Произвести посев выделенной чистой культуры бактерий на среды для изучения биохимических свойств

Обновлено: 07.07.2024

1. Выделение чистой культуры является основой бактериологической работы, т.к. в практической деятельности приходится иметь дело с материалом, содержащим смесь микробов (гной, испражнения и т.д.), идентификация же вида возможна только тогда, когда бактерии получены в чистом, изолированном виде.

2. Для получения чистой культуры необходимо отделить бактериальные клетки разных видов друг от друга. По способу их отделения различают две основные группы методов выделения чистых культур: а) методы, основанные на механическом разделении; б) методы основанные на различиях в биологических свойствах микроорганизмов.

3. Чаще всего используются механические способы разъединения бактериальных клеток – специальные методы посева:

а) рассев шпателем по Дригальскому: берут три чашки Петри с питательным агаром; на первую чашку наносят петлей или пипеткой каплю исследуемого материала и растирают шпателем по всей поверхности агара; затем шпатель переносят во вторую чашку и втирают оставшуюся на шпателе культуру в поверхность питательной среды; аналогичным образом производят посев шпателем и в третьей чашке. На первой чашке вырастает максимальное количество колоний; на третьей – минимальное, где вырастают отдельные колонии, пригодные для выделения чистой культуры;

б) рассев петлей ("штрихами" или "сеткой"): берут одну чашку Петри с питательным агаром; петлей на небольшом участке питательного агара делают сплошной посев исследуемого материала, а затем, отступив от засеянной площадки, делают посев прерывистыми штрихами; в том месте, где на агар попало большое количество микробных клеток, рост будет в виде сплошного штриха, а на штрихах с небольшим количеством клеток вырастут отдельные колонии;

в) фильтрация: исследуемый материал пропускают через специальные фильтры с определенным диаметром пор и таким образом разделяют микроорганизмы по величине (в основном применяется для очистки вирусов от бактерий).

Т.о., при помощи специальных методов посева добиваются роста микроорганизмов на плотных питательных средах в виде изолированных колоний различных видов бактерий, содержащихся в исходном материале в виде смеси, т.е. получают чистую культуру из одной клетки, а далее осуществляют ее пересев.

4. Биологические способы выделения основаны на различиях в биологических свойствах микроорганизмов:

а) метод Шукевича – исследуемый материал засевают в конденсационную воду скошенного агара, подвижные формы микробов при размножении как бы "вползают" на поверхность агара из конденсационной воды (Proteus vulgaris), отсевая верхние края культуры в воду свежескошенного агара, и, повторяя это несколько раз, можно получить чистую культуру;

б) метод прогревания – прогревают материал при 80° С на водяной бане 10-15 минут, при этом вегетативные формы погибают, а споры остаются и при посеве на соответствующую питательную среду прорастают (этот метод позволяет отделить споровые формы от неспоровых);

в) бактериостатический метод – при посеве в исходный материал добавляют некоторые химические вещества или антибиотики, которые угнетают рост одних микроорганизмов, не влияя на другие (например, пенициллин задерживает рост грамположительных микроорганизмов, не влияя на грамотрицательные; 5 % р-р H₂SO₄ убивает большинство микроорганизмов, а туберкулезная палочка выживает);

г) метод обогащения – посев на элективные питательные среды;

д) метод заражения лабораторных животных или растений – заражают исследуемым материалом восприимчивые к возбудителю виды животных или растений; после появления признаков заболевания производят посев органов и тканей на питательные среды (применяют для выделения патогенных видов микроорганизмов и отделения их от сапрофитов).

5. Для выделения чистых культур большинства бактерий обычно затрачивается не более 2-3 суток (для выращивания микобактерий туберкулеза – 4-6 недель). Процесс выделения чистой культуры можно разделить на три этапа: а) отделение чистой культуры; б) накопление чистой культуры; в) идентификация – заключение о видовой принадлежности.

6. Первый этап (1-ый день):

а) из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают по Граму (или другим методом) и микроскопируют;

б) производят посев исследуемого материала (смеси бактерий) на чашку Петри с МПА штриховым методом или по методу Дригальского и ставят в термостат при 37° С на 24-48 часов (на этом этапе можно использовать и какой-либо биологический способ).

Второй этап (2-ой день):

а) наблюдают результаты посева и проводят описание колоний разных видов по следующим признакам: размер, форма, цвет, поверхность, форма края, структура, консистенция;

б) из колоний готовят мазки и окрашивают по Граму для изучения морфологических и тинкториальных свойств; убеждаются в том, что колония содержит один вид бактерий;

в) осуществляют пересев одной или нескольких различных изолированных колоний в отдельные пробирки со скошенным МПА для накопления чистой культуры; выращивают в термостате при 37° С 24 часа.

Третий этап (3-ий день):

а) отмечают характер роста выделенной чистой культуры на МПА (визуально она характеризуется однородным ростом);

б) готовят мазок, окрашивают по Граму (или другим методом) и микроскопируют; при наличии чистой культуры обнаруживаются морфологически и тинкториально однородные клетки (исключение – полиморфные организмы);

в) производят посев на жидкие и полужидкие среды Гисса и МПБ для изучения биохимических (сахаролитических и протеолитических) свойств чистой культуры; оставляют в термостате при 37° С на 24 часа;

г) проводят идентификацию выделенной чистой культуры по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим и др. свойствам; делают окончательный вывод о видовой принадлежности выделенной чистой культуры.

Морфологические признаки – форма, расположение и размеры бактериальных клеток.

Тинкториальные признаки – отношение к различным красителям. Эти признаки изучают при микроскопическом исследовании мазков, окрашенных разными методами (например, по Граму) и нативных препаратов.

Культуральные признаки – морфологические особенности колоний и характер роста микроорганизмов на жидких и плотных питательных средах.

Биохимические признаки – способность ферментировать белки, углеводы и другие соединения с образованием различных продуктов (определяются набором ферментов).

В бактериологической практике иногда ограничиваются изучением сахаролитических и протеолитических признаков исследуемых бактерий, если это является достаточным для их идентификации.

В необходимых случаях проводят изучение других признаков, например, восстановление нитратов, декарбоксилирование аминокислот, образование оксидазы, плазмокоагулазы, фибринолизина и других ферментов, а также определение антигенной структуры, чувствительности к фагам, вирулентности и т.д. Для этого проводят дополнительные исследования по определению соответствующего маркера (фермента, антигена, чувствительности к фагам).

Образцы сочинений-рассуждений по русскому языку: Я думаю, что счастье – это чувство и состояние полного.

Основные идеи славянофильства: Славянофилы в своей трактовке русской истории исходили из православия как начала.

1.2. Идентификация по протеолитической активности E.coli. Разложение микробами белка сопровождается образованием индола, сероводорода, аммиака.

Реакция на сероводород. Исследуемую культуру засевают в МПБ, под пробкой укрепляют полоску бумаги, пропитанной ацетатом свинца. Почернение бумаги после инкубации при 37°С в течение 2 – 3 суток свидетельствует о наличии сероводорода. E.coli, в отличие от возбудителей брюшного тифа и паратифа В, не образует сероводород.

1.3. Проба на индол. Способ Эрлиха: в пробирку с культурой бактерий прибавляют 2 – 3 мл эфира, содержимое энергично перемешивают и добавляют несколько капель реактива Эрлиха (спиртовой раствор парадиметиламидобензальдегида с хлороводородной кислотой).

В присутствии индола наблюдается розовое окрашивание, при осторожном наслаивании образуется розовое кольцо.

2. Идентификация стафилококков по биохимическим признакам .

2.1. Определение каталазной активности стафилококков.

На предметное стекло наносят каплю 1 – 3% раствора пероксида водорода и вносят в нее с помощью петли бактериальную культуру. Каталаза разлагает пероксид водорода на кислород и воду. Выделение пузырьков O₂ свидетельствует о наличии у данного вида бактерий фермента каталазы.

Каталазной активностью обладают стафилококки в отличие от стрептокков.

2.2. Определение плазмокоагулазной активности стафилококков.

Плазмокоагулаза – фермент S.aureus сворачивающий фибрин за счет активации предшествующего в плазме крови протромбина, тем самым, защищает бактерии от клеточных и гуморальных факторов иммунитета.

В пробирку с цитратной плазмой вносят исследуемую культуру, помещают в термостат при (37 ± 1)°С и через 1, 2, 3, 18 и 24 ч проверяют наличие свертывания плазмы. Реакция считается положительной независимо от степени свертывания плазмы. В отличие от других стафилококков S.аureus обладает плазмокоагулазной активностью.

8.1. Техника посева и выделения чистых культур микроорганизмов

Доставляемый в лабораторию материал подвергают бактериологическому исследованию в тот же день. Техника посева зависит от характера засеваемого материала, консистенции питательной среды и цели исследования.

Для проведения посевов необходимы: подлежащий исследованию материал, питательные среды, бактериологическая петля, шпатели (стеклянные, металлические), пастеровские и градуированные пипетки, металлические кюветы или поднос для переноса засеянных чашек и металлические коробки для переноса пробирок, ведро или бачок с крышками для сброса отработанного инфицированного материала, спиртовая или газовая горелка.

Жидкий материал для посева берут петлей или пипеткой. При взятии петлей жидкость должна образовать в кольце петли тонкую прозрачную пленку – "зеркало". Пипетками пользуются в том случае, когда материал засевают в большом или точно отмеряемом объеме.

Способ взятия плотного материала определяется его консистенцией. При посевах чаще всего пользуются бактериологической петлей.

Все манипуляции, связанные с посевом и выделением микробных культур, производят над пламенем горелки. Бактериальную петлю перед взятием материала прокаливают в пламени горелки, затем ее остужают так, чтобы при соприкосновении с жидкой средой она не вызывала кипения жидкости, а прикосновение к агару не сопровождалось его плавлением. Для остуживания петли лучше всего погружать ее в конденсационную жидкость пробирки со стерильной питательной средой или прикасаться к крышке чашки Петри со стерильной средой. Нельзя остужать петлю прикосновением к поверхности питательной среды, даже свободной от микробного роста, так как на ней могут находиться колонии, не видимые простым глазом.

После окончания посева петлю прожигают повторно для уничтожения находящейся в ней микробной культуры или инфицированного микроорганизмами материала.

Пипетки и шпатели, использованные для посевов, опускают в дезинфицирующий раствор.

После посева на чашках Петри со стороны дна, на пробирках – в верхней трети надписывают название засеянного материала или ставят номер анализа и дату посевов.

8.1.1. Техника посевов на плотные и жидкие питательные среды

При посеве в жидкую питательную среду петлю с находящимся на ней материалом погружают в среду. Если материал вязкий и с петли не снимается, его растирают на стенке сосуда, а затем смывают жидкой средой. Жидкий материал, набираемый в пастеровскую или градуированную пипетку, вливают в питательную среду.
При посеве на скошенный мясопептонный агар пробирку берут в левую руку между I и II пальцами, чтобы основание пробирки находилось на поверхности кисти руки и посев осуществлялся под контролем глаза. Пробку из пробирки вынимают правой рукой IV и V пальцами, не прикасаясь к той ее части, которая входит внутрь пробирки. Остальные три пальца правой руки остаются свободными для взятия бактериологической петли, посредством которой производится посев. Петлю держат, как писчее перо. После вынимания пробки пробирку с питательной средой держат в наклонном положении во избежание попадания в нее посторонних микроорганизмов из воздуха.

При посеве на скошенный агар петлю с находящимся на ней пересеваемым материалом вводят в пробирку до дна, опускают плашмя на поверхность питательной среды и скользящими движениями наносят штрихи снизу вверх от одной стенки пробирки к другой (рис. 8.1).

• При посеве на поверхность плотной питательной среды из пробирки в чашки Петри пробирку фиксируют II, III и V пальцами левой руки, а крышку чашки Петри приоткрывают I и IV пальцами левой руки настолько, чтобы в образовавшуюся щель свободно проходили петля или шпатель (рис. 8.2). Небольшое количество исследуемого материала, взятого из пробирки бактериологической петлей, втирают в поверхность питательной среды у края чашки. Затем петлю прожигают, чтобы уничтожить избыток находящегося на ней материала. Линию посева начинают с того места, в котором находится материал. Бактериологическую петлю кладут плашмя на питательную среду, чтобы не поцарапать ее поверхность, и проводят штрихи по всей среде или по секторам, разграфив предварительно дно чашки (при условии, что среда прозрачна) на 4, 8 или 16 равных частей. Нужно стараться, чтобы штрихи, наносимые петлей, располагались как можно ближе друг к другу, так как это удлиняет общую линию посева и дает возможность получить изолированные колонии микробов в концевой ее части.
• Для равномерного распределения засеваемого материала по поверхности плотной питательной среды можно пользоваться вместо петли тампоном или шпателем.

При обилии в засеваемом материале микробов они растут в виде пленки, покрывающей всю поверхность питательной среды. Такой характер микробного роста получил название сплошного или газонного. Посев газоном производят, когда нужно получить большие количества микробной культуры одного вида.

Для посева материала в толщу плотной питательной среды готовят взвесь в стерильной водопроводной воде или в изотоническом растворе. Набирают 0,1–1 мл взвеси в пипетку (в зависимости от степени предполагаемого микробного загрязнения) и выливают в пустую стерильную чашку Петри. Вслед за этим чашку заливают 15–20 мл мясопептонного агара, расплавленного и остуженного до температуры 40– 45 "С (при такой температуре пробирка со средой, приложенная к щеке, не должна вызывать ощущения ожога). Для равномерного распределения исследуемого материала в питательной среде закрытую чашку с содержимым слегка вращают по поверхности стола.
Посев уколом в столбик питательной среды производят в пробирку со средой, застывшей в виде столбика. Пробирку берут в левую руку как обычно, и в центре столбика до дна пробирки вкалывают петлю с находящимся на ней материалом.
Калиброванной бактериологической петлей (диаметр 2 мм, емкость 0,005 мл) производят посев мочи на сектор А чашки Петри с простым агаром, сделав около 40 штрихов. Затем петлю прожигают и производят 4 штриховых посева из сектора А в сектор I, из сектора I в сектор II и из сектора II в сектор III, каждый раз после прожигания петли (рис. 8.3).

Чашки инкубируют при температуре 37 °С в течение 18– 24 ч, после чего подсчитывают количество колоний, выросших в разных секторах, и определяют количество бактерий в 1,0 мл по приведенной табл. 8.1 (этот метод принят для определения степени бактериурии).

Таблица 8.1. Определение количества бактерий в 1 мл методом секторных посевов*

Количество колоний в секторах

Количество бактерий в 1 мл

*Приказ № 535 от 22 апреля 1985 г. "Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений" (Москва, 1985).

8.1.2. Методы выделения чистых культур

Чистой культурой принято называть совокупность однородных микроорганизмов, относящихся к одному виду, полученных из массы одной колонии, клетки которой идентичны по морфологическим, тинкториальным, культуральным, метаболическим и генетическим признакам, так как по существующим представлениям микробная колония является популяцией бактериальных клеток, возникшей в результате размножения единственной материнской клетки. Микробная колония являются аналогом клона.

Чистые культуры микроорганизмов одного вида, выделенные из различных источников, могут отличаться друг от друга незначительным отклонением морфологических, культуральных или биохимических признаков, не выходя за пределы своего вида или подвида. Такие культуры называют штаммами. Вместо ранее именованных типов в зависимости от характера изменившегося признака их обозначают морфоварами (отличные по морфологическим признакам), сероварами (имеющие антигенные отличия), биоварами (отличающиеся биологическими свойствами).

Чистая культура необходима для изучения морфологических, культуральных, биохимических и антигенных свойств, по совокупности которых определяется видовая принадлежность исследуемого микроорганизма.

Для выделения чистых культур микробов из материалов, содержащих обильную смешанную микрофлору, предложено много различных методов. Наибольшее распространение получил метод механического разъединения микроорганизмов, находящихся в исследуемом материале, с целью получения изолированных колоний на поверхности или в глубине питательной среды. Очень широко применяются селективные питательные среды, стимулирующие развитие тех микроорганизмов, чистую культуру которых предполагается выделить. Некоторые виды микробов обладают высокой чувствительностью к воздействию определенных факторов внешней среды. Индивидуальная устойчивость микробов к тому или иному фактору была использована для разработки методов выделения чистых культур путем умерщвления сопутствующей микрофлоры. Этим способом производится выделение споровых форм микробов, устойчивых к действию высокой температуры, микобактерий туберкулеза, безразличных к действию концентрированных растворов минеральных кислот, в отличие от остальных микробов, содержащихся в мокроте.

При выделении чистой культуры патогенных микробов из патологического материала, загрязненного посторонней микрофлорой, прибегают иногда к заражению лабораторных животных, восприимчивых к тому виду микроба, который предполагается выделить из исследуемого материала. Биологический метод выделения чистой культуры применяется при исследовании мокроты на содержание в ней пневмококков, микобактерий туберкулеза.

Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху). Три пробирки, содержащие по 15 мл мясопептонного агара, ставят в водяную баню для расплавления агара. Расплавленную среду остужают до температуры 43–45 °С. В пробирку вносят одну бактериологическую петлю исследуемого материала. Для лучшего перемешивания материала со средой засеянную пробирку вращают несколько раз, зажав между ладонями. После этого одну петлю (прокаленную и остуженную) содержимого 1-й пробирки переносят во 2-ю и таким же образом из 2-й в 3-ю. Приготовленные разведения микробов выливают из пробирок в стерильные чашки Петри, обозначенные номерами, соответствующими номерам пробирок.

После застудневания среды с исследуемым материалом чашки помещают в термостат. Количество колоний в чашках с питательной средой уменьшается по мере разведения материала.

Выделение чистой культуры по способу Дригальского. Расплавленную питательную среду разливают в три чашки Петри. Застывшую среду обязательно подсушивают, так как влажная поверхность ее способствует образованию сливного роста. В первую чашку вносят одну каплю исследуемого материала и стерильным шпателем втирают его в поверхность питательной среды. Далее, не прожигая шпателя и не набирая нового материала, шпатель переносят во 2-ю, а затем и 3-ю чашки, втирая в поверхность питательных сред оставшийся на нем материал.

Метод рассева по поверхности, предложенный Дригальским, является наиболее употребительным для получения чистой культуры микробов. Вместо шпателя можно пользоваться петлей. Материал на питательной среде распределяют параллельными штрихами по всей чашке в одном направлении. Затем, повернув чашку на 90°, проводят штрихи в направлении, перпендикулярном первым штрихам. При таком способе посева материал, находящийся в петле, расходуется постепенно, и по линиям штрихов, нанесенных в конце посева, вырастают изолированные колонии микробов.

Выращивание и выделение чистых культур анаэробов. Для выращивания анаэробов необходимо создать определенные условия, сущность которых заключается в удалении молекулярного кислорода из питательной среды и пространства, окружающего эти культуры. Другим обязательным условием, обеспечивающим выделение анаэробов из исследуемого материала, является внесение большого количества посевного материала в питательную среду.

Единственным отличием питательных сред, применяемых для выращивания анаэробов, служит пониженное содержание в них свободного кислорода. Самым простым способом удаления растворенного кислорода является кипячение. Непосредственно перед посевом материала пробирки с питательными Средами кипятят на водяной бане в течение 10–20 мин. При кипячении из среды вытесняется воздух и, следовательно, удаляется кислород. Свежепрокипяченную питательную среду быстро охлаждают, погружая в лед или подставляя под струю холодной воды, чтобы не дать ей насытиться кислородом воздуха, и используют для посева. Для уменьшения диффузии кислорода из воздуха питательные среды заливают сверху стерильным вазелиновым или парафиновым маслом (толщина слоя 1–1,5 см). Засев среды производят пипеткой сквозь масло в наклонном положении пробирки.

В качестве редуцирующих веществ используют глюкозу, аскорбиновую кислоту, цистеин, гликокол, глутатион. Активно связываются с кислородом животные ткани паренхиматозных органов. На этом свойстве животных клеток основано приготовление питательной среды Китта – Тароцци (рецепт 161), широко применяемой для выращивания анаэробов. В жидкие питательные среды помещают иногда пористые вещества: вату, пемзу, которые адсорбируют на своей поверхности пузырьки воздуха.

Для создания бескислородных условий используют физические, химические и биологические факторы.

Физические способы культивирования анаэробов:

• способ Виньяля – Вейона. Берут 4–5 пробирок с 0,5 % расплавленным и охлажденным до температуры 40–45 °С сахарным агаром. В содержимое одной из них вносят пипеткой небольшое количество исследуемого материала и тщательно размешивают. Для уменьшения концентрации материала с целью получения изолированных колоний засеянную среду в количестве, соответствующем объему внесенного материала, переносят из 1-й пробирки во 2-ю, из 2-й в 3-ю. Затем содержимым каждой пробирки заполняют капилляры трех пастеровских пипеток.

Чтобы предупредить застывание питательной среды в момент насасывания ее в пипетки, пока их кончик не обломлен, пипетки погружают на 3–5 мин в стерильную воду с температурой 45–50 °С. После заполнения вытянутый конец трубки запаивают и помещают в стеклянный цилиндр с ватой на дне. Через 2–3 сут в столбике агара вырастают ясно видимые колонии микробов-анаэробов. Выросшие колонии легко изолировать. Для этого капилляр надрезают напильником выше уровня намеченной колонии, надламывают, а колонию микроба, находящуюся в агаре, извлекают петлей и пересевают в свежую питательную среду;

• выращивание анаэробов в условиях вакуума. Вакуумные условия для выращивания анаэробов создают в анаэростате или эксикаторе. Исследуемый материал или культуру микробов засевают в пробирки с жидкой средой или в чашки Петри с плотной питательной средой. Посевы помещают в анаэростат, затем присоединяют его к насосу и выкачивают воздух. Степень разреженности воздуха определяют по показаниям вакуумметра. Колонии анаэробов в вакуумных условиях растут на поверхности плотной питательной среды.

Химические методы выращивания анаэробов (метод Аристовского). Материал, исследуемый на наличие анаэробов, засевают на среду в чашки Петри и помещают их в эксикатор, на дно которого кладут химический поглотитель кислорода: гидросульфит натрия или пирогаллол. В расширенную часть сосуда устанавливают на подставке чашки с посевами. Прибор закрывают крышкой и помещают в термостат при температуре 37 *С на 24–48 ч.

Биологический метод выращивания анаэробов (по Фортнеру). В чашку Петри наливают толстым слоем 5 % кровяной агар с 1–2 % глюкозы. Посередине чашки в питательной среде вырезают стерильным скальпелем канавку шириной 1–1,5 см, которая делит питательную среду на две половины. Одну из них засевают культурой анаэробов или исследуемым на их наличие материалом, другую половину – культурой аэробов: чудесной палочкой (Serratia marcescens) или кишечной палочкой (Escherichia coli). Перед посевом чашки подсушивают в термостате, чтобы аэробы вместе с капельками влаги не могли попасть на другую сторону чашки. Засеянные чашки закрывают, а свободное пространство между дном и крышкой заклеивают лейкопластырем, чтобы предупредить поступление в чашку кислорода извне. В термостате чашки устанавливают вверх дном. Быстро растущие аэробы, поглощая находящийся в чашке кислород, создают тем самым благоприятные условия для роста анаэробов.

Анаэростат для культивирования анаэробов. Анаэростат – прибор для выращивания микробов в анаэробных условиях – представляет собой толстостенную металлическую или пластиковую камеру с герметически привинчивающейся крышкой, на которой имеются вакуумметр и два крана для присоединения к вакуум-насосу. Вместо кислорода в нем используются газовые смеси.

Учебно-методическое пособие для внеаудиторной и кружковой работы по дисциплине "Основы микробиологии и иммунологии" для специальностей 060501 Сестринское дело и 060102 Акушерское дело.

В лабораторной диагностике инфекционных болезней изучение ферментативной активности бактерий имеет огромное значение в ходе бактериологического метода исследования. Изучая биохимическую активность микроорганизмов, студенты не только глубоко познают особенности жизнедеятельности бактерий, но и знакомятся с одним из важнейших методов лабораторной диагностики инфекционных болезней.

Изучение данной темы предполагает использование активных методов обучения в сочетании с традиционными:

в занятии предусмотрены этапы активизации базисных знаний (в данном случае по химии и теории микробиологии),

демонстрация преподавателем результатов опытов с ферментами бактерий, самоподготовка с использованием УМП,

самостоятельное решение проблемы в конкретной ситуационной задаче.

В ходе занятия студенты овладевают навыками исследовательской работы. Решение ряда теоретических вопросов позволяет студентам достичь конкретных практических целей в ходе бактериологического метода исследования.

Процесс работы над темой организован таким образом, что студент вынужден осмыслить основную проблему темы, найти ключ к её решению, изучив опорный конспект, и сделать вывод на основе логического обобщения результатов исследования. Работа студентов над данной темой не только даёт определённый объём информации, но и решает важнейшую педагогическую задачу – учит активно мыслить, обобщать результаты исследований, делать выводы. Важно, что наряду с коллективной формой обучения учебно-методическое пособие предполагает также индивидуальную самостоятельную работу каждого обучающегося в ходе решения конкретных ситуационных задач.

P.S. К сожалению, при публикации утрачены цветные иллюстрации в пособии. Полную версию работы можно получить при контаткте непосредственно с автором.

Вложение	Размер
izuchenie_bioh_akt_bakt.docx	287.11 КБ

Предварительный просмотр:

Государственное бюджетное образовательное учреждение

среднего профессионального образования

«Московское медицинское училище № 15

Учебно - методическое пособие

для проведения внеаудиторной работы и кружковой работы

"Изучение биохимической активности бактерий"

Составлено в соответствии

с Государственными требованиями

к минимуму содержания и уровню

по специальностям: Сестринское дело 060501

Акушерское дело 060102

РАССМОТРЕНО И ОДОБРЕНО УТВЕРЖДАЮ

НА ЗАСЕДАНИИ ПЦК №3 ЗАМЕСТИТЕЛЬ ДИРЕКТОРА

ПРОТОКОЛ № _______ ПО УЧЕБНОЙ РАБОТЕ

_____________/Парфёнова Л. Ф./

Биохимическая, или ферментативная, активность микроорганизмов лежит в основе тех изменений, которые происходят под влиянием метаболизма бактерий как во внешней среде, так и в организме человека. Ферментативная деятельность бактерий используется в пищевой и фармацевтической промышленности, сельском хозяйстве и генной инженерии. Ферменты патогенных бактерий участвуют в формировании патологических процессов в органах и тканях при инфекционной болезни. В лабораторной диагностике инфекционных болезней изучение ферментативной активности бактерий имеет огромное значение в ходе бактериологического метода исследования. Изучая биохимическую активность микроорганизмов, студенты не только глубоко познают особенности жизнедеятельности бактерий, но и знакомятся с одним из важнейших методов лабораторной диагностики инфекционных болезней.

Изучение данной темы предполагает использование активных методов обучения в сочетании с традиционными:

в занятии предусмотрены этапы активизации базисных знаний (в данном случае по химии и теории микробиологии),

самостоятельное решение проблемы в конкретной ситуационной задаче.

Процесс работы над темой организован таким образом, что студент вынужден осмыслить основную проблему темы, найти ключ к её решению, изучив опорный конспект, и сделать вывод на основе логического обобщения результатов исследования. Работа студентов над данной темой не только даёт определённый объём информации, но и решает важнейшую педагогическую задачу – учит активно мыслить, обобщать результаты исследований, делать выводы . Важно, что наряду с коллективной формой обучения учебно-методическое пособие предполагает также индивидуальную самостоятельную работу каждого обучающегося в ходе решения конкретных ситуационных задач.

Уметь 1) обнаружить ферменты бактерий с помощью специальных питательных сред;

2) использовать результаты исследования биохимической активности бактерий для определения вида патогенных микроорганизмов.

особенности белкового и углеводного обмена патогенных бактерий;
значение изучения биохимической активности патогенных бактерий в лабораторной диагностике инфекционных заболеваний.

Активизация базисных знаний

Освоение теории биохимии бактерий.

Самостоятельная практическая работа с УМП.

Общее время занятия

Методическое:

Учебно-методическое пособие "Изучение биохимической активности микроорганизмов".
Учебники: "Основы микробиологии, вирусологии, иммунологии" под ред.А.А.Воробьёва и Ю.С. Кривошеина. Изд. "Мастерство". Москва, 2012 г.

Материальное:

Слайды для интерактивной доски.
Цветные карандаши.

Имитация чистых культур микроорганизмов - взвесь в физиологическом растворе; малый цветной ряд Гисса до посева и тот же ряд после суточного культивирования в термостате после посева.

2.3.Пробирки с мясо-пептонным бульоном и индикаторными бумажками для определе-

ния индола и сероводорода до посева чистой культуры и то же после посева через

сутки культивирования в термостате (имитация) .

Освоение теории биохимии бактерий.

Письменно ответьте на вопросы, используя опорный конспект:

Демонстрация углеводных и белковых сред с посевами микроорганизмов.

Устно ответьте на вопросы:

Как изменяются углеводные среды под воздействием микробов?
Почему изменяются углеводные среды под воздействием микробов?
Как изменяются белковые среды под воздействием микробов?
Почему изменяются белковые среды под воздействием микробов?
Как обнаруживают изменения в углеводных средах под воздействием бактерий?
Как обнаруживают изменения в белковых средах под воздействием бактерий?
Как используют данные о сахаролитической и протеолитической активности бактерий в диагностике инфекционного заболевания?

Решите ситуационную задачу, используя полученную на занятии информацию, данные задачи и справочную таблицу.

Произвели посев культуры бактерий, выделенных у больного, на среды Гисса и на пептонную воду.Через 24 часа культивирования обнаружено: в средах с глюкозой, лактозой, маннитом и мальтозой цвет среды изменился с жёлтого на ярко – розовый и выделились пузырьки газа; в среде с сахарозой произошло помутнение без изменения цвета среды. Реактивная бумажка на сероводород почернела, а реактивная бумажка на индол стала малиновой.

Задание: 1. Зарисуйте результат проведённого исследования (2 –ой день). Расставьте под пробирками значки, обозначающие сахаролитическую и протеолитическую активность бактерий.

2. Используя данные своего исследования и справочную таблицу, определите вид патогенных бактерий, выделенных у больного.

ГРАФИЧЕСКАЯ СХЕМА ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОХИМИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

МИКРООРГАНИЗМОВ (1 вариант)

Первый день – посев микроорганизмов на среды Гисса и мясо – пептонный бульон для определения сахаролитической и протеолитической активности.

Глюкоза Лактоза Маннит Мальтоза Сахароза МПБ

Второй день: учёт результатов исследования. Зарисовать согласно условию задачи.

Произвели посев культуры бактерий, выделенных у больного, на среды Гисса и на пептонную воду. Через 24 часа культивирования обнаружено: в средах с глюкозой, маннитом и мальтозой цвет среды изменился с жёлтого на ярко – розовый и выделились пузырьки газа; в среде с лактозой и сахарозой произошло помутнение без изменения цвета среды. Реактивные бумажки для определения сероводорода и индола не изменились.

ГРАФИЧЕСКАЯ СХЕМА ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОХИМИЧЕСКОЙ

АКТИВНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ (2 вариант)

Глюкоза Лактоза Маннит Мальтоза Сахароза МПБ

Второй день: учёт результатов исследования. Зарисовать согласно условию задачи.

Произвели посев культуры бактерий, выделенных у больного, на среды Гисса и на пептонную воду. Через 24 часа культивирования обнаружено: в средах с глюкозой, маннитом и мальтозой цвет среды изменился с жёлтого на ярко – розовый и выделились пузырьки газа; в среде с лактозой и сахарозой произошло помутнение без изменения цвета среды. Реактивная бумажка для определения сероводорода почернела, а реактивная бумажка для определения индола не изменилась.

1. Зарисуйте результат проведённого исследования (2 –ой день). Расставьте под пробирками значки, обозначающие сахаролитическую и протеолитическую активность бактерий.

ГРАФИЧЕСКАЯ СХЕМА ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОХИМИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

МИКРООРГАНИЗМОВ (3 вриант)

Глюкоза Лактоза Маннит Мальтоза Сахароза МПБ

Второй день: учёт результатов исследования. Зарисовать согласно условию задачи.

I. Определение сахаролитических ферментов бактерий.

Сахаролитическая активность микроорганизмов – это способность бактерий с помощью ферментов разлагать сахара до более простых соединений – кислоты, газа, альдегидов. Эти вещества можно обнаружить в питательной среде с помощью специальных химических веществ – индикаторов.

II. Определение протеолитических ферментов бактерий.

Протеолитическая активность микроорганизмов – это способность бактерий с помощью протеолитических ферментов расщеплять молекулы белка до аминокислот и простых веществ – сероводорода, индола и др.

Для обнаружения протеолитических ферментов исследуемую культуру засевают на мясо – пептонный бульон или пептонную воду. Под пробки пробирок вводят индикаторные бумажки, пропитанные реактивными растворами.

Если бактерии разлагают белок с образованием сероводорода , то реактивная бумажка окрашивается в чёрный цвет. Некоторые бактерии разлагают белок с накоплением в окружающей среде индола. В этом случае индикаторная бумажка окрашивается в малиновый цвет. Присутствие продуктов распада белка в пробирке - сероводорода и индола - свидетельствует о протеолитической активности бактерий и обозначается на схеме H 2 S (+) и индол (+) соответственно .

III. Протеалитическую активность бактерий можно изучать на желатиновой среде. При посеве на желатин бактерии с сильной протеолитической активностью разжижают его. Форма разжижения желатина характерна для некоторых видов бактерий и используется как видовой признак в лабораторной диагностике инфекций.

Читайте также: