Селективные питательные среды нецелесообразно использовать при посеве следующего биоматериала

Обновлено: 07.07.2024

Диагностика инфекционных заболеваний является одной из самых сложных проблем в клинической медицине. Лабораторные методы исследования при ряде нозологических форм играют ведущую, а в целом ряде клинических ситуаций решающую роль не только в диагностике, но и в определении конечного исхода заболевания.

Диагностика инфекционных заболеваний почти всегда предусматривает использование комплекса лабораторных методов.

  • бактериологические;
  • серологические;
  • метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для обнаружения ДНК или РНК возбудителя инфекционного заболевания в исследуемом материале.

У одних пациентов для диагностики этиологии инфекционно-воспалительного процесса достаточно провести бактериологическое исследование, в других клинических ситуациях решающее значение имеют данные серологических исследований, в третьих, предоставить полезную информацию может только метод ПЦР. Однако наиболее часто в клинической практике врачу-клиницисту необходимо использовать данные различных методов лабораторных исследований.

Бактериологические методы исследования

Бактериологические исследования наиболее часто проводят при подозрении на гнойно-воспалительные заболевания (составляют 40-60% в структуре хирургических заболеваний) с целью их диагностики, изучения этиологической структуры, определения чувствительности возбудителей к антибактериальным препаратам. Результаты бактериологических анализов способствуют выбору наиболее эффективного препарата для антибактериальной терапии, своевременному проведению мероприятий для профилактики внутрибольничных инфекций.

Возбудителями гнойно-воспалительных заболеваний являются истинно-патогенные бактерии, но наиболее часто условно-патогенные микроорганизмы, входящие в состав естественной микрофлоры человека или попадающие в организм извне. Истинно-патогенные бактерии в большинстве случаев способствуют развитию инфекционного заболевания у любого здорового человека. Условно-патогенные микроорганизмы вызывают заболевания преимущественно у людей с нарушенным иммунитетом.

Бактериологические исследования при заболеваниях, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами, направлены на выделение всех микроорганизмов, находящихся в патологическом материале, что существенно отличает их от аналогичных исследований при заболеваниях, вызванных истинно патогенными микроорганизмами, когда проводится поиск определенного возбудителя.

Для получения адекватных результатов бактериологического исследования при гнойно-воспалительных заболеваниях особенно важно соблюдать ряд требований при взятии биоматериала для анализа, его транспортировки в лабораторию, проведения исследования и оценки его результатов.

  • микроскопическое исследование мазка (бактериоскопия) из доставленного биоматериала;
  • выращивание культуры микроорганизмов (культивирование);
  • идентификацию бактерий;
  • определение чувствительности к антимикробным препаратам и оценку результатов исследования.

Доставленный в бактериологическую лабораторию биоматериал первоначально подвергается микроскопическому исследованию.

Микроскопическое исследование мазка (бактериоскопия), окрашенного по Граму или другими красителями, проводят при исследовании мокроты, гноя, отделяемого из ран, слизистых оболочек (мазок из цервикального канала, зева, носа, глаза). Результаты микроскопии позволяют ориентировочно судить о характере микрофлоры, ее количественном содержании и соотношении различных видов микроорганизмов в биологическом материале, а также дают предварительную информации об обнаружении этиологически значимого инфекционного агента в данном биоматериале, что позволяет врачу сразу начать лечение (эмпирическое). Иногда микроскопия позволяет выявить микроорганизмы, плохо растущие на питательных средах. На основании данных микроскопии проводят выбор питательных сред для выращивания микробов, обнаруженных в мазке.

Культивирование микроорганизмов. Посев исследуемого биоматериала на питательные среды производят с целью выделения чистых культур микроорганизмов, установления их вида и определения чувствительности к антибактериальным препаратам. Для этих целей используют различные питательные среды, позволяющие выделить наибольшее количество видов микроорганизмов. Оптимальными являются питательные среды, содержащие кровь животного или человека, а также сахарный бульон, среды для анаэробов. Одновременно производят посев на дифференциально-диагностические и селективные (предназначенные для определенного вида микроорганизмов) среды. Посев осуществляют на стерильные чашки Петри, в которые предварительно заливают питательную среду для роста микроорганизмов.

Микроскопия мазков, окрашенных по Граму

1 - стрептококки; 2 - стафилококки; 3 - диплобактерии Фридленда; 4 - пневмококки

Колонии отсевают на плотные, жидкие, полужидкие питательные среды, оптимальные для культивирования определенного вида бактерий.

Выделенные чистые культуры микроорганизмов подвергают дальнейшему изучению в диагностических тестах, основанных на морфологических, ферментативных, биологических свойствах и антигенных особенностях, характеризующих бактерий соответствующего вида или варианта.

Определение чувствительности к антибактериальным препаратам. Чувствительность к антимикробным препаратам изучают у выделенных чистых культур микроорганизмов, имеющих этиологическое значение для данного заболевания. Поэтому в направлении на бактериологические анализы требуется указать диагноз заболевания у больного. Определение чувствительности бактерий к спектру антибиотиков помогает лечащему врачу правильно выбрать препарат для лечения больного.

Оценка результатов исследования. Принадлежность условно-патогенных микроорганизмов к естественной микрофлоре организма человека создает ряд трудностей при оценке их этиологической роли в развитии гнойно-воспалительных заболеваний. Условно-патогенные микроорганизмы могут представлять нормальную микрофлору исследуемых жидкостей и тканей или контаминировать их из окружающей среды. Поэтому для правильной оценки результатов бактериологических исследований необходимо знать состав естественной микрофлоры изучаемого образца. В тех случаях, когда исследуемый биоматериал в норме стерилен, как, например, спинномозговая жидкость, экссудаты, все выделенные из него микроорганизмы могут считаться возбудителями заболевания. В тех случаях, когда исследуемый материал имеет собственную микрофлору, как, например, отделяемое влагалища, кал, мокрота, нужно учитывать изменения ее качественного и количественного состава, появление несвойственных ему видов бактерий, количественную обсемененность биоматериала. Так, например, при бактериологическом исследовании мочи степень бактериурии (число бактерий в 1 мл мочи), равная и выше 10 5 , свидетельствует об инфекции мочевых путей. Более низкая степень бактериурии встречается у здоровых людей и является следствием загрязнения мочи естественной микрофлорой мочевых путей.

Установить этиологическую роль условно-патогенной микрофлоры помогают также нарастание количества и повторность выделения бактерий одного вида от больного в процессе заболевания.

Врач-клиницист должен знать, что положительный результат бактериологического исследования в отношении биологического материала, полученного из в норме стерильного очага (кровь, плевральная жидкость, спинномозговая жидкость, пунктат органа или ткани), всегда тревожный результат, требующий немедленных действий по оказанию медицинской помощи.

Серологические методы исследования

В основе всех серологических реакций лежит взаимодействие антигена и антитела. Серологические реакции используются в двух направлениях.

2. Установление родовой и видовой принадлежности микроба или вируса. В этом случае неизвестным компонентом реакции является антиген. Такое исследование требует постановки реакции с заведомо известными иммунными сыворотками.

Серологические исследования не обладают 100%-й чувствительностью и специфичностью в отношении диагностики инфекционных заболеваний, могут давать перекрестные реакции с антителами, направленными к антигенам других возбудителей. В связи с этим оценивать результаты серологических исследований необходимо с большой осторожностью и учетом клинической картины заболевания. Именно этим обусловлено использование для диагностики одной инфекции множества тестов, а также применение метода Western-blot для подтверждения результатов скрининговых методов.

В последние годы прогресс в области серологических исследований связан с разработкой тест-систем для определения авидности специфических антител к возбудителям различных инфекционных заболеваний.

Авидность - характеристика прочности связи специфических антител с соответствующими антигенами. В ходе иммунного ответа организма на проникновение инфекционного агента стимулированный клон лимфоцитов начинает вырабатывать сначала специфические IgM-антитела, а несколько позже и специфические IgG-антитела. IgG-антитела обладают поначалу низкой авидностью, то есть достаточно слабо связывают антиген.

Затем развитие иммунного процесса постепенно (это могут быть недели или месяцы) идет в сторону синтеза лимфоцитами высокоспецифичных (высокоавидных) IgG-антител, более прочно связывающихся с соответствующими антигенами. На основании этих закономерностей иммунного ответа организма в настоящее время разработаны тест-системы для определения авидности специфических IgG-антител при различных инфекционных заболеваниях.

Высокая авидность специфических IgG-антител позволяет исключить недавнее первичное инфицирование и тем самым с помощью серологических методов установить период инфицирования пациента. В клинической практике наиболее широкое распространение нашло определение авидности антител класса IgG при токсоплазмозе и цитомегаловирусной инфекции, что дает дополнительную информацию, полезную в диагностическом и прогностическом плане при подозрении на эти инфекции, в особенности при беременности или планировании беременности.

Метод полимеразной цепной реакции

Полимеразная цепная реакция (ПЦР), являющаяся одним из методов ДНК-диагностики, позволяет увеличить число копий детектируемого участка генома (ДНК) бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы. Тестируемый специфический для данного генома отрезок нуклеиновой кислоты многократно умножается (амплифицируется), что позволяет его идентифицировать.

Сначала молекула ДНК бактерий или вирусов нагреванием разделяется на 2 цепи, затем в присутствии синтезированных ДНК-праймеров (последовательность нуклеотидов специфична для определяемого генома) происходит связывание их с комплементарными участками ДНК, синтезируется вторая цепь нуклеиновой кислоты вслед за каждым праймером в присутствии термостабильной ДНК-полимеразы. Получается две молекулы ДНК. Процесс многократно повторяется. Для диагностики достаточно одной молекулы ДНК, то есть одной бактерии или вирусной частицы.

Введение в реакцию дополнительного этапа - синтеза ДНК на молекуле РНК при помощи фермента обратной транскриптазы - позволило тестировать РНК-вирусы, например, вирус гепатита С. ПЦР - это трехступенчатый процесс, повторяющийся циклично: денатурация, отжиг праймеров, синтез ДНК (полимеризация). Синтезированное количество ДНК идентифицируют методом иммуноферментного анализа или электрофореза.

В ПЦР может быть использован различный биологический материал - сыворотка или плазма крови, соскоб из уретры, биоптат, плевральная или спинномозговая жидкость и т.д. В первую очередь ЦПР применяют для диагностики инфекционных болезней, таких как вирусные гепатиты В, С, D, цитомегаловирусная инфекция, инфекционные заболевания, передающиеся половым путем (гонорея, хламидийная, микоплазменная, уреаплазменная инфекции), туберкулез, ВИЧ-инфекция и т.д.

В селективные питательные среды представляют собой те агары и бульоны, которые служат для изоляции определенной группы микроорганизмов, подавляя развитие других. Они идеально подходят для посева полимикробных образцов, позволяя выделить патоген из сопутствующей микробиоты.

Существует множество селективных сред, от твердых до жидких. Некоторые из них предназначены для изоляции грамположительных бактерий, таких как коагулазоположительные стафилококки, лактобациллы, бифидобактерии и т. Д.

Другие для восстановления грамотрицательных патогенов, таких как виды родов Salmonella, Shigella, Vibrio, Bordetella, Brucella, Pseudomonas и другие.

Также есть они, способствующие росту грибов и дрожжей, таких как виды Candida, Histoplasma, Cryptococcus, дерматофиты и другие.

Следует отметить, что некоторые неселективно обогащенные среды могут становиться селективными при добавлении антибиотиков. Кроме того, некоторые питательные среды могут быть одновременно селективными и дифференцированными.

С другой стороны, существуют селективные жидкие питательные среды; некоторые могут служить в качестве среды обогащения, способствуя обострению отобранной группы бактерий и подавляя обострение других.

Селективные питательные среды широко используются в микробиологических лабораториях для анализа различных типов образцов; а также для выделения большого количества разнообразных микроорганизмов, представляющих клинический, промышленный, экологический и пищевой интерес.

Основа

Селективные культуральные среды основаны на содержании питательных веществ, которые способствуют росту конкретной бактерии или грибка или определенной их группы, и в то же время они должны содержать ингибирующие вещества, которые не позволяют развиваться другим нежелательным микроорганизмам.

Среди пищевых веществ, которые они могут содержать: панкреатический перевар казеина, дрожжевой экстракт, полипептоны и другие.

Среди ингибирующих веществ: антибиотики, соли желчных кислот, ярко-зеленый, кристаллический фиолетовый, основной фуксин, эозин, метиленовый синий, дезоксихолат натрия, сульфит натрия, монолеат сорбитана, цитрат аммония, цетримид, хлорид лития, теллурит калия. , малахитовый зеленый и другие.

Иногда СМИ могут быть как избирательными, так и дифференцированными. Точно так же степень селективности варьируется от одной среды к другой.

Некоторые из них обладают высокой избирательностью, характеризуются экстремальными условиями враждебности для большинства микроорганизмов, и лишь небольшое количество видов способны противостоять условиям окружающей среды и, следовательно, удовлетворительно расти. Например, агар TCBS и агар MRS, среди прочего.

В то время как другие являются умеренно избирательными, то есть те, которые подавляют определенную группу микроорганизмов, таких как грамположительные бактерии. С другой стороны, они способствуют росту большого разнообразия грамотрицательных бактерий; например, агар Mac Conkey.

Наконец, существуют питательные среды с низкой селективной способностью, то есть те, которые позволяют расти широкому спектру грамположительных и грамотрицательных бактерий, а также некоторых дрожжей, подавляя при этом лишь небольшую группу микроорганизмов. Пример: агар EMB.

Селективные твердые питательные среды

Агар Бэрда-Паркера

Среда, предназначенная для выявления коагулазоположительных стафилококков (Золотистый стафилококк). Содержит в качестве ингибирующих веществ хлорид лития и теллурит калия.

BCYE Agar или забуференный агар с экстрактом дрожжевого угля

Это высокообогащенная питательная среда, особенно для изоляции видов Legionella и Nocardia. Эта среда становится селективной при добавлении противомикробных препаратов, таких как полимиксин B, ванкомицин и анизомицин.

BHI-агар с антибиотиками

Изначально агар BHI является обогащенной средой, но при добавлении хлорамфеникола и циклогексимида он идеально подходит для селективного выделения грибов, представляющих клинический интерес.

БОЛЬШОЙ агарили агар Никерсона

Селективная и дифференциальная среда для выделения видов Candida. Он содержит цитрат аммония, висмут и сульфит натрия, которые действуют как ингибиторы роста бактерий.

Bordet Gengou Agar

Обогащенная и селективная питательная среда, особенно для выделения Bordetella pertussis Y Bordetella parapertussis. Он содержит цефалексин для подавления сопутствующей флоры.

Кампи-агар с кровью

Среда, используемая для выделения рода Campylobacter. Содержит цефоперазон, ванкомицин и амфотерицин B для подавления роста грамотрицательных, грамположительных бактерий и грибов.

Кампилобактер агар Батцлера

Специальная среда для изоляции видов рода Campylobacter. Помимо других питательных веществ, он содержит кровь лошади. Он также содержит различные ингибирующие вещества, такие как новобиоцин, колистин, цефазолин, бацитрацин и циклогексимид.

Кампилобактер Скирроу Агар

Селективная среда для выделения видов Campylobacter. Содержит конскую кровь и другие питательные вещества. В качестве ингибирующих веществ он содержит ванкомицин, полимиксин B и триметоприм.

CCF агар или фруктозный агар, циклосерин, цефокситин

Как следует из названия, он содержит циклосерин и цефокситин в качестве ингибирующих веществ и используется для выделения Clostridium diffcile в образцах стула, среди других образцов кишечника.

Цетримидный агар

Селективная среда, предназначенная для изоляции Синегнойная палочка, способствуя производству пигментов. Цетримид (бромид цетилтриметиламмония) - это вещество, подавляющее рост других бактерий, кромеP. aeruginosa.

Шоколадный агар с изовиталексом и ванкомицином

Эта среда изначально очень обогащенная. Добавление ванкомицина полезно для селективного выделения штаммов Neisseria gonorrhoeae Y N. meningitidis.

ЦИН агар или цефсулодин агар, иргасан, новобиоцин

Это умеренно селективная питательная среда для выделения видов Yersinia.

CNA-агар (колистин, налидиксовая кислота)

Это специальная селективная среда для изоляции грамположительных бактерий, таких как стафилококк, энтерококк, стрептококк и дрожжи, но она подавляет развитие грамотрицательных бактерий, таких как Pseudomonas и виды семейства Enterobacteriaceae.

Чапек агар

Среда предназначена для выращивания сапрофитных бактерий и грибов. Эта среда содержит неорганический азот. По этой причине эта среда считается селективной, поскольку могут развиваться только микроорганизмы, способные использовать неорганические соединения в качестве единственного источника азота.

EMB агар

Слегка селективная и дифференциальная среда, используемая для выделения Enterobacteriaceae. кишечная палочка это особенно заметно на этой среде по блестящему зеленовато-черному цвету его колоний. Его селективность обусловлена ​​наличием анилиновых красителей (эозин и метиленовый синий).

Эндо агар

Минимально селективная и дифференциальная среда, используемая для выделения и дифференциации ферментирующих лактозу и неферментирующих грамотрицательных бактерий, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae и другим семействам.

Сульфит натрия и основной фуксин подавляют большинство грамположительных бактерий. кишечная палочка на этой среде образуются характерные темно-красные колонии с переливающимся зеленоватым металлическим блеском.

Гектоен агар

Селективная и дифференциальная среда для выделения энтеропатогенных бактерий родов Shigella и Salmonella. В качестве ингибирующего вещества он содержит соли желчных кислот, подавляющие развитие грамположительных и некоторых грамотрицательных бактерий.

Агар Левенштейна-Йенсена

Среда, специально разработанная для изоляции и развития бактерий рода Mycobacterium, особенно видов туберкулеза, среди прочих.

Среда содержит малахитовый зеленый; Это вещество подавляет сопутствующую грамположительную и грамотрицательную флору, которая была способна противостоять предыдущей дезинфекции образца. Он также содержит глицерин, который стимулирует рост M. tuberculosis, но тормозит развитие М. bovis и другие микроорганизмы.

Мак Конки агар

Это селективная и дифференциальная среда. Он используется для выделения не привередливых к лактозе, ферментирующих и неферментирующих грамотрицательных палочек.

Его селективный характер обеспечивается наличием солей желчных кислот и кристаллического фиолетового. Эти вещества подавляют рост грамположительных бактерий и некоторых привередливых грамотрицательных палочек.

Соленый маннитовый агар

Селективный и дифференциальный агар для выделения Золотистый стафилококк. Эта среда имеет высокую концентрацию хлорида натрия, который подавляет рост большинства бактерий.

СС агар

Умеренно селективная и дифференциальная среда для изоляции родов Salmonella и Shigella. Среда содержит ингибирующие вещества, такие как соли желчных кислот, цитрат натрия и ярко-зеленый цвет. Эти вещества подавляют рост грамположительных бактерий, некоторых грамотрицательных бактерий и некоторых колиформ.

Реган Лоу Агар

Селективный агар для выделенияBordetella pertussis. Среда содержит уголь, цефалексин и амфотерицин B в качестве ингибирующих веществ.

SABHI агар

Селективная среда для изоляции патогенных грибов, таких как дерматофиты, Blastomyces dermatitidis а также Histoplasma capsulatum. Содержит хлорамфеникол.

Конский кровяной агар с бацитрацином

Специальная среда для изоляции Haemophilus influenzae. Бацитрацин подавляет сопутствующую флору.

Угольный агар с лошадиной кровью

Селективная среда, полезная для восстановления штаммов Bordetella pertussis Y Б. парапертуш из клинических образцов. Он содержит цефалексин для подавления сопутствующей флоры.

Канамицин-ванкомицин (KV) Кровяной агар

Селективная среда, специально предназначенная для изоляции анаэробных бактерий, таких как Bacteroides, Prevotella, Fusobacterium и Veillonella.

Висмут-сульфитный агар

Селективная среда для изоляции Salmonella enterica подгруппа enterica серотипа Typhi. Эта среда содержит ярко-зеленый сульфит висмута для подавления роста грамположительных микроорганизмов и некоторых грамотрицательных бактерий.

Агар TCBS (тиосульфат, цитрат, соли желчных кислот)

Высокоселективная среда для изоляции видов рода Vibrio. Он содержит цитрат натрия, бычью желчь и щелочной pH, подавляющий сопутствующую флору.

Агар Тайера-Мартина

Очень питательная и селективная среда для изоляцииNeisseria meningitidis и Neisseria gonorrhoeae. Сопутствующая флора подавляется наличием ванкомицина, колистина и нистатина.

Ярко-зеленый агар

Селективная среда для выделения штаммов рода Salmonella. Как следует из названия, он содержит ярко-зеленый как ингибирующее вещество. Это предотвращает рост грамположительных бактерий и большого количества грамотрицательных микроорганизмов.

Агар Фогеля-Джонсона

Это селективная и дифференциальная культуральная среда, разработанная для изоляцииЗолотистый стафилококк и он подавляет рост грамотрицательных бактерий и даже некоторых грамположительных. Ингибирующие вещества - теллурит калия, хлорид лития и глицин.

XLD агар

Это селективная и дифференциальная среда для изоляции энтеропатогенов сальмонелл и шигелл. Дезоксихолат натрия придает среде селективный характер.

CHROMagar (Candida Medium)

Это селективная и дифференциальная среда, помогающая изолировать и идентифицировать виды Candida. Среда содержит хлорамфеникол для подавления роста бактерий.

Средний Эллингхаузен Маккалоу Джонсон и Харрис (EMJH)

Селективная среда для выращивания лептоспир. Он содержит полисорбат 80, подавляющий рост большинства бактерий.

Селективные жидкие питательные среды

Бульон BHI NaCL 6.5%

Селективный отвар для выздоровления энтерококков. Высокая концентрация хлорида натрия подавляет рост сопутствующей микробиоты.

ЭК бульон

Селективный бульон для выделения общих и фекальных колиформ. Он содержит соли желчных кислот, которые подавляют рост других микроорганизмов.

Бульон GN

Селективный бульон для восстановления сальмонелл и шигелл. Содержит цитрат натрия и дезоксихолат натрия, подавляющие грамположительные бактерии и колиформные бактерии.

Бульон Раппапорта-Василиадиса

Это селективная среда для обогащения сальмонелл. Содержит малахитовый зеленый в качестве ингибирующего вещества.

Селенитовый бульон

Это селективная питательная среда, полезная для обогащения образцов, в которых предполагается присутствие энтеропатогенных бактерий рода Salmonella.

Как следует из названия, он содержит селенит натрия в качестве ингибирующего вещества, подавляющего рост грамположительных бактерий и большинства бактерий в желудочно-кишечном тракте.

Тетратионатный бульон

Селективный бульон для обогащения и восстановления штаммов рода Salmonella.

Тетратионат, образующийся в результате реакции между тиосульфатом натрия и йодированным раствором, присутствующим в среде, подавляет рост колиформных бактерий и способствует развитию бактерий, содержащих фермент тетратионатредуктазу (сальмонелла).

Он также содержит соли желчных кислот, а некоторые разновидности включают ярко-зеленый цвет; оба вещества подавляют большинство грамположительных и некоторых грамотрицательных бактерий (колиформ).

Тиогликолятный бульон Campy

Специальный бульон, способствующий развитию C. jejuni subsp jejuni. Содержит амфотерицин B, цефалотин, полимиксин B, триметоприм и ванкомицин.

Бульон Тодда-Хьюитта с кровью и антибиотиками

Он служит для обогащения образцов и способствует развитию Streptococcus agalactiae вагинальных выделений. В качестве ингибиторов он содержит налидиксовую кислоту и гентамицин или колистин.

Использование для транспортировки многих образцов биоматериала (гной, кишечное содержимое и т.п.) обычных питательных сред является, зачастую, серьезной ошибкой, поскольку в них идет быстрое размножение менее требовательных сапрофитных микроорганизмов. Физиологический раствор, который часто применяют для этой цели, не обеспечивает поддержания стабильных уровней редокс–потенциала и рН, а это, в свою очередь, существенно ограничивает жизнеспособность многих патогенных бактерий.

В настоящее время в клинике в качестве транспортных сред (консервантов) используются различные по составу композиции с разной степенью питательной ценности. Использование той или иной их них определяется соответствующими инструкциями, методическими рекомендациями и указаниями, в том числе утвержденными Минздравом РФ.

Это могут быть буферные растворы, содержащие только минеральные соли –– изотонический раствор хлорида натрия или фосфатно-буферный раствор, а также консерванты, содержащие органические вещества –– буферно-глицериновый солевой раствор, глицериновый консервант, 0,15%-ная пептонная вода, буферно-казеиново-дрожжевая среда.

Состав этих композиций следующий:

Калия дигидрофосфат 0,45 г

Динатрия гидрофосфат 5.34 г

Вода дистиллированная 1000 мл

Буферный глицерино-солевой раствор

Натрия хлорид 4,2 г

Дикалия гидрофосфат 3,1 г

Калия дигидрофосфат 1,0 г

Глицерин нейтральный 300 мл

Вода дистиллированная 700 мл

Натрия хлорид 0,85% раствор 1000 мл

Глицерин нейтральный 500 мл

Динатрия гидрофосфат 20% раствор 150 мл

0,1% пептонная вода

Вода дистиллированная 100 мл

Пептон бактериологический 0,1 г

Натрия хлорид 0,5 г

Калия нитрат 0,1 г

Натрия бикарбонат 0,2 г

Гидролизат казеина 2,0 г

Экстракт пекарских дрожжей 5,0 мл

Фосфатно-буферный раствор до 1000 мл

Так для транспортировки энтеробактерий в качестве консервантов рекомендуется использовать физиологический раствор, глицериновый и фосфатно-буферный растворы. Инструкция по лабораторной диагностике кампилобактериоза предусматривает использование для этих целей, кроме физиологического раствора, 0,1%-ную пептонную воду (от 3 до 48 ч.) или тиогликолевую среду для контроля стерильности (до 3 суток).

Следует отметить, что охлаждение до 4 о С позволяет значительно удлинить сроки транспортировки образцов на этих средах: в физиологическом растворе –– до 24 часов, в 0,1% пептонной воде –– до 72 часов и на тиогликолевой среде для контроля стерильности –– до 5 – 7 суток. При исследовании материала на наличие иерсиний глицериновые консерванты не пригодны. В этом случае исследуемый материал хранят при 4 – 8 о С 7 – 15 дней в фосфатно-буферном растворе или буферно-казеиново-дрожжевой среде.

Известно несколько десятков сред, которые потенциально могут быть использованы как транспортные. Однако большинство из них не отвечают одному из двух обязательных требований, которые и определяют пригодность среды именно как транспортной . Транспортная среда, с одной стороны, должна обеспечивать сохранение жизнеспособности микроорганизма, причем не менее 8 – 12 часов при комнатной температуре, и, в то же время, обязана предупредить или в значительной степени лимитировать размножение микроорганизмов.

Последнее особенно важно. Необходимо сохранить жизнеспособность той части патогенной микрофлоры, которая вне хозяина быстро гибнет, особенно при условии конкурентного роста менее требовательных микроорганизмов. Как уже отмечено, эта ситуация встречается очень часто, если исследуется раневое отделяемое, кишечное содержимое, мокрота, мазки из зева и некоторые другие биосубстраты. Облигатно анаэробные бактерии, пневмококки, гемофильные бактерии, нейссерии и многие другие микроорганизмы трудно выделить из биоматериала, если параллельно идет процесс интенсивного размножения сапрофитных бактерий или более жизнестойких болезнетворных микроорганизмов. Кроме того, гибель требовательных бактерий определяется созданием неблагоприятных для них условий, таких как неблагоприятные рН, окислительно-восстановительный потенциал, наличие или отсутствие свободного кислорода, а также действие антимикробных метаболитов, которые при определенных условиях могут образовывать актиномецеты, псевдомонады, эшерихии и другие содержащиеся в образце микроорганизмы.

Опыт создания и использования транспортных питательных сред велик и формально велика их номенклатура. Однако фактически в мировой практике стабильно используют только две транспортные среды, которые именуют по фамилиям их создателей: среда Эймса и среда Кери-Блейра, и которые являются наиболее универсальными транспортными средами для сохранения подавляющего большинства видов бактерий. Среда Эймса предназначена для широкого круга бактерий, среда Кери-Блейра для кишечных микроорганизмов.

Среда Кери-Блейра была предложена разработчикам в 1954 году. За прошедший длительный период ее рецептура фактически не менялась. Не вызывало разночтений и назначение среды –– изначально оно трактовалось как сохранение микроорганизмов при транспортировании с акцентом на микроорганизмы кишечника.

Натрия хлорид 5,0 г

Динатрия гидрофосфат 1,1 г

Кальция хлорид 0,1 г

Натрия тиогликолят 1,5 г

Вода дистиллированная до 1000 мл

Микроорганизмы кишечника многообразны, они включают представителей резидентной и транзиторной микрофлоры. Последняя в свою очередь может включать самые разнообразные бактерии и грибы, в т.ч. сапрофитные. В то же время, практика микробиологических служб клинических учреждений нацелена на выделение определенного круга микроорганизмов кишчника, прежде всего представителей семейства энтеробактерий (шигеллы, сальмонеллы), реже т.н. неферментирующих грамотрицательных бактерий, кишечных кокков и дрожжеподобных грибов.

Транспортная среда Кери-Блейра предупреждает гибель микробных клеток, сохраняет их жизнеспособность, но при этом препятствует размножению. Эти свойства среды обеспечиваются ее компонентным составом. Низкая питательная ценность и, прежде всего, отсутствие источников азота и углерода, как ключевых элементов развития популяции, ограничивает процессы роста и размножения микроорганизмов.

Процедура использования этой среды заключается в следующем: расплавленную среду Кери-Блейра разливают в стерильные пробирки по 6 – 9 мл. Объем среды в пробирках определяется техникой посева. При посеве мазка, взятого тампоном на тампонодержателе, достаточен небольшой столбик среды –– 6 мл. При прямом посеве биоматериала (без тампона) объем среды в пробирке увеличивают. В таком виде среду можно длительно хранить при температуре 2 – 8 о С.

Биологический материал погружают в столбик среды таким образом, чтобы он не оставался на ее поверхности. После этого пробирку с засеянной средой помещают в контейнер и направляют в лабораторию.

Среда Кери-Блейра сохраняет жизнеспособность требовательных бактерий около суток, после чего отмечают постепенную гибель клеток. Поэтому пересев с транспортной среды на обогащенные, дифференциально-диагностические или иные питательные среды необходимо проводить в максимально доступные сроки. Вместе с тем, есть данные о том, что сальмонеллы в этой среде сохраняют жизнеспособность несколько месяцев.

Среда Эймса используется как транспортная для широкого круга микроорганизмов самых разнообразных биологических субстратов (гной, раневое отделяемое, мокрота, СМЖ и др.), кроме кала. Среда Эймса может быть с углем и без него:

Натрия хлорид 3,0 г

Динатрия гидрофосфат 1,05 г

Калия дигидрофосфат 0,2 г

Калия хлорид 0,2 г

Кальция хлорид 0,1 г

Магния хлорид 0,1 г

Натрия тиогликолят 1,0 г

(как необязательный компонент) 10,0 г

Вода дистиллированная до 1000 мл

Уголь добавляют в среду Эймса для сорбции микробных метаболитов, негативно влияющих на высокочувствительные патогенные микроорганизмы. В частности, это условие особенно важно для сохранения жизнеспособности гонококков.

Техника посева на среду Эймса такая же, как и на среду Кери-Блейра.

Противоречиво мнение о пригодности среды Эймса для транспортировки биосубстратов с облигатно-анаэробными бактериями. Безусловно, наличие низкого редокс-потенциала, который обеспечивается тиогликолятом натрия, а также столбик полужидкого агара, в который погружается биоматериал, ограничивают контакт микроорганизмов с атмосферным кислородом и поступление его в среду в растворенном виде, что может способствовать сохранению жизнеспособности ряда видов облигатно-анаэробных бактерий (наиболее демонстративны в этом отношении клостридии). Однако среда не обеспечит длительного сохранения тех облигатных анаэробов, которые высоко чувствительны к кислороду (например, некоторых видов бактероидов).

Кроме отмеченных выше, имеется широкий перечень транспортных сред, применяемых для транспортирования определенных видов микроорганизмов. Наиболее строгие требования предъявляются к транспортированию материала, подлежащего бактериологическому исследованию на наличие неспорообразующих анаэробных микроорганизмов. Эти бактерии быстро погибают при контакте с кислородом воздуха, что заставляет использовать для транспортирования материала сосуды, заполненные инертным газом. Так, например, хорошо известна жидкая обогащенная среда под инертным газом с гемином и витамином К для прямого посева крови и жидких биосубстратов. Она служит одновременно транспортной средой и средой для культивирования анаэробных бактерий, включая строгих анаэробов

Натрия глицерофосфат 10,0 г

Натрия тиогликолят 1,0 г

Кальция хлорид 0,1 г

Налидиксовая кислота 0,04 г

Панкреатический перевар казеина 20,0 г

Натрия хлорид 2,5 г

Дикалия гидрофосфат 1,5 г

Натрия тиогликолят 0,5 г

Натрий сернистокислый 0,2 г

Цефалотин 0,02 г

Ванкомицин 0,02 г

Амфотерицин В 0,002 г

Триметоприм 0,002 г

Полимиксин В 3000 ЕД

Приведенная пропись мало чем отличается от состава других питательных сред для кампилобактерий (см.заключительную главу). Очевидно, что разработчики среды сделали акцент, в первую очередь, на селекционирующем действии антибиотиков, сохранив, в целом, состав среды, достаточный для поддержания жизнеспособности многих микроорганизмов.

Такой же принцип использован в транспортной среде для хламидий. Кроме того, в ней учтена возможность применения для селекции осмотического фактора (дано на литр).

Дикалия гидрофосфат 2,1 г

Калия дигидрофосфат 1,1 г

Сыворотка крови крупного

рогатого скота 50,0 мл

Ванкомицин 0,1 г

Стрептомицин 0,05 г

Нистатин 25000 ЕД

Антибиотики и сыворотку асептично вводят в стерильную питательную среду перед ее разлитием во флаконы и пробирки.

Существует ряд достаточно сложных по составу транспортных питательных сред для нейссерий, микоплазм и их сочетаний преимущественно в биосубстратах, полученных из мочеполового тракта. Некоторые варианты рассматриваются как транспортные среды для требовательных бактерий в целом, но особенно для нейссерий. Пропись одной из них, принадлежащей к большой группе т.н. Transgrow Medium, приведена далее (дано на литр).

Гемоглобин 10,0 г

Панкреатический перевар казеина 7,5 г

Натрия хлорид 5,0 г

Кукурузный крахмал 1,5 г

Дикалия гидрофосфат 4,0 г

Калия дигидрофосфат 1,0 г

Витамин В 12 0,001 г

Тиамин пирофосфат 0,001 г

П-Аминобензойная кислота 0,0002 г

Антибиотическая добавка 10,0 мл

Антибиотическая добавка включает ряд антибиотиков, призванных придать среде селективные свойства. Имеется ряд предложений, ни одно из которых в полной мере, естественно, не может обеспечить гарантированное подавление роста сопутствующих микроорганизмов. В разных источниках наиболее часто упоминают следующий состав (на литр среды добавляют 10 мл раствора антибиотиков).

Полимиксин В 0,0075 г

Ванкомицин 0,0035 г

Триметоприм 0,0035 г

Нистатин 12500 ЕД

В заключение следует еще раз подчеркнуть, что несмотря на большое число предложенных прописей транспортных сред, в микробиологической (медицинской) литературе наиболее часто упоминают среды Эймса и Кери-Блейра. Ряд авторов считает приемлемой среду Стюарта, которая, фактически, является предшественницей двух других. Среда Эймса большинству авторов представляется предпочтительней, чем среда Стюарта.

ГЛАВА 8. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ

Среди возбудителей заболеваний человека энтеробактерии относятся к числу относительно нетребовательных микроорганизмов. Они способны давать рост на различных базовых питательных средах, используемых в микробиологических исследованиях. Однако семейство Enterobacteriaceae достаточно обширно; оно объединяет разные по своим свойствам бактерии. Кроме того, те области человеческого тела, где многие представители семейства являются объектом естественного обитания или паразитирования, обильно населены резидентной микрофлорой. Вот почему питательные среды, используемые при работе с энтеробактериями, в первую очередь решают задачу их селективного выделения и бактериологической диагностики. Это характерно как для отечественной, так и зарубежной практики.

Согласно многим отечественным методическим рекомендациям и указаниям, в том числе одобренных Минздравом, как обязательные при бакдиагностике энтеробактерий предложено использовать среды обогащения, среды для селективного выделения и дифференциации. Их перечень приведен в таблице. Названы те среды, которые освоены отечественными производителями, а также те из них, чье внедрение в микробиологическую практику признано перспективным.

Отечественные рекомендации в принципиальном плане мало отличаются от каждодневной практики применения питательных сред за рубежом. Питательные среды для энтеробактерий сконструированы таким образом, чтобы использовать ростовые особенности отдельных родов и видов и их способность конвертировать тот или иной субстрат. В следующей таблице 7 выборочно обобщены те свойства энтеробактерий, которые учтены и успешно реализованы в питательных средах для дифференциации микроорганизмов этого семейства.

Согласно рекомендациям Всемирной организации здравоохранения (1990 г.) в бактериологических лабораториях для работы с энтеробактериями рекомендованы следующие питательные среды:

транспортные среды –– Эймса, или Кери-Блейра, или Стюарта;

базовые среды – кровяной агар, агар на переваре сои (tryptic soy agar);

Заслуживает упоминания еще один зарубежный опыт.

В практике работы микробиологов США при выделении энтеробактерий из кишечного содержимого предложено использовать следующие группы питательных сред.

Как транспортную –– среду Кери-Блейра.

Дифференциально-диагностические : агар МакКонки и ЕМВ-агар (с эозином и метиленовым голубым).

Умеренно селективные : гектоен-энтеро агар, SS-агар (шигелла-сальмонелла агар), XLD-агар (с ксилозой, лизином и дезоксихолатом).

Высоко-селективные среды: агар с бриллиантовым зеленым и висмут-сульфит агар.

Естественно, что все перечисленное не исключает применения базовых питательных сред, прежде всего питательного агара с добавлением бараньих эритроцитов.

Назначение транспортной среды очевидно. Вторая группа сред позволяет отдифференцировать культуры, ферментирующие лактозу, от лактозонегативных. Следующая (умеренно селективная среда) обеспечивает рост сальмонелл и шигелл, в то время как рост других энтеробактерий частично или полностью подавляется. Последняя группа предназначена для выделения сальмонелл, но рост шигелл на них не гарантирован.

Питательные среды, наиболее часто используемые при выделении

Похожие документы:

Краткий курс лекций по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии Часть первая. Общая микробиология, вирусология и иммунология

. и др. Специальные питательные среды для культур клеток. Используются разнообразные синтетические вирусологические питательные среды сложного состава .

Методические указания для самостоятельной работы студентов под руководством преподавателя Тема: Возбудители инфекций, передающихся половым путем.

. . Параллельно проводится высев на соответствующие питательные среды для выделения и идентификации культуры. 4. . 2011. - 448 с., т.1 Зверев В.В., Бойченко М. Н. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: в 2 т.: учебник. - М.: ГЭОТАР .

Разработка и применение биологических моделей для изучения хронической туберкулезной инфекции 03. 02. 03 микробиология 03. 01. 06 Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

. -исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г. Н. Габричевского . высевов на плотные питательные среды, для дальнейшей работы был . А.В. Штанников , С.Ф. Бикетов // Проблемы медицинской и экологической биотехнологии (Сб. тез. докладов .

. Под редакцией доктора медицинских наук, профессора, зав. каф. микробиологии ГБОУ ВПО СОГМА . . Посев почвенной болтушки на среду Китта-Тароцци. Питательные среды для анаэробов, методы культивирования и выделение .

. верите? Почитайте учебник для медицинских Вузов по специальности «Здоровый . Санта-Русь, известным практикующим микробиологом А.С.Бессережновым. Знаете почему . не только служит отличной питательной средой для восстановления нормальной микрофлоры, но .

Характеристики питательных сред для культивирования бактерий. Консервирующие среды для бактерий. Среды обогащения для бактерий. Элективные и селективные питательные среды для выращивания бактерий.

Консервирующие питательные среды предупреждают отмирание патогенов и подавляют рост сапрофитов. Наибольшее применение нашли глицериновая смесь (среда Тйга), гипертонический раствор, глицериновый консервант с LiCl2, раствор цитрата натрия и дезоксихолата натрия (среда Бенгсанга-Эллиота).

Характеристики питательных сред для культивирования бактерий. Консервирующие среды для бактерий. Среды обогащения для бактерий

Среды обогащения для бактерий

Среды обогащения (например, среда Китта-Тароцци, селенитовый бульон, тиогликолятная среда) применяют для накопления определённой группы бактерий за счёт создания условий, оптимальных для одних видов и неблагоприятных для других. Наиболее часто в качестве подобных агентов используют различные красители и химические вещества — соли жёлчных кислот, тетратионат Na+, теллурит К , антибиотики, фуксин, гендиановый фиолетовый, бриллиантовый зелёный и др.

Элективные и селективные питательные среды для выращивания бактерий

Элективные и селективные среды (например, среды Уилсона-Блэра, Эндо, Плоскирева, Мак-Конки) предназначены для первичного посева материала или для пересева с консервирующих сред или сред обогащения с целью получения чистой культуры. Среды готовят с учётом биохимических и энергетических потребностей микроорганизмов. Соответственно, выделяют кровяные и сывороточные среды (например, Леффлера, Борде-Жангу), яичные среды (например, Левенштайна-Йенсена) и др.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Питательные среды готовят из продуктов животного или раст происхождения. Состав сред определяется метаболическими потребностями той или иной группы бактерий.

Питательные среды должны отвечать следующим требованиям:

  • содержать основные питательные вещества в легкоусвояемой форме
  • быть влажными
  • быть изотоничными
  • быть нетоксичными (для исследуемых микробов)
  • быть стерильными
  • иметь определённую вязкость
  • иметь оптимальный показатель рН
  • иметь оптимальный окислительно-восстановительный (редокс) потенциал
  • обладать буферными свойствами
  • по возможности быть прозрачными.

Питательные среды делят по консистенции на:

Питательные среды делят по составу на:

Питательные среды делят по целевому назначению:

  • основные
  • консервирующие
  • транспортные
  • накопительные
  • селективные
  • диференциально-диагностические
  • специальные — обогащённые (кровяные, сыворотные и т.д.)
  • среды для хранения.
  • среды для культивирования анаэробов – особые среды

Питательные среды. Классификация.

Основные питательные среды (МПБ,МПА) – простые по составу и применяются для культивирования большинства непроходимых бактерий. Содержат: мясной экстрат, пептон, хлорид натрия (МПА дополнительно содержит агар-агар). Жидкая среда (МПБ), плотная среда(МПА).

Обогащённые питательные среды можно приготовить на основе простых, включив в их состав кровь, гемин, сыворотку, асцитическую жидкость и др. Такие среды используют для культивирования бактерий со сложными пита потребностями (прихотливых микроорганизмов). Жидкая среда (сахарный бульон, сывороточный бульон, асцитический бульон), плотная среда (сахарный агар, сывороточный агар, кровяной агар)

Накопительные питательные среды – жидкие питательные среды,которые применяют при необходимости накопить в них бактерии определённой группы в результате их преимущественного размножения по сравнению с сопутствующими микробами. Состав этих сред подбирают таким образом, чтобы рост сопутствующей флоры частично или полностью был задержан. Жидкие среды (селенитовый бульон). Плотной среды нет.

Селективные питательные среды – используют для избирательного культивирования микроорганизмов определённых видов при подавлении роста других микроорганизмов. Такой эффект достигается при добавлении различных ингибиторов роста микробов, изменении показателя рН, состава питательных веществ в среде и прочего. Жидкая среда (щелочная пептонная вода, желчный бульон, среды с антибиотиками). Плотная среда (солевой агар, желчно-солевой агар, среды с антибиотиками)

Дифференциально-диагностические питательные среды позволяют различить бактерии по их росту, биохимической активности и другими признаками. В состав этих сред, кроме питательных веществ, обычно включают субстрат, по отношению к которому дифференцируются бактерии и индикатор.

В результате культивирования микробы, ферментирующие субстрат, способствуют накоплению продуктов расщепления, сдвигу рН, редокс-потенциала среды, что сопровождается окрашиванием среды и собственных колоний в цвет индикатора. К дифференциально-диагностическим средам относят также комбинированные полиуглеводные среды Рассела, Клигера, Олькеницкого, трехсахарный железосодержащий агар и др.)

Дифференциально-диагностические среды обычно являются плотными, реже полужидкими, в своём составе они имеют несколько ферментируемых субстратов и индикаторных систем, что позволяет использовать их не только для накопления чистой культуры в процессе её выделения, но и одновременно проводить первичную идентификацию культуры по ряду фенотипических признаков. Жидкие среды (среды Гисса). Плотные среды (агары Эндо, Левина, Олькеницкого, среда Гисса (полужидкая).

Транспортные и консервирующие питательные среды – применяют для временного сохранения микроорганизмов после взятия исследуемого материала и при транспортировке его в лабораторию. Обычно эти среды содержат только буферные и солевые растворы. Иногда добавляют агар-агар, активированный уголь, твин-80 – для придания полужидкой консистенции и нейтрализации токсических воздействий. Они не предназначены для культивирования микроорганизмов.

К ним относятся: среда Амиеса – полужидкий агар с активированным углём, глюкозо-дрожжевая среда, СКС и др.

Среды для хранения культур – предназначены для длительного сохранения чистых культур микроорганизмов в условиях лаборатории. Основным требованием для них является способность длительного поддержания жизнеспособности без изменения основных свойств культур. Одним из важных моментов в работе по выделению возбудителя из исследуемого объекта является взятие,хранение и транспортировка материала. Жидкая среда (глицерин – для хранения при 20С). Плотная среда – среда Дорсе.

Читайте также: