Учесть биохимические свойства культуры в цветном ряду с посевами sh flexneri
Обновлено: 05.10.2024
10) Сальмонеллы 2 - го подрода отличаются от сальмонелл 1 - го подрода по следующим биохимическим свойствам:
11) В питательной среде рост как негалофильных, так и галофильных вибрионов обеспечивает следующая концентрация хлористого натрия:
13) При исследовании баночных консервов первичный посев для выделения мезофильных анаэробов проводят на среду:
1. одновременно на несколько сред (накопительных и элективно-селективных) для обнаружения различных видов возбудителей, используя количественный метод посева
3. только в дифференциально-диагностические среды для идентификации возбудителя по ферментативным свойствам
3. выделение из пищевого продукта массивного количества определенного вида потенциально патогенных микроорганизмов
1. вода поверхностных водоемов, водопроводная вода, хозяйственно - бытовые сточные воды, гидробионты, пищевые продукты, смывы с объектов внешней среды и мухи
2. вода поверхностных водоемов, водопроводная вода, хозяйственно - бытовые сточные воды, почва, гидробионты, пищевые продукты.
4. почва, смывы с объектов внешней среды, питьевая вода, вода открытых водоемов, вода плавательных бассейнов
Дизентерия (шигеллёз)
КЛАССИФИКАЦИЯ 5 группа по Берджи – факультативно-анаэробные Грам- палочки Семейство: Enterobacteriaceae Род: Shigella Виды: Подгруппа А – Sh. dysenteriae (12 сероваров, 1 -ый – Григорьева-Шиги) Подгруппа В – Sh. flexneri ( 6 сероваров, 6 -ой - Ньюкастл ) Подгруппа C – Sh. boydii (18 сероваров) Подгруппа D – Sh. sonnei ( нет сероваров, есть хемовары и фаготипы)
Морфологические и тинкториальные свойства • Мелкие палочки с закругленными концами • Грамотрицательные • Спор не образуют • Неподвижны • Не образуют капсулу • Имеют ворсинки (пили)
Культуральные свойства • Факультативные анаэробы • Хорошо растут на обычных питательных средах — колонии на агаре круглые, выпуклые, полупрозрачные • Рост на бульоне в виде диффузного помутнения • Температурный оптимум для роста 37°С (мезофилы), оптимальная р. Н 6, 7 – 7, 2 • На всех дифференциально-диагностических средах колонии шигелл , не разлагающих лактозу (кроме Sh. sonnei), имеют цвет самой среды
Биохимические свойства • Ферментируют глюкозу с образованием кислоты без газа, за исключением Sh. newcastle – до К и Г • НЕ ферментируют лактозу , за исключением Sh. sonnei – ферментирует медленно (более 48 часов) • НЕ образуют H 2 S • Могут образовывать индол • НЕ разжижают желатин • НЕ растут на голодной среде с цитратом • Дают положительную реакцию с метиловым красным • Дают отрицательную реакцию Фогеса—Проскауэра • НЕ имеют лизиндекарбоксилазы • НЕ имеют фенилаланиндезаминазы • НЕ гидролизуют мочевину
Антигенные свойства • О-АГ: –Родоспецифические –Видоспецифические –Группоспецифические –Типоспецифические • К-АГ
Эпидемиология шигеллёза • Источник - человек (антропоноз) больной или бактерионоситель • Пути передачи: механизм – фекально-оральный; пути: 1. алиментарный (пищевой) (для Sh. sonnei) 2. контактно-бытовой (для Sh. dysenteriae) 3. водный (для Sh. flexneri) • Восприимчивый коллектив – любой человек (после заболевания – стойкий типоспецифический иммунитет)
Факторы патогенности шигелл • Факторы адгезии и колонизации 1. пили 2. белки наружной мембраны 3. муциназа • Факторы инвазии и ферменты 1. белки наружной мембраны – инвазины 2. гиалуронидаза 3. нейраминидаза • Защита шигелл от фагоцитоза (агрессины) 1. поверхностный К-антиген 2. ЛПС • Эндотоксин ЛПС • Экзотоксины состоят из субъединиц А и В. Рецептором для токсинов служит гликолипид мембраны клетки. Энтеротоксин стимулирует активность аденилатциклазы и отвечает за развитие диареи. Токсин Шига (нейротоксин) и шигаподобные (SLT-I и SLT-II) оказывает прямое цитотоксическое действие.
Варианты исхода: • Проходят транзитом, не вызывая заболевания при низкой инфицирующей дозе, воздействии нормальной микрофлоры и факторов местного иммунитета – транзиторное бактерионосительство • Шигеллы (чаще Sh. s onnei) размножаются в основном в тонком кишечнике – острый гастроэнтерит – шигеллез, протекающий по типу пищевой токсикоинфекции • Поражение толстого кишечника, возникает колитический синдром, типичная острая дизентерия. Имеют место явления общей интоксикации, а если поражение вызвано шигеллой Григорьева – Шига – нейротоксикоз.
Патогенез дизентерии Проникновение шигелл per os Попадание в толстый кишечник (м. б. поражение тонкого кишечника) Адгезия к колоноцитам, колонизация, внедрение в колоноциты В колоноцитах размножаются, выделяют токсины Цитотоксины Энтеротоксин Гибель клеток, поражение Активация аденилатциклазы нервного сплетения Выход ионов и воды в просвет Язвы в стенке кишки, кровь и кишечника слизь в кале, тенезмы, ложные позывы к дефекации Диарея (частота – до 50 раз в сутки)
Лабораторная диагностика Исследуемый материал: испражнения Экспресс – метод • РНТФ с индикаторными дизентерийными бактериофагами • РИФ с люминесцирующей дизентерийной сывороткой • Чувствительность этих реакций не очень высока, т. к. для их учета необходима большая концентрация шигелл в исследуемом материале: для РНТФ – 104 кл/г, для РИФ – 107 кл/г.
Лабораторная диагностика Микроскопический метод (низкая диагностическая ценность) • окраска по Граму : грамотрицательные мелкие палочки
Лабораторная диагностика Бактериологический метод - основной Испражнения засевают на селективные среды: 1. Мюллера: –МПБ –Мел –Раствор Люголя –Гипосульфит Na 2. Селенитовый бульон: –МПБ –Фосфат Na –Селенисто-кислый Na Затем пересевают на дифференциально-диагностические среды: 1. Эндо 2. Плоскирева (предпочтительнее) Характер роста шигелл: Колонии шигелл мелкие (1, 0 – 1, 5 мм), округлые, с ровным краем, блестящей поверхностью, прозрачные, бесцветные , т. к. шигеллы не расщепляют лактозу (лактозонегативные)
Колонии шигелл на среде Эндо
Из лактозонегативных колоний – мазок, окраска по Граму; определение подвижности Пересев на среду Ресселя для выделения чистой культуры Среда Ресселя: 1. МПА 2. 1% лактозы 3. 0, 1 % глюкозы 4. Индикатор бромтимоловый синий Среда имеет столбиковую и скошенную часть При росте шигелл столбик желтеет , а скошенная часть остаётся первоначального травянисто- зелёного цвета
Рост на среде Ресселя 1. Незасеянная среда 2. Shigella flexneri 1 2
Коммерческие микрообъемные тест-системы для биохимической идентификации энтеробактерий по устройству представлены двумя группами: содержащими субстрат реакции в питательной среде или в шаблоне-носителе (субстрат и индикатор – на бумажных дисках, которые вносят в лунки). Результаты биохимических тестов учитываются визуально, вид микроорганизма устанавливается с помощью таблицы идентификации, кодов (профилей) или компьютерных программ.
ENTEROtest
Лабораторная диагностика Серологический метод • Может быть использован для выявления бактерионосителей. • РПГА с эритроцитарными шигеллёзными диагностикумами • РА с шигеллёзными диагностикумами
Специфическая профилактика • Вакцина Шигеллвак (вакцина дизентерийная против шигелл Зонне липополисахаридная жидкая). содержит очищенный ЛПС из культуры Sh. sonnei. Цель иммунизации – профилактика дизентерии Зонне у детей с 3 -х летнего возраста и взрослых. Вакцину вводят глубоко подкожно или внутримышечно, доза для всех возрастов – 0, 5 мл (50 мкг). Введение вакцины через 2 – 3 недели обеспечивает невосприимчивость к инфекции в течение 1 года. Ревакцинация при необходимости ежегодно в той же дозе. • Бактериофаг дизентерийный поливалентный жидкий, в таблетках с кислотоустойчивым покрытием и в свечах • Интести – бактериофаг жидкий
Качество лабораторной диагностики во многом зависит от правильного сбора материала для исследования и посева его на соответствующие среды. Материалом для исследования служат фекалии. Посев на элективные дифференциально-диагностические среды (среду Плоскирева, агар Мак-Конки и др.) лучше производить у постели больного. Засеянные чашки сразу же отправляют в лабораторию. Для посева отбирают частицы кала, содержащие слизь и гной. В качестве среды обогащения используют только жидкую селенитовую среду.
Второй день:
1. Просматривают чашки, засеянные накануне. Отбирают подозрительные колонии для дальнейшего исследования. На указанных выше питательных средах шигеллы образуют небольшие (до 1,5 мм в диаметре) бесцветные нежные слегка выпуклые колонии. S. sonnei могут образовывать наряду с описанными и более крупные плоские с неровным краем колонии.
2. Отобранные колонии петлей засевают в пробирку с полужидким агаром для определения подвижности (под пробку помещают индикаторную бумажку для определения индола), в пробирку со средой Клиглера (не забыть проколоть нескошенную часть среды — столбик), в среду с мочевиной по Преусу в пробирке, в пробирку с нитратным агаром Симмонса, на среду Кларка.
Третий день:
1. Просматривают чашки с посевами среды накопления. Отбирают подозрительные колонии и засевают на тот же ряд сред, что и с первичного посева во второй день.
2. Учитывают результаты посева для определения ферментативных свойств, сделанного на второй день. Неподвижные, ферментирующие глюкозу с образованием кислоты (некоторые биотипы S. flexneri 6 расщепляют глюкозу до кислоты и газа), не ферментирующие лактозу (следует помнить, что среди S. sonnei встречаются биохимические варианты, замедленно ферментирующие лактозу до кислоты), не образующие сероводорода, не гидролизующие мочевину, не утилизирующие цитрат в качестве единственного источника углерода, дающие положительную реакцию с метиловым красным и отрицательную Фогеса-Проскауэра подозрительны на шигеллы.
Четвертый день:
1. Учитывают результаты посевов, сделанных накануне, и окончательно идентифицируют выделенные культуры по биохимическим свойствам.
2. Культуры, биохимические свойства которых соответствуют характеристике шигелл, типируют в реакции агглютинации на стекле сначала со смесью № 1 (поливалентная сыворотка к шигеллам Флекснера и Зонне), а при отрицательной реакции — с набором поливалентных сывороток к другим видам шигелл.
В случае выявления положительной реакции с одной из поливалентных сывороток типирование продолжают с адсорбированными моновалентными сыворотками, при выделении шигелл Флекснера — с типовыми и групповыми сыворотками.
По результатам изучения биохимических свойств и серологического типирования выдают ответ о выделении определенного вида шигелл.
В настоящее время все чаще стали использовать ПЦР и разные иммунологические методы для обнаружения последовательностей ДНК и специфических шигеллезных антигенов в материале (ИФА, иммунофлюоресцентный метод), позволяющие подтвердить диагноз в первые дни заболевания.
Свидетельство и скидка на обучение каждому участнику
ГАОУ СПО РК
План занятия (практическое) № 34
Тема занятия: Проведение микробиологической диагностики шигеллезов.
МДК.04.01. Теория и практика лабораторных микробиологических и иммунологических исследований
Специальность: 31.02.03. Лабораторная диагностика
Цели занятия:
Образовательные:
Изучить микробиологическую диагностику шигелл
Рассмотреть биохимические свойства шигелл
Рассмотреть идентификацию шигелл
Развивающие:
Развивать навыки самообразования, творческие способности студентов
Продолжить развитие учебно-интеллектуальных умений;
выделять главное и существенное
устанавливать причинно-следственные связи
Воспитательные:
продолжить формирование эволюционных представлений о развитии органического мира, передачи наследственного материала
воспитывать уважение к людям, науки, их достижениям
продолжить формирования умения работать в коллективе, принимать совместные решения
продолжить формирования здорового образа жизни
Междисциплинарные связи:
Физико-химические методы исследования и техника лабораторных работ
Анатомия и физиология человека
Внутридисциплинарные связи:
Место проведения: кабинет 407
Тип занятия: практическое
Количество часов: 4 академических
Обеспечение занятия: мультимедийное оснащение, таблицы, слайды, стол лаборанта, питательные среды, чистые культуры микроорганизмов
Основные источники:
2. Камышева К.С. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии / Ростов н/Д: Феникс, 2015. – 281 с.
Дополнительные источники:
Медицинская микробиология, вирусология и иммунология : в 2 т. / под ред. В. В. Зверева, М. Н. Бойченко. – Том 1. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010.- 448 с.
Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований: учебник. Сбойчаков В.Б. 2011. – 608 с
Интернет- ресурсы:
Студент должен уметь:
Проводить взятие и посев биологического материала для выделения шигелл
Выделять и изучать чистую культуру шигелл
Проводить постановку серологических реакций
Проводить учет результатов
Студент должен знать:
Культуральные, биохимические и серологические свойства шигелл
Методики приготовления, окрашивания, микроскопирования препаратов микроорганизмов
Патогенез и эпидемиологию инфекций, вызываемых шигеллами
Студент должен обладать:
Общие компетенции
ОК 1. Понимать сущность и социальную значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый интерес.
ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.
ОК 3. Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях и нести за них ответственность.
ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для эффективного выполнения возложенных на него профессиональных задач, а также для своего профессионального и личностного развития.
ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в профессиональной деятельности.
ОК 6. Работать в коллективе и команде, эффективно общаться с коллегами, руководством, пациентами.
ОК 7. Брать ответственность за работу членов команды (подчиненных), за результат выполнения заданий.
ОК 8. Самостоятельно определять задачи профессионального и личностного развития, заниматься самообразованием, осознанно планировать и осуществлять повышение своей квалификации.
ОК 9. Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной деятельности.
ОК 10. Бережно относиться к историческому наследию и культурным традициям народа, уважать социальные, культурные и религиозные различия.
ОК 11. Быть готовым брать на себя нравственные обязательства по отношению к природе, обществу, человеку.
ОК 12. Оказывать первую медицинскую помощь при неотложных состояниях.
ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.
ОК 14. Вести здоровый образ жизни, заниматься физической культурой и спортом для укрепления здоровья, достижения жизненных и профессиональных целей.
Профессиональные компетенции
ПК 4.1. Готовить рабочее место и аппаратуру для проведения лабораторных микробиологических исследований.
ПК 4.2. Проводить лабораторные микробиологические и иммунологические исследования биологических материалов, проб объектов внешней среды и пищевых продуктов; участвовать в контроле качества.
ПК 4.3. Регистрировать результаты проведенных исследований
ПК 4.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.
Структура занятия:
Организационный момент 2 мин.
Мотивация (цели) занятия 3 мин.
Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний) 45 мин.
Инструктаж самостоятельной работы студентов 15 мин.
Практическая часть 105 мин.
Подведение итогов занятия, оценка работы студентов 8 мин.
Задание на дом 2 мин.
Ход занятия
Организационный момент
Инструктаж по охране труда ( роспись в журнале по технике безопасности )
Мотивация (цели) занятия :
Изучение микробиологической диагностики шигеллезов как причины кишечных инфекций (дизентерии) является обязательным разделом профессионального модуля в связи с распространенностью данных микроорганизмов и инфекций, вызываемых ими.
Мотивация: ОК.1-ОК.14; ПК.4.1-4.4;
Актуальность:
Таким образом, изучение методов исследования шигелл, особенностей их взаимодействия с организмом хозяина и иммунной системой, а также вопросы диагностики, профилактики и антимикробной терапии, являются неотъемлемой частью формирования компетентностного подхода в подготовке медицинского лабораторного техника.
Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний):
а) проверка знаний : устный опрос
Тестовый контроль (приложение №1)
б) проверка внеаудиторной самостоятельной работы
таблицы, кроссворды, рисунки по темам.
в) подведение итогов контроля:
Оценивание, замечания по работе.
Практическая часть:
а) подготовка студентов к самостоятельной работе ( проведение инструктажа по выполнению заданий):
Проведение анализа
Засеять исследуемую чистую культуру штрихом по поверхности скошенной среды и затем уколом по центру столбика в его толщу в той же пробирке.
Инкубировать до 48 ч при 35°С. Среда Клиглера может быть модифицирована по Bader и Hotz (1951) добавлением 0,2 % мочевины.
Контроль качества
Escherichia coli ATCC 25922
очень хороший
Citrobacter freundii ATCC 8090
очень хороший
желтый и черный
Enterobacter cloacae ATCC 13047
очень хороший
Shigella flexneri ATCC 12022
очень хороший
Salmonella typhimurium ATCC 14028
очень хороший
желтый и черный
Salmonella enteritidis ATCC 13076
очень хороший
желтый и черный
Proteus mirabilis ATCC 14153
очень хороший
Proteus vulgaris ATCC 13315
очень хороший
желтый и черный
Среда ацетатный агар
Контроль качества:
Наблюдаемый эффект
E. coli 3912/41 (055:К59)
изменение цвета среды из зеленого в синий
K. pneumoniae 3534/51
изменение цвета среды из зеленого в синий
E. coli 0124 Ewing 227
изменение цвета среды из зеленого в синий
без изменения цвета среды
Микробиологическое исследование
Цель исследования: выявление и идентификация шигелл для постановки диагноза; выявление бактерионосителей; обнаружение шигелл в пищевых продуктах.
Материал для исследования
2. Секционный материал.
3. Пищевые продукты.
Способы сбора материала
Способы сбора материала
Основные методы исследования
Ход исследования
Первый день исследования
Первый день исследования
Второй день исследования
Третий день исследования
Четвертый день исследования
Вынимают посевы из термостата и учитывают результат. Культуры, подозрительные по своим ферментативным и культуральным свойствам в отношении шигелл (см. табл. 37), подвергают серологической идентификации. При отсутствии таких культур дают отрицательный ответ.
Серологическая идентификация
Вид, серовар, подсеровар выделенной культуры устанавливают при помощи адсорбированных сывороток. Анализ антигенной структуры начинают с реакции агглютинации на стекле со смесью № 1. В эту смесь входят сыворотки с антителами к шигеллам Зонне, Ньюкасл и поливалентная сыворотка к шигеллам Флекснера. При положительной реакции агглютинации со смесью выделенную культуру агглютинируют отдельно с каждой сывороткой, входящей в смесь.
Положительная реакция агглютинации с адсорбированной сывороткой к шигеллам Зонне и Ньюкасл дает право дать ответ. Для установления серовара и подсеровара шигелл Флекснера необходимо дополнительно поставить реакции агглютинации с типовыми (I, II, III, IV, V) и групповыми (1-3, 4-6-7, 8) сыворотками. Например, выделенная культура дала положительную реакцию с типовой сывороткой II и групповой сывороткой 3, 4. Как видно из таблицы, выделена культура шигелл Флекснера, серовар 2, подсеровар 1а. Ответ: выделены шигеллы Флекснера 2а.
При отсутствии агглютинации со смесью № 1 ставят реакцию агглютинации с другими поливалентными сыворотками.
Культуры, расщепляющие маннит, испытывают со смесью № 1 и поливалентными сыворотками к шигеллам Бойда.
При наличии агглютинации выделенной культуры одной из этих сывороток проводят испытание культуры с каждой из сывороток, входящих в поливалентную. Положительный результат с одной из сывороток определяет серовариант выделенной культуры.
При использовании сыворотки к шигеллам Бойда агглютинацию начинают с сывороткой того серовара, который наиболее часто встречается в данной местности. В нашей стране чаще выделяют шигеллы Бойда серовариантов 4, 5, 7, 9 и 12 (см. рис. 44).
В качестве ускоренных методов микробиологического исследования при дизентерии применяют люминесцентную микроскопию и биологическую пробу на морских свинках. При введении вирулентных штаммов шигелл в конъюнктивальный мешок (под нижнее веко) к концу 1-х суток у животных развивается конъюнктивит.
б) самостоятельная работа студентов:
провести посев изучаемой культуры на среду Клиглера
Сделать мазки с агаровой культуры, окрасить по Граму
Микроскопировать препараты, зарисовать в дневник
зарисовать схему выделения чистой культуры шигелл
Сделать выводы
в) подведение итогов самостоятельной работы
Оформление в рабочей тетради выводов о проделанной работе
Итоговый контроль
Решение ситуационных задач (см.приложение №2)
Проверка преподавателем работ студентов
Задание на дом
Подведение итогов занятия, оценка работы студентов
Преподаватель оценивает работу студентов, корректирует ошибки, отвечает на вопросы студентов
Преподаватель Гончарова А.И.
Приложение №1
Тесты подстановки:
Согласно международной схеме классификации род шигелл включает 4 вида(подгрупп): A - Sh . dysenteruae , B - Sh ._____________________, C - Sh .- boydii ,
D - Sh ._______________________
Шигеллы грамм-_________________, по типу дыхания_____________________.
На средах растут в виде __________________ _____________________________
Разделение на виды основано на определении биохимических характеристик и ___________________ строения.
Шигеллы длиной 2..3мкм имеют форму _________________ с закругленными концами, лишены капсул и ____________________________.
Шигеллы не расщепляют ____________ и сахарозу, исключение составляет___________________________
Шигеллы делятся на две группы :расщепляющие и нерасщепляющие _____________.
Шигеллы обладают слабыми протеолитическими свойствами, молоко ____________, желатин _______________________.
Sh . dysenteruae обладают способностью продуцировать ____________________ , обладающий выраженным тропизмом к нервной системе и слизистой оболочке кишечника. Остальные подгруппы дизентерийных бактерий образуют _______________.
Успех лаб. Иссл=ия во многом зависит от правильного_________________ ______________ и посева на элективно-дифференциальные среды.
На исследование брать нужно______________ порции кала, так как шигеллы локализуются в слизистой оболочке __________________ кишечника.
Заболевание, вызванное шигеллами Шиги протекает с отеком, гиперемией толстого кишечника и ___________________________.
Накопительная среда для шигелл- ______________________________
Дифференциальные среды для шигелл- это среда __________________,
Среда_____________ и ________________.
Задача №3 . В детском коллективе наблюдается вспышка острых кишечных заболеваний, соответствующих по клинической картине дизентерии. Заболевание связано по времени с приходом на работу новой няни.
1) Как установить источник инфекции?
2) Какие микробиологические исследования нужно провести с этой целью?
Ответ к задаче №3:
Для установления источника инфекции необходимо произвести бактериологическое исследование испражнений у работников пищеблока и няни. При выделении шигелл произвести серо- и фаготипирование выделенных культур (определить эпидмаркеры).
1) Где искать источник инфекции?
2) Как установить наличие одного или нескольких источников инфекции имело место?
Ответ к задаче №6:
1) Источник инфекции необходимо искать среди работников пищеблока.
2) Необходимо определить эпидмаркеры у всех выделенных культур при обследовании работников пищеблока и больных (фаговар, серовар, бактериоциновар). Если они совпадают – источник один, если разные – несколько источников инфекции.
1) На основании каких признаков были идентифицированы выделенные культуры?
2) Какие необходимо провести дополнительные исследования для установления источника инфекции?
Ответ к задаче №7:
2) Для установления источника инфекции определяют эпидмаркеры: фаговар, бактериоциновар, серовар, антибиотикограмма.
Читайте также: