Забор содержимого сибиреязвенного карбункула на бактериологический посев алгоритм
Обновлено: 17.09.2024
Исследование на сибирскую язву включает микроскопию мазков из исходного материала, высевы на питательные среды, постановку тестов идентификации, метод флюоресцирующих антител, ПЦР (полимеразно-цепную реакцию), постановку биопробы и, при необходимости, реакции преципитации. У человека, кроме того, необходима постановка клинической кожно-аллергической пробы с сибиреязвенным аллергеном антраксином.
а) Взятие материала от животных. Для бактериологического исследования в лабораторию направляют ухо или мазок крови, полученный из надреза уха. Ухо отрезают с той стороны, на которой лежит труп. Предварительно его туго перевязывают шпагатом у основания в двух местах и отрезают между лигатурами. Место отреза уха на трупе прижигают. Отрезанное ухо заворачивают в пергаментную бумагу, смоченную в дезинфицирующем растворе. Если подозрение на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа животного, вскрытие прекращают и на исследование направляют часть селезенки, от трупов свиней — участки отечной соединительной ткани, заглоточные, подчелюстные, а также другие лимфатические узлы.
б) Взятие материала от человека. Для бактериологического исследования забор материала у больных должен производиться по возможности до начала лечения. При кожной форме заболевания необходимо осторожно обработать спиртом кожу вокруг пораженного места и поверхность карбункула. Затем содержимое везикулы отсасывают стерильным шприцем, отделяемое язвы снимают с поверхности стерильным тампоном, смоченным физиологическим раствором, фрагменты отторгнутого струпа снимают влажным тампоном или пинцетом. При всех формах заболевания берут кровь в объеме 1-2 мл из вены. 1-2 капли крови непосредственно у постели больного засевают на питательные среды (агар и бульон Хоттингера, pH 7,2-7,5). При висцеральных формах сибирской язвы и менингите отбирают спинномозговую жидкость в количестве 0,5 мл в стерильную пробирку.
При подозрении на ингаляционное заражение исследуют также мазки из полости носа. Их берут сухими стерильными ватными тампонами на зондах. Тампон вводят легким движением по наружной стенке полости носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем его слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю раковину, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. После забора материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с физиологическим раствором. Погрузив рабочую часть зонда в физраствор, вращают зонд в течение 10-15 с, избегая разбрызгивания раствора. Вынимают зонд из раствора, прижимая его к стенке пробирки, и, отжав избыток жидкости, удаляют зонд и закрывают пробирку.
Транспортирование материала для исследования методом ПЦР осуществляют в специальном термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом при температуре 2-8°С в течение 6 ч (кровь — в течение 1 сут., плазму и сыворотку — в течение 3 сут.), в замороженном виде — в течение 1 сут. Недопустимо замораживание образцов цельной крови.
в) Взятие материала из сырья животного происхождения и из объектов внешней среды проводится в тех случаях, когда необходимо установить источник инфекции или фактор передачи для выявления обсемененности спорами возбудителя сибирской язвы отдельных объектов, а также в целях обнаружения микроба в местах старых скотомогильников при проведении строительных, мелиоративных, гидротехнических и других работ, связанных с выемкой и перемещением грунта.
г) Отбор проб шерсти. Для исследования шерсть отбирают из разных мест не менее 5 образцов массой около 2 г каждый (лучше брать пучки загрязненной шерсти). Если шерсть упакована в кипы, берут не менее 10 образцов из разных мест каждой кипы, а также скопившуюся внутри обшивки пыль. Образцы от одной кипы объединяют и упаковывают вместе.
д) Отбор проб кожи. Берут кусочки кожи размером 3x3 см с периферических участков шкурок. При наличии на внутренней стороне шкурки кровоподтеков или инфильтратов пробы берут и в этих местах.
е) Отбор проб почвы. Пробы почвы с мест вероятного обсеменения спорами возбудителя (мест вынужденного убоя скота, стоянок и водопоя животных) берут на глубине до 15 см, на территории скотомогильников — на глубине до 2 м при помощи почвенных буров.
ж) Смывы с объектов внешней среды. Смывы делают с мест наиболее вероятного обсеменения спорами возбудителя при помощи стерильного тампона, смоченного стерильной водой. Площадь смыва одним тампоном — около 100 см 2 . Тампоны затем помещают в пробирки, заливают стерильной водой (5 мл) и закрывают пробкой.
Отбор проб для исследования методом ПЦР осуществляется аналогично.
В сопроводительном документе к пробам указывают причину проведения исследования, какой материал и в каком количестве направляют, место и дату отбора материала; для проб шерсти и кормов дополнительно указывают происхождение, объем партии, вид упаковки и количество упаковочных единиц. К сопроводительному документу прилагают опись проб и место каждой пробы.
и) Подготовка проб к бактериологическому исследованию. Кусочки органов и тканей от трупов помещают в ступку, измельчают ножницами или пестиком, затем заливают 1-5 мл физиологического раствора, суспензию через марлевый тампон набирают в шприц или пастеровскую пипетку и переносят в пробирку или колбочку.
Воду с илистыми частицами фильтруют через 2 слоя марли, чистую воду исследуют без предварительной подготовки. С целью концентрирования микробов пробы воды можно профильтровать через мембранные фильтры (№3). Осадок с каждого фильтра соскабливают скальпелем, затем смывают 1-2 мл физиологического раствора и эту взвесь используют для исследования.
Тампоны, которыми делают смывы с объектов внешней среды, отжимают о стенки пробирки и удаляют, а оставшуюся жидкость подвергают исследованию.
Пробы почвы освобождают от корней, камешков и тщательно перемешивают. От каждой пробы берут 90-100 г почвы, помещают в колбу, заливают физиологическим раствором или дистиллированной водой из расчета получения 15-20 мл суспензии. Колбу закрывают, тщательно встряхивают в течение 25 мин, дают отстояться 1-2 мин и надосадочную жидкость переносят в пробирку для дальнейшего исследования. Пробы пищевых продуктов или кормов готовят аналогично.
Для проб из шкур кусочки массой 1 г помещают в фарфоровую ступку и заливают 1-2 мл физиологического раствора. Кусочки измельчают ножницами и оставляют при 20°С на 2-3 ч для размягчения материала. После этого пробы хорошо растирают пестиком в той же жидкости до получения волокнистой мезги, затем мезгу удаляют, предварительно отжав ее пестиком на внутренней боковой поверхности ступки.
От каждой пробы шерсти отбирают наиболее загрязненные части, измельчают ножницами, вместе с пылью помещают в колбу и заливают физиологическим раствором. Колбу закрывают, тщательно встряхивают в течение 10 мин, от грубых частиц можно освободиться путем фильтрации через 2-3 слоя марли.
Для избавления от посторонней микрофлоры пробы из объектов внешней среды, шерсти и кожи, пищевых продуктов подвергаются термической обработке на водяной бане при 80°С в течение 20 мин. Пробы от больного человека и животного из патологического материала, мяса животных и пр., где возбудитель сибирской язвы находится в вегетативной форме, не прогревают.
к) Предварительная обработка проб для исследования при помощи ПЦР. Для получения сыворотки пробирки с кровью отстаивают при комнатной температуре в течение 30 мин до полного образования сгустка. После этого сгусток обводят пастеровской пипеткой и оставляют при комнатной температуре до образования сыворотки. Затем сыворотку в объеме 1 мл переносят отдельными наконечниками с аэрозольным барьером или пастеровскими пипетками в стерильные пробирки объемом 1,5 мл. Сыворотка, содержимое везикул, отделяемое язв, фрагменты отторгнутого струпа, мазки из полости носа и спинномозговая жидкость не требуют предварительной обработки. Воду, смывы с объектов внешней среды, пробы почвы, пищевых продуктов или кормов, шкур, шерсти предварительно обрабатывают так же, как для бактериологического исследования, отбирая для исследования методом ПЦР 0,1-0,2 мл водной фазы образцов.
Установить с пациентом доверительное отношение, объяснить механизм проведения процедуры и получить согласие на ее проведение; перчатки, очки, и маску; стерильный шприц; ватные шарики; пинцет; пробирку с ватный пробкой; бланки направлений; ручку; стеклограф; стерильный лоток; ёмкость и дез. раствором и контейнер для отходов.
Действие:
Вымыть и осушить руки (гигиенический уровень); надеть перчатки, очки и маску;смочить ватные шарики в спирту и обработать кожу вокруг нагноения (карбункула); собрать шприц и провести осторожно пункцию бубона (карбункула); продвинуть шприц на глубину 1-4 миллиметра и набрать 0,2-3 миллилитра содержимого; поместить содержимое в пробирку и закрыть пробкой; поместить шприц в контейнер; пронумеровать пробирку; провести дезинфекцию помещения и оборудования; снять перчатки и опустить их в контейнер; вымыть (гигиенический уровень) и осушить руки; оформить направление и выслать материал в лабораторию; заполнить медицинскую документацию.
Алгоритм забора содержимого везикул (пустул, язв) на бакисследование
Подготовить:
Установить с пациентом доверительное отношение, объяснить механизм проведения процедуры и получить согласие на ее проведение; перчатки, очки и маску; стерильный лоток; пастеровскую пипетку; кусочек нити; пинцет; спиртовку; ватные шарики; пробирку с пробкой; емкость с дезинфицирующим раствором и контейнер для отходов.
Действие:
Микробиологическая диагностика сибирской язвы. Принципы микробиологической диагностики сибирской язвы. Бактериоскопический, бактериологический, биологический, кожно-аллергический метод диагностики сибирской язвы.
Для микробиологической диагностики сибирской язвы берут содержимое пустулы, гнойное отделяемое из карбункула, кровь, мочу, мокроту, испражнения и рвотные массы. При патологоанатомическом исследовании забирают кусочки органов или целые органы. Все образцы следует помещать в герметичные сосуды и транспортировать закупоренными в опломбированные боксы или деревянные ящики.
Выделение возбудителя сибирской язвы. Проводят окраску материала по Граму и посев на обычные питательные среды. Затем определяют подвижность микроорганизмов из выросших колоний, изучают их биохимические и культуральные свойства. Серологические исследования проводят для распознавания больных и реконвалесцентов. Возбудитель сибирской язвы можно выявлять AT, меченными флюоресцеинами (особенно в смешанных культурах), диффузией в геле, в РСК, РИГА и ИФА.
Кожные пробы применяют для ретроспективной диагностики при эпидемиологических исследованиях. Проводят внутрикожное введение 0,1 мл бактериального аллергена (антраксина).
Реакция термопреципитации по Асколи имеет большое значение, так как позволяет идентифицировать возбудителей сибирской язвы при отрицательных результатах бактериологических исследований. Для прижизненной же диагностики эта реакция не имеет серьёзных преимуществ перед вышеуказанными бактериологическими и серологическими методами.
Биологическая проба при диагностике сибирской язвы. Заражение лабораторных животных проводят одномоментно с посевом на питательные среды. Материал можно вводить белым мышам (по 0,1-0,2 мл в спину), кроликам и морским свинкам (по 0,2-0,5 мл в область живота). Обычно мыши погибают через 1-2 сут, морские свинки и кролики— через 2-4 сут. При выживании животных наблюдение за ними продолжают в течение 10 дней. У павших животных исследуют печень, селезёнку, лимфатические узлы, почки, кровь из полостей сердца и места введения заразного материала. Затем проводят посев исследуемого материала на питательные среды.
Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.
В документированной процедуре изложены правила сбора и транспортирования биологических материалов в лабораторию клинической микробиологии (бактериологии) ГОБУЗ “Мурманская областная клиническая больница им. П. А. Баяндина” в целях повышения качества результатов лабораторных исследований и организации противоэпидемических и профилактических мероприятий, а также профилактики внутрибольничных инфекций у медицинского персонала и пациентов.
Документированная процедура предназначены для использования в МОКБ, а также может использоваться организациями, направляющими заказ на услугу по лабораторной диагностике.
Общие положения
Предложенная техника сбора и транспортирования биологических материалов в ЛКМ МОКБ позволит снизить уровень преаналитической ошибки и повысить качество работы лаборатории по объективизации результатов.
Документированная процедура определяет правила предохранения медицинского персонала и пациентов от инфицирования при сборе и доставке в лаборатории проб биоматериалов, которые могут быть обсеменены бактериями, грибами, вирусами, паразитами.
Общие требования к сбору проб биоматериала для микробиологического исследования
Материал для исследования собирают в достаточном количестве.
Материал должен соответствовать характеру инфекционного процесса.
При сборе материала необходимо использовать только стерильные инструменты и посуду, соблюдая правила асептики для исключения контаминации (загрязнения) биопробы нормальной микрофлорой, т.к. ее наличие приводит к ошибочной трактовке результатов.
При сборе биоматериала медперсонал обязан использовать средства индивидуальной защиты (далее - СИЗ) (перчатки, маска, шапочка, очки и др.).
Необходимо осуществлять сбор биоматериала только в рекомендуемые транспортные среды и контейнеры.
Материал для исследования, по возможности, собирают до начала антибактериальной терапии. При отсутствии такой возможности собирают, непосредственно, перед повторным введением (приемом) препаратов.
В бланке направления на исследование в обязательном порядке указывают наименование принимаемых антибактериальных препаратов.
Не допускается загрязнение наружную поверхность посуды при сборе и доставке проб.
Не допускается загрязнение сопроводительных документов (направлений).
При сборе биоматериала в пробирки, необходимо использовать штативы.
После взятия биоматериала, необходимо сделать запись о процедуре в бланке направления: дату, время взятия, другую информацию.
Правила маркировки проб биоматериала для микробиологического исследования
Все биопробы, поступающие в лабораторию должны пройти процедуру штрих-кодирования.
Наклейки, с нанесенными штрих-кодами, получают в централизованной многофункциональной лаборатории (далее ЦМЛ) МОКБ.
Цель штрих-кодирования - идентификация пациента (на пробирке (контейнере, флаконе) и на бланке должен быть одинаковый номер штрих-кода).
Штрих-код наклеивают на пробирку (контейнер, флакон) строго вертикально цифровой надписью сверху вниз, на имеющуюся наклейку. Необходимо оставить прозрачную зону для контроля состояния биопробы. Штрих-коды, наклеенные неровно, не будут считываться сканерами приборов.
Штрих-код должен быть наклеен ровно и плотно, строго вертикально (длинной стороной вдоль пробирки, контейнера) (рисунок 2).
При маркировке контейнера штрих-код наклеивается непосредственно на сам контейнер, на крышку маркировка не наносится.
Рекомендуется двойная маркировка - помимо штрих-кодирования, на емкость для сбора наносится краткая запись (номер, фамилия, уточнение локализации биоматериала и др.).
Выбор лент со штрих-кодами определяется количеством пробирок, контейнеров для исследований одного пациента, с учетом штрих-кодирования бланка направления (не менее 2-х штрих кодов на ленте: 1-й-на пробирку, 2-й на бланк).
Весь биоматериал маркируется двойными штрих-кодами.
Исключение для исследования:
Необходимо использовать тройной штрих-код:
1 – направление-бланк на исследование
2 – аэробный флакон
3 – анаэробный флакон
Общие требования к условиям хранения проб биоматериала до доставки в лабораторию
Соблюдайте условия хранения биопроб до доставки в лабораторию (таблица 1).
Рекомендуется организовать в отделениях медицинской организации место хранения биопроб до их отправки в лабораторию (таблица 2).
Регулярно проводите дез.обработку места хранения биопроб, контейнеров.
Сопроводительные документы (бланки направлений на исследования) помещают в пластиковый пакет (файл) для исключения контакта с биоматериалом.
Общие условия хранения биопроб до доставки в лабораторию
Вид изделия, используемого для сбора и доставки биопробы
Температурный режим, и др.
Доставка в лабораторию
Биопробы в пробирке с транспортными средами
при комнатной температуре (18—20°С), в тёмном месте
в течение 48 часов
Стерильный контейнер с нативным биоматериалом
при комнатной температуре (18—20°С), в тёмном месте
в течение 2 часов
при температуре 2-8 0 С
в течение 24 часов
при температуре 37 0 С
в течение 2 часов*
Флаконы с кровью на стерильность
при комнатной температуре (18—20°С), в тёмном месте
в течение 2 часов
в течение 24 часов**
* Доставка ликвора для бактериологического исследования.
** Отсроченная загрузка флаконов в анализатор увеличивает время выполнения анализа.
Рекомендации по организации места хранения биопроб до доставки в лабораторию
Температурный режим хранения, и др.
Место хранения биопроб
при комнатной температуре
(18—20°С), в тёмном месте
В закрытом контейнере для доставки
при температуре 2-8 0 С
В термоконтейнере с хладоэлементами
при температуре 37 0 С
В контейнере с термоэлементами, нагретыми до необходимой температуры (грелка, обернуть одноразовой пеленкой, ветошью)
Общие требования к доставке проб биоматериала для микробиологического исследования
Доставка проб биоматериала осуществляется в рабочие дни и время ЛКМ (бактериологии), согласно режиму доставки в ЛКМ.
Исключение составляет круглосуточный прием от отделений МОКБ следующих биоматериалов:
Пробы ликвора - для проведения реакции латекс-агглютинации и бактериологического посева.
Пробы крови - для посева на стерильность.
Собранный материал доставляют в лабораторию в рекомендуемые сроки (таблица 1).
Доставка биоматериала осуществляется курьером.
Не допускается доставка биоматериала пациентами.
Не допускается доставка биоматериала в руках, карманах, хозяйственных сумках и других предметах личного пользования.
Дно контейнеров должно быть покрыто сухим адсорбирующим материалом (марлевая салфетка, ткань, вата и пр.).
Доставляемые емкости с биоматериалами должны быть закрыты пробками, крышками, исключающими выливание содержимого во время транспортирования.
Доставка жидкого биоматериала осуществляется строго в вертикальном положении, в штативах.
Сопроводительные документы (бланки направлений на исследования) помещают в непромокаемый пакет (файл, папка) для исключения контакта с биоматериалом.
Разбор доставленного биоматериала должен проводиться с соблюдением мер предосторожности. Емкости с биоматериалами должны помещаться на поднос или лоток. Персонал должен использовать средства индивидуальной защиты (резиновые перчатки, маску).
Общие условия хранения биопроб до доставки в лабораторию
Вид изделия, используемого для сбора и доставки биопробы
Температурный режим, и др.
Доставка в лабораторию
Биопробы в пробирке с транспортными средами
при комнатной температуре (18—20°С), в тёмном месте
в течение 48 часов
Стерильный контейнер с нативным биоматериалом
при комнатной температуре (18—20°С), в тёмном месте
в течение 2 часов
при температуре 2-8 0 С
в течение 24 часов
при температуре 37 0 С
в течение 2 часов*
Флаконы с кровью на стерильность
при комнатной температуре (18—20°С), в тёмном месте
в течение 2 часов
в течение 24 часов**
* Доставка ликвора для бактериологического исследования.
** Отсроченная загрузка флаконов в анализатор увеличивает время выполнения анализа.
Правила по сбору, доставке и хранению различных проб биоматериала для микробиологического исследования
Пробы при инфекционно-воспалительных процессах дыхательных путей
Пробы при инфекционно-воспалительных процессах мочеполовой системы
Общие требования к сбору, хранению и доставке проб биоматериала для ПЦР-диагностики
Правила по сбору, доставке и хранению различных проб биоматериала для ПЦР-диагностики
Читайте также: