей быстрой тактики подбора правильного медикаментозного лечения пациента. Для наиболее быстрого лечения больного необходимо использовать только те антибиотики, к которым чувствительны болезнетворные бактерии, именно с этой целью используется посев спинномозговой жидкости.

Показания для проведения анализа

менингит;
менингококцемия; ;
арахноидит;
миелит.

Методика проведения анализа

Забор ликвора производят в хирургическом манипуляционном кабинете. Пациент должен лежать на боку с приведенными к животу ногами. Поверхность кожи обрабатывают дезинфицирующим раствором. Затем проводят инфильтрационную анестезию, с целью предотвращения болевого синдрома. После чего иглой Бира с мандреном делают прокол между остистыми отростками 3 и 4 поясничных позвонков, которые находят путем проведения условной линии между крыльями подвздошных костей. Иглу вводят вглубь приблизительно на 5-7 см до проникновения в позвоночный канал, откуда и производят забор ликвора. Первые несколько капель ликвора сливают, т.к. он содержит эритроциты из сосудов мягких тканей. Затем ликвор набирают в стерильную емкость.

После проведения процедуры человек должен находится в лежачем положении не менее двух часов. Ликвор доставляют в лабораторию, где подготавливают ряд пробирок по числу исследуемых антибиотиков.

Врач-лаборант проводит инокуляцию путем разведения стандартной микробной взвеси на питательной среде, полученный раствор вводят в каждую пробирку, после чего в каждую пробирку добавляется исследуемый антибиотик. Пробирки помещают в термостат на сутки.

Интерпретация полученных результатов

Через сутки вынимают пробирки из термостата и оценивают рост микрофлоры. Если рост микрофлоры отсутствует, считают, что бактерии чувствительны к нему, если рост обнаружен, то не чувствительны.

Незначительный рост расценивается как малочувствительность к антибиотику.

Составляется антибиотикограмма, где указывается чувствительность всех исследуемых антибиотиков.

На основании клинических и рутинных ликворологических данных в ранние сроки развития менингита не всегда можно установить бактериальную этиологию болезни, что снижает вероятность проведения оптимальной терапии. Комплексное детальное исследование спинномоз

Basing on clinical and routine liquorologic data at the early stages of the development of meningitis, it is not always possible to establish a bacterial etiology of the disease that reduces the likelihood of optimal therapy. A comprehensive detailed study of the cerebrospinal fluid is of great importance for the diagnosis, effective treatment and prediction of outcome of disease.

Бактериальные гнойные менингиты (БГМ) занимают ведущее место в структуре нейроинфекций. Несмотря на существенные успехи в лечении БГМ летальность на протяжении последних 40 лет остается на стабильном уровне 6–24% в зависимости от этиологии БГМ и качества лечения [1–5]. Исследования, проведенные в 2008–2014 гг., повысили качество оказания медицинской помощи больным БГМ благодаря в том числе разработке и внедрению новых методов исследования спинномозговой жидкости (СМЖ): полимеразной цепной реакции (ПЦР), уровня лактата, D-димера фибрина (D-ДФ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и ее изоформ, фракций белка, рН, рО₂ и рСО₂, исследованию показателей местного гуморального и клеточного иммунитета.

Материалы и методы исследования

Исследована СМЖ у 1806 больных БГМ различной этиологии, группу сравнения составили 25 больных серозными вирусными менингитами и 10 пациентов с невоспалительным поражением центральной нервной системы (ЦНС). Спинномозговая пункция осуществлялась при поступлении в стационар (острый период болезни), на 3–5 дни (осложненное течение) и на 8–18 дни лечения.

Результаты исследования

По результатам различных методов диагностики за последние 7 лет были выявлены значительные изменения в структуре БГМ. По-прежнему ведущими возбудителями БГМ (64%) являются менингококк и пневмококк, причем отмечается снижение числа больных менингококковым менингитом в 1,25 раза (50,1–41%). Гемофильной менингит регистрируется у детей до 5 лет, и в связи с применением вакцинации число больных снизилось в 2,5 раза (с 9,9% до 4,0%). Существенным является возрастание за последние 5 лет роли стафилококкового менингита до 22,3%. Заболеваемость пневмококковым менингитом сохраняется на стабильно высоком уровне (23%). В отдельных случаях возбудителями БГМ являлись листерии, клебсиеллы, различные виды стрептококков, грамотрицательные бактерии — не более 9% (рис. 1).

При эффективной антибактериальной терапии уже через 2–3 суток концентрация лактата снижается в 1,5–2,0 раза и более, при отсутствии эффекта, неблагоприятном исходе болезни положительная динамика отсутствовала, что свидетельствует о сохранении возбудителем биологической активности в субарахноидальном пространстве. Таким образом, лактат СМЖ может использоваться как диагностический, дифференциально-диагностический и прогностический биохимический маркер при БГМ. Нами установлено наличие при менингитах в СМЖ компонентов системы гемостаза и фибринолитической активности. Наибольший интерес представляет определение D-ДФ, являющегося основным продуктом фибринолиза [13–15]. В норме уровень D-ДФ в СМЖ не превышает 0,5 µг/мл (500 мг/мл). В остром периоде болезни (при поступлении) в субарахноидальном пространстве количество его возрастает и составляет выше 1,0 µг/мл у 90% обследованных. В процессе фибринолиза воспалительного гнойного экссудата, на 3–7 дни лечения количество D-ДФ в СМЖ продолжало увеличиваться в среднем в 1,7 раза (особенно при пневмококковой этиологии менингита) и варьировало у отдельных больных от 3 до 21 µг/мл (в среднем 13,5 ± 1,41 µг/мл), что было достоверно выше (p 0,05) по всем параметрам. Нами установлено, что между показателями клеточного и гуморального иммунитета в крови и СМЖ имеются существенные различия. В СМЖ происходила значительная большая и качественно отличная от крови активация показателей иммунитета. Так, ИРИ в СМЖ составил 3,0 ± 0,4, в крови 1,9 ± 0,3 (р 4+ до 62,7 ± 5,4% (в крови 45,1 ± 4,8%, р 8+ , а в крови — NKT. Одновременно активируется и В-клеточная система и в СМЖ происходит накопление Ig различных классов. Несмотря на то, что содержание Ig в СМЖ было во много раз ниже, чем в крови, их концентрация в пересчете на 1 г белка была существенно выше, что позволяет утверждать о продукции Ig непосредственно в субарахноидальном пространстве. Уровень Ig в г% белка также существенно различался. Содержание IgА на грамм белка в СМЖ составляло 0,150 г%, в крови — 0,043 г% (р

М. В. Нагибина* , 1 , кандидат медицинских наук
Ю. Я. Венгеров*, доктор медицинских наук, профессор
Д. В. Чернышев**
Т. М. Коваленко**
Т. Н. Молотилова**, кандидат медицинских наук
Е. П. Михалинова**
С. Е. Раздобарина**
Т. С. Свистунова**, кандидат медицинских наук
Е. В. Беликова**
Л. Б. Байкова**
Т. Ю. Смирнова**
А. П. Сафонова***

* ГБОУ ВПО МГМСУ им. А. И. Евдокимова МЗ РФ,
** ГБУЗ ИКБ № 2 ДЗМ,
*** ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора РФ, Москва

Читайте также: