Посев воды на клостридии

Обновлено: 19.09.2024

Сульфитредуцирующие клостридии представляют собой грамположительные спорообразующие палочки крупного размера. Микроорганизмы данной группы отличаются способностью восстанавливать сульфиты до сульфидов. Данное свойство активно применяется при их определении в лабораторных условиях.

Учитывая, что умением редуцировать сульфиты отличаются только споровые анаэробы, имеющие кишечное происхождение, данная их особенность позволила отнести представленную группу микроорганизмов к санитарно-показательным. При этом самым распространенным представителем сульфитредуцирующих клостридий является Clostridium perfringens.

Данный микроорганизм относится к постоянным консорбентам кишечного тракта, но при этом имеет меньшую численность, чем более распространенный род E. coli. Споры СРК отличаются высокой устойчивостью к воздействиям окружающей среды. С учетом данной особенности, при обнаружении бактерий можно судить о давнем фекальном загрязнении воды.

О роли сульфитредуцирующих бактерий как индикаторах загрязнения

Если предметно говорить о ценности спор СРК как индикатора фекального загрязнения, то она довольно невысока. Связано это с тем, что данные грамположительные микроорганизмы отличаются умением размножаться в окружающей среде при благоприятных условиях. Это означает, что они могут долгое время находиться в жидкости, усложняя тем самым интерпретацию результатов исследований. Это также касается и воды, хотя наиболее интенсивный рост наблюдается в почве.

Однако это не значит, что от таких бактерий нет пользы вообще. Сульфитредуцирующие клостридии могут выступать в роли важного индикатора оценки качества обеззараживания воды, так как отличаются устойчивостью к агрессивным воздействиям не только внешней среды, но и дезинфицирующих средств и стерилизующих приемов. Микроорганизмы данной группы являются первыми, пробивающими барьер, который может появляться при дефектах в работе систем обеззараживания.

Также бактерии могут относиться к определителям биологического загрязнения воды. В частности, их обнаружение во взятом образце может свидетельствовать о возможном присутствии цист и ооцист простейших яиц гельминтов, которые имеют схожесть по уровню устойчивости.

Особенности учета спор СРК в Российской Федерации

В РФ количественный учет грамположительных спорообразующих бактерий ведется в случае проведения санитарных исследований воды в открытых водоемах, а также при контроле качества водоподготовки. В данном случае анализ проб на споры СРК выполняется с применением среды Вильсон-Блера. В других случаях потребуется непосредственное обращение в сертифицированную лабораторию для заказа услуги отбора проб и проведения необходимых анализов в самом испытательном центре.

Определение сульфитредуцирующих бактерий в воде

В наши дни для определения и учета сульфитредуцирующих бактерий в пробах воды задействуются высокочувствительные и высокоспецифичные среды, в которых находятся соли тиогликолевой кислоты, а также добавки различных антибиотиков. Использование солей позволяет добиться более высокой степени анаэробиоза, за счет чего увеличивается чувствительность метода и точность получаемого результата.

Микробиологический анализ воды

Также для оценки качества работы водоочистных систем может проводиться микробиологический анализ на наличие данного вида спор. В рамках исследования используется особый метод, направленный на выращивание посевов в железно-сульфитном агаре – для этого создаются условия, близкие к анаэробным – а также подсчет количества колоний черного цвета.

При осуществлении анализа проба воды, помещенная в пробирки, прогревается на водяной бане при температуре 75 градусов с погрешностью +/- 5 градусов. Процедура выполняется на протяжении 15 минут. Если исследуется хлорированная вода, прогрев необязателен.

Определение бактерий в воде может производиться одним из трех методов – фильтрования в пробирках, в чашках Петри или прямым посевом.

Определение фильтрованием в пробирках подразумевает поддержку высоких показателей температуры среды в течение посева (от 70 до 80 градусов). После завершения обработки выбранного количества воды, фильтр помещается в пробивку с горячим агаром, распрямляя его по стенкам. По завершении посева для создания необходимых условий пробирка быстро охлаждается, а посевы культивируются в течение 16-18 часов при температуре 44 градуса.
Для фильтрования при помощи чашек Петри используются емкости объемом 55-60 мл, заливающиеся небольшим слоем железо-сульфитного агара. По завершении процесса фильтр помещается на застывшую питательную среду – при этом нужно не допустить появления пузырьков воздуха. После производится культивация посевов в идентичных первому методу условиях.
Прямой посев производится по схожей с фильтрованием схеме. При этом количество добавляемых проб может отличаться в зависимости от выбранных емкостей. В две пробирки объемом от 30 мл помещается по 10 мл образца, в то время как в четыре по 15 мл – 5 мл образца.

Учет результатов производится на основании количественного подсчета. При этом ему подлежат только посевы, в которых получаются изолированные колонии, имеющие черный цвет. Они могут вырастать на фильтрах или в питательной среде. Результат исследования определяется числом колониеобразующих единиц в 20 мл воды. Нормальным показателем будет отсутствие микроорганизмов в данном количестве жидкости.

Мы имеем многолетний опыт работы.
В нашем штате – квалифицированные химики и микробиологи.
В распоряжении персонала испытательного центра – высокочувствительное новейшее оборудование, для полноценного раскрытия возможностей которого используются современные методы проведения исследований и пробоподготовки.
Регулярный контроль качества исследований позволяет избежать допущения малейших погрешностей.

За время работы лаборатории в достоверности и высочайшем качестве выполняемых нами исследований убедилось большое количество клиентов, которые являются как физическими, так и юридическими лицами. Проведение анализа воды на содержание СРК – это гарантия получения точных результатов в кратчайшие сроки.

Сульфитредуцирующие клостридии - спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, редуцирующие сульфит натрия на железосульфитном агаре при температуре 44 +/- 1 °C в течение 16 - 18 ч.

8.4.2. Принцип метода

Метод основан на выращивании посевов в железосульфитном агаре в условиях, приближенных к анаэробным, и подсчете числа черных колоний.

8.4.3. Выполнение анализа

8.4.3.1. Пробу воды 20 мл прогревают на водяной бане в пробирках при температуре 75 +/- 5 °C в течение 15 мин. для исключения вегетативных форм.

При исследовании хлорированной воды прогревание пробы можно не производить.

Из каждой пробы питьевой воды делают посев или фильтруют 20 мл. При необходимости подбирают объемы с таким расчетом, чтобы в посевах (на фильтрах) выросло не более 10 - 15 колоний. При этом ориентируются на результаты предыдущих исследований.

Фильтрование воды производят в соответствии с требованиями, изложенными в п. 7.

8.4.3.2. Определение методом фильтрования в пробирках

Перед посевом пробирки с железосульфитным агаром, приготовленным по 5.8, расплавляют на водяной бане (не кипятить!). В течение посева поддерживают среду нагретой до 70 - 80 °C в водяной бане.

После фильтрования установленного объема воды мембранный фильтр фламбированным пинцетом берут за два противоположных края и согнутый в виде трубочки помещают в пробирку с горячим агаром. Сторона фильтра с осевшими бактериями обращена внутрь. При этом фильтр распрямляется и располагается по стенке пробирки.

Сразу же после посева пробирку с агаром и фильтром для создания анаэробных условий быстро охлаждают, помещая в емкость с холодной водой. Культивируют посевы при 44 +/- 1 °C в течение 16 - 18 ч.

8.4.3.3. Определение методом фильтрования в чашках Петри

Чашки Петри диаметром 55 - 60 мм заливают тонким слоем железосульфитного агара. После фильтрации фильтр поместить фильтрующей поверхностью вниз на застывшую питательную среду так, чтобы под фильтром не было пузырьков воздуха. Затем заливают расплавленным железосульфитным агаром до верхнего края чашки, чтобы крышка плотно прилегала к среде для создания анаэробных условий. Культивируют посевы при 44 +/- 1 °C в течение 16 - 18 ч.

8.4.3.4. Определение прямым посевом

Железосульфитный агар во флаконах и пробу воды готовят, как это описано в п. 8.4.3.1.

В стерильные пробирки вносят:

- по 10 мл в 2 пробирки (объемом не менее 30 мл) или

- по 5 мл в 4 пробирки (объемом по 15 мл).

Посевы заливают горячим железосульфитным агаром в количестве, превышающем объем воды в 2 раза. Среду заливать по стенке пробирки, избегая образования пузырьков воздуха. После этого пробирку быстро охлаждают, помещая ее в емкость с холодной водой для создания анаэробных условий. Посевы инкубируют при 44 +/- 1 °C в течение 16 - 18 ч.

8.4.4. Учет результатов

Количественному учету подлежат только те посевы, где получены изолированные колонии. Подсчитывают черные колонии, выросшие как на фильтрах, так и в толще питательной среды.

Результат анализа выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды.

При отсутствии роста черных колоний на всех фильтрах дают ответ "не обнаружено в 20 мл воды".

При невозможности учета колоний из-за сливного роста результат оценивается как качественный, в протоколе отмечают "обнаружено в 20 мл". При необходимости получения количественного результата анализ повторяют.

Санитарно-микробиологический контроль над водами открытых водоёмов, качества питьевой воды.

В контроль над поверхностными водоёмами входят исследование и заключение о возможности использовать водоём (для питьевых, хозяйственных или других нужд), выяснение причин фекального загрязнения, определение способности водоёма к самоочищению. Проводят определение ОМЧ, выделяют БГКП, кишечную палочку, энтерококки, стафилококки и патогенные микроорганизмы (сальмонеллы, холерные вибрионы, лептоспиры, шигеллы и энтеровирусы).

Количество последних не должно превышать 100 в 1 л в зоне купания и не более 20 в 1 л воды бассейнов и морской воды. В последние годы разработаны и предложены дополнительные критерии оценки санитарного состояния водоёмов, в которые включены показатели титра энтерококков и Clostridium petfringens, а также индекс бактериофагов.

Санитарно-микробиологический контроль качества питьевой воды

Санитарно-микробиологическое исследование питьевой воды включает определение ОМЧ, количества энтеробактерий, спор сульфитредуцирующих клостридии и колифагов.

Определение ОМЧ при оценке качества питьевой воды. ОМЧ позволяет оценить уровень микробного загрязнения питьевой воды, дополняя показатели фекального загрязнения, и одновременно позволяет выявить загрязнение из других источников (например, промышленные сбросы). Неожиданное увеличение ОМЧ (даже в пределах норматива), выявленное повторно, служит сигналом для поиска причины загрязнения. Также этот показатель незаменим для срочного обнаружения в питьевой воде массивного микробного загрязнения неизвестной природы. Из каждой анализируемой пробы должен быть сделан посев не менее чем на две чашки Пётр и объёмом 1 мл. Через 24 ч проводят подсчёт выросших колоний на обеих чашках, результаты суммируют и делят на два. Окончательный результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой пробы воды. В 1 мл питьевой воды должно быть не более 50 КОЕ.

Определение количества энтеробактерий. При проведении исследований не ограничиваются обнаружением БГКП, но используют более широкое понятие — бактерии семейства Enterobacteriaceae и термотолерантные колиформные бактерии.

• Бактерии семейства Enterobacteriaceae включают грамотрицательные, оксидаза-отрицатель-ные, споронеобразующие палочки, растущие на средах с лактозой (например, Эндо) и ферментирующие глюкозу до кислоты и газа при температуре 37 °С в течение 24 ч. Обнаружение в питьевой воде бактерий семейства Enterobacteriaceae указывает на потенциальную эпидемическую опасность водопользования. Показатель «бактерии семейства Enterobacteriaceae* — основной нормируемый показатель, обеспечивающий наиболее надёжный контроль присутствия в воде практически всех представителей кишечных бактерий.

• Термотолерантные колиформные бактерии обладают всеми признаками бактерий семейства Enterobacteriaceae, и, кроме того, ферментируют лактозу с образованием альдегида, кислоты и газа при температуре 44 °С в течение 24 ч. Термотолерантность быстро утрачивается, поэтому обнаружение бактерий с таким свойством свидетельствует о недавнем попадании в воду кишечных бактерий (свежее фекальное загрязнение).

Численное выражение результата анализа характеризует степень фекального загрязнения воды. Бактерии семейства Enterobacteriacea и термотолерантные бактерии должны отсутствовать в 300 мя питьевой воды.

Выявление спор сульфитредуцирующих клостридий. Споры сульфитредуцирующих клостридий более устойчивы к обеззараживанию и действию неблагоприятных факторов окружающей среды, чем другие индикаторные бактерии. На основании этого свойства показатель рекомендован для оценки эффективности технологических процессов очистки воды. Особое значение этот показатель имеет при оценке первичного хлорирования, так как оно инактивиру-ет практически все индикаторные бактерии. Обнаружение клостридий в воде перед поступлением в распределительную сеть указывает на недостаточную очистку и на то, что устойчивые к обеззараживанию патогенные микроорганизмы, вероятно, не погибли при очистке. Споры сульфитредуцирующих клостридий должны отсутствовать в 20мл исследуемой питьевой воды.

Определение количества колифагов. Наиболее часто содержание колифагов в питьевой воде определяют титрационным методом, включающим предварительное подращивании их в среде обогащения (культура Escherichia coli на питательном агаре) с последующим выявлением бляшек колифага на газоне Е. coli В 100 мл исследуемой воды должны отсутствовать БОЕ колифагов.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

В таблице 1 представлены микробиологические показатели действующего норматива СанПиН 2.1.4.1074-01 для питьевой воды:

Таблица 1. Микробиологические нормативы для питьевой воды

Показатель	Норматив СанПиН 2.1.4.1074-01
Общая микробная численность	Не более 50 КОЕ в 1 мл
Общие колиформные бактерии	Отсутствие в 100 мл
Термотолерантные колиформные бактерии	Отсутствие в 100 мл
Колифаги	Отсутствие в 100 мл
Споры сульфитредуцирующих бактерий	Отсутствие в 20 мл

Стандартный микробиологический анализ

Стандартный микробиологический анализ питьевой воды в МГУ включает определение трех показателей: общего микробного числа, количества общих колиформных и термотолерантных колиформных бактерий.

Расширенный микробиологический анализ

Расширенный микробиологический анализ воды включает анализ пяти показателей: общего микробного числа, количества общих колиформных бактерий, количества термотолерантных колиформных бактерий, титр колифагов и содержание спор сульфитредуцирующих бактерий.

Микробиологический анализ поверхностных водоёмов (пруды, реки, бассейны)

Часто на наших участках или поблизости имеются водоемы, где мы и наши дети с удовольствием любим провести время. Конечно, вода в данных водоемах не является питьевой, но ее безопасность для человека также, как и питьевая, регламентируется. В таблице 2 представлены микробиологические показатели действующего норматива по гигиеническим требованиям к охране поверхностных вод (СанПиН 2.1.5.980-00)

Таблица 2. Микробиологические нормативы для рекреационного водопользования, а также в черте населенных мест

Показатель	Норматив СанПиН 2.1.5.980-00
Общие колиформные бактерии	Не более 500 КОЕ в 100 мл
Термотолерантные колиформные бактерии	Не более 100 КОЕ в 100 мл
Колифаги	Не более 100 БОЕ в 100 мл
Возбудители кишечных инфекций (анализ бактерий из сем. Enterobacteriaceae рода Salmonella)	Вода не должна содержать возбудителей кишечных инфекций (полное отсутствие в 1000 мл)

Стандартный микробиологический анализ (поверхностные водоёмы)

Микробиологический анализ воды, предназначенной не для питья, включает определение количества двух показателей: общих колиформных и колиформных термотолерантных бактерий.

Расширенный микробиологический анализ (поверхностные водоёмы):

Помимо двух основных показателей мы предлагаем провести дополнительный анализ на содержание: колифагов, условно-патогенных дрожжей и микромицетов (частых спутников опортунистических заболеваний) и индекса самоочищения водоёма.

Определение бактерий рода Salmonella и рода Enterococcus

При значительном превышении нормативов СанПиН 2.1.5.980-00, а также возможном фекальном загрязнении водоёма, мы предлагаем провести анализ на наличие возбудителей кишечных инфекций (род Salmonella и Enterococcus).

Глоссарий

Общая микробная численность (ОМЧ)

Метод определяет в питьевой воде общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре 37 °С в течение 24 часов, видимые с увеличением в 2 раза. Данный индикатор выявляет потенциальных бактерий, способных причинить вред здоровью человека.

Общие колиформные бактерии (ОКБ)

Общие колиформные бактерии (ОКБ) – грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, способные расти на дифференциальных лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (37+1) °С в течение (24-48) часов. Многие представители данной группы являются микроорганизмами нормальной микрофлоры желудка, поэтому превышение данной группы микроорганизмов может говорить о возможно антропогенном (в том числе и фекальном) загрязнении воды.

Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ)

Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) входят в число общих колиформных бактерий, обладают всеми их признаками и, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (44±0,5) °С в течение 24 часов. Также, как и ОКБ являются индикаторной группой, однако более устойчивые в окружающей среде: вот почему обнаружение данной группы микроорганизмов в воде может говорить об однозначном загрязнении ее продуктами жизнедеятельности человека.

Колифаги

Споры сульфитредуцирующие клостридии

Сульфитредуцирующие клостридии – спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, являющиеся дополнительным микробиологическим показателем фекального загрязнения водоема. В отличие от относительно неустойчивых колиформных и термотолерантных колиформных бактерий, споры клостридий могут сохраняться в водоемах долгое время. Клостридии встречаются в кишечнике человека и домашних животных, однако, при попадании с водой в большом количестве могут вызвать пищевые отравления. К сульфитредуцирующим клостридиям относятся в том числе и опасные для человека клостридии (Clostridiumbotulinum, Clostridium perfringens, Clostridium tetani), вызывающие тяжелейшие заболевания. Согласно действующему нормативу (СанПиН 2.1.4.1074-01) споры клостридий должны отсутствовать в 20 мл воды.

Условно-патогенные дрожжи и микромицеты

К условно-патогенным дрожжам и микромицетам (плесени) относят большую неоднородную группу грибных организмов, способных сапротрофно расти при 37 °С. В нее входят такие представители, как Candida albicans и Cryptococcus neoformans, которые являются частым фактором оппортунистических заболеваний человека, вызывая кандидозы (грибковые заболевания кожи), молочницы и проч. Другие организмы микромицеты (Cladosporium cladosporioides, Aspergillusniger) могут являться активными сенсебилизаторами аллергических реакций, а иногда и самими аллергенами. В РФ не нормируется вода по плесеням и дрожжевым организмам в воде.

Определение индекса самоочищения (из МУК 4.2.1884-04)

Общее число микроорганизмов не нормируется в воде водоемов в зонах рекреаций, поскольку уровень этой группы микроорганизмов в большей мере зависит от природных особенностей каждого объекта, времени года и т.п.

Однако при выборе нового источника водоснабжения или места рекреации в воде водоёмов дополнительно следует определять общую микробную численность, вырастающую:

при температуре 37 °С в течение 24 часов;
при температуре 22 °С в течение 72 часов.

ОМЧ при 37 °С представлена большей частью алохтонной микрофлорой (внесенную в водоем в результате антропогенного загрязнения, в том числе фекального);
ОМЧ при 20-22 °С представлена, помимо алохтонной, аборигенной микрофлорой (естественной, свойственной для данного водоёма).

Соотношение численности этих групп микроорганизмов позволяет судить об интенсивности процесса самоочищения. При завершении процесса самоочищения коэффициент ОМЧ 22 °С/ ОМЧ 37 °С. В местах загрязнения хозяйственно-бытовыми сточными водами численные значения обеих групп близки.

Показатель позволяет получить дополнительную информацию о санитарном состоянии водоемов, источниках загрязнения, процессах самоочищения.

Читайте также: