Кэри блэйр среда для посева
Обновлено: 05.10.2024
Эту среду (в качестве транспортной среды без угля) используют для пересылки клинического материала в лабораторию.
Состав**:
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 12,6 г порошка в 991 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Остудить до 50°С и асептично добавить 9 мл 1%-ного водного раствора хлорида кальция. При необходимости довести рН до 8,4. Разлить по 7 мл в пробирки с завинчивающимися крышками. Прогреть на пару в течение 15 мин, остудить и завинтить крышки.
Принцип и оценка результата:
Среда Кэри-Блэра без угля используется для сбора и транспортировки клинического материала. Первоначально транспортная среда была предложена Stuart и соавт. (1) для доставки в лабораторию материала, содержащего гонококки. Позже, для пересылки проб фекалий, Кэри и Блэр разработали новую среду, в которой было меньше питательных веществ, низкий окислительно-восстановительный потенциал и высокое значение рН (2). В ходе использования многие авторы отмечали ее пригодность для транспортировки клинического материала (3, 4, 5).
В этой среде минимум питательных веществ, чтобы сохранить максимальное количество живых бактерий без размножения. Тиогликолят натрия введен в состав среды для создания низкого окислительно-восстановительного потенциала. Среда имеет слабощелочное значение рН, что минимизирует гибель бактериальных клеток вследствие закисления среды. Вместе с тем жизнеспособность на этой среде прихотливых микроорганизмов сохраняется лишь непродолжительное время. Для получения наилучших результатов рекомендуется, наряду с посевом на транспортную среду, делать прямой посев на среду обогащения.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий желтовато-белый порошок.
Плотность готовой среды:
Образуется полужидкая среда, соответствующая по плотности 0,5%-ному агаровому гелю.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Среда имеет светло-янтарную окраску, слегка опалесцирует.
Кислотность среды:
При 25°С водный раствор (1,26% вес/об) имеет рН 8,4 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Полужидкая непитательная среда, предназначенная для транспортирования и хранения микробиологических образцов.
Описание
Транспортная среда имеет точный химический состав, это полужидкая, забуференная, непитательная среда, которая обладает ограниченной возможностью поддерживать жизнеспособность, но не рост микроорганизмов. Рецептура модифицированной Cary и Blair транспортной среды Стюарта для гонококков более адаптирована для транспортировки фекальных образцов. Основная модификация заключается в замене глицерофосфата на неорганический фосфат, что препятствует избыточному росту бактерий. Повышение pH до 8,4 и подавляющий эффект метиленового синего поддерживают жизнеспособность шигелл, сальмонелл и вибрионов.
Приготовление
Развести 13,3 г порошка в 950 мл дистиллированной воды и вскипятить до полного растворения. Разлить в соответствующие флаконы или пробирки и стерилизовать автоклавированием 15 минут при температуре 121ºС. Приготовленную среду хранить при комнатной температуре. Не замораживать.
Техника посева
Для сбора образца следует использовать ватные палочки (деревянные), которые погружают в верхнюю треть среды в транспортном контейнере. Затем отрезают выступающую часть деревянной палочки и плотно закрывают контейнер. Этикетируют контейнер и отправляют в лабораторию с минимальной задержкой. Посев и анализ образца должны быть проведены в течение 24 часов после сбора.
Меры предосторожности и ограничения процедуры
Оптимальный рост и типичная морфология возможны только после прямой инокуляции и надлежащего культивирования.
-Перед использованием среду не следует инкубировать для проверки стерильности.
-Стерильность среды может быть проверена на контрольных образцах (неиспользованные палочки). Эту среду нельзя использовать для последующих анализов.
-Среда может поддерживать жизнеспособность некоторых микроорганизмов при транспортировке. Ее нельзя использовать как среду для хранения или обогащения.
-Результаты, полученные на этой среде, зависят от качества образца и времени между сбором образца и началом лабораторного анализа. Жизнеспособность клеток со временем снижается, при длительной транспортировке возможен избыточный рост микробиоты.
Выживаемость бактерий в транспортной среде зависит от ее рецептуры и многих других факторов, включая тип среды, численность микроорганизмов в образце, температуру и длительность транспортировки. Инокуляция культуральной среды должна быть произведена в течение 24 часов.
Хранение
Среда предназначена только для использования в лабораториях. Храните среду в банке с плотно закрытой крышкой, в темном, сухом, прохладном месте (при температуре от +4°C до 30°C и влажности Контроль качества
Температура инкубации: 35°C ± 2,0
Время инкубации: 24 часа
Инокуляция: стерильным тампоном, смоченным суспензией микроорганизма 0,5 по McFarland (20 - 25°C при 24 часах).
В наполовину Кэри Блэр Это полутвердый агар, используемый для транспортировки и хранения биологических образцов, содержащих кишечные патогены, лабильные и анаэробные микроорганизмы. Как и все транспортные средства, его функция - поддерживать образец в оптимальных условиях, пока он не будет выращен. Присутствующие патогенные микроорганизмы, а также сопутствующая микробиота должны оставаться жизнеспособными, но без увеличения их популяции.
Среда Кэри Блэра является результатом изменения состава транспортной среды Стюарта. Модификация была проведена в 1964 году и заключалась в замене системы регулирования pH (глицерофосфат) на фосфатированный неорганический буфер.
Переформулировка была необходима, потому что ее создатели поняли, что глицерофосфат через определенное время может метаболизироваться некоторыми сапрофитными бактериями. Они многократно перекрывают присутствующие патогены.
Другими изменениями были устранение метиленового синего, а также корректировка pH в сторону щелочности (pH 8,4). Все эти изменения повысили эффективность транспортных средств.
Первоначально среда Кэри Блэра использовалась для поддержания кишечных патогенов, таких как Shigella flexneri, Salmonella sp, Vibrio cholerae и Campylobacter sp.
Однако позже эффективность в сохранении жизнеспособности требовательных и лабильных патогенных микроорганизмов, таких как: Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis, Bordetella pertussis, Streptococcus pneumoniae и некоторые анаэробы.
Основа
Среда Кэри Блэра содержит хлорид натрия, тиогликолят натрия, динатрийфосфат, хлорид кальция и агар.
Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс среды, динатрийфосфат и хлорид кальция уравновешивают pH. Со своей стороны, тиогликолят натрия поддерживает низкий окислительно-восстановительный потенциал, в то время как небольшая часть агара обеспечивает полутвердую консистенцию.
Среда Кэри Блэра не содержит питательных веществ, так как функция транспортной среды состоит в том, чтобы удерживать образец, не подвергая его изменениям с точки зрения влажности и микробной нагрузки; то есть предотвращает обезвоживание образца, сохраняя при этом жизнеспособность и количество присутствующих микроорганизмов.
Наконец, слабощелочной pH предотвращает гибель микроорганизмов из-за кислотности, особенно вибрионы очень чувствительны к кислотам.
Подготовка
Носители Cary Blair коммерчески доступны в виде специального готового к использованию устройства. Транспортная система закрыта пластиковым пакетом Peel Pack. Внутри него находится тампон для взятия пробы и трубка-контейнер для полутвердой среды Кэри Блера.
Также на рынке есть коммерческие предприятия, которые поставляют обезвоженную среду для ее приготовления в лаборатории.
Для этого взвесьте 13,2 г обезвоженной среды и растворите ее в одном литре дистиллированной воды. Нагрейте и встряхните препарат до полного растворения. Распределите среду по пробиркам с завинчивающейся крышкой (бакелит).
Готовьте пробирки на пару 15 минут. Дать остыть и хранить при комнатной температуре до использования.
Неинокулированная среда Кэри Блэра может оптимально храниться до 18 месяцев при комнатной температуре.
Уровень pH среды должен быть доведен до 8,4 ± 0,2. Цвет приготовленной среды - бежевый, с некоторой опалесценцией.
Использовать
Тип образцов
Среда Кэри Блэра используется в тех случаях, когда невозможно сразу обработать образцы кала, ректальные мазки и вагинальные мазки.
Когда транспортное средство недоступно, образцы можно хранить при -70 ° C.
Отбор проб
Тампон пропитывается образцом и вводится в среду Кэри Блера, не доходя до дна.
Идентификация образца
Среда Кэри Блэра должна иметь этикетку, на которой размещены основные данные, такие как: имя и фамилия пациента, идентификационный номер образца, источник сбора образца, лечащий врач, дата и время сбора. образец, предположительный диагноз, лечение антибиотиками.
Перевод
Плотно накрытый и транспортированный при комнатной температуре для образцов кала. Принимая во внимание, что для вагинальных образцов в поисках анаэробных микроорганизмов рекомендуется транспортировать образцы при 4 ° C.
Во всех случаях рекомендуемое время перевода составляет 4-6 часов, но не более 24 часов.
Если наличие Campylobacter jejuni в образцах стула, которые нельзя обработать в течение 24 часов, рекомендуется хранить в среде Кэри Блера при 4 ° C.
Исследование транспортных средств Кэри Блэра
Несколько исследований показали, что среда Кэри Блэра может оставаться жизнеспособной для энтеропатогенных микроорганизмов рода Shigella и Salmonella в течение 49 дней после взятия образца.
В свою очередь, Холерный вибрион, другой важный кишечный возбудитель, способный выжить 22 дня, в то время как Yersinia pestis (возбудитель бубонной и легочной чумы) излечивается через 75 дней.
Однако, несмотря на продемонстрированную долговечность с точки зрения восстановления этих микроорганизмов, рекомендуется как можно быстрее доставить взятые образцы в среде Кэри Блэра в лабораторию.
Аналогичным образом, как только образец попадает в лабораторию, его необходимо без промедления засеять в соответствующие питательные среды.
С другой стороны, среда Кэри Блэра, помимо того, что она полезна для переноса факультативных микроорганизмов, также рекомендуется для образцов, содержащих анаэробные патогены.
В этом смысле ДеМарко и его сотрудники в 2017 году провели исследование под названием: Выживание вагинальных микроорганизмов в трех коммерчески доступных транспортных системах.
Они продемонстрировали, что транспортная среда Кэри Блэра является лучшей транспортной средой для сохранения и восстановления вагинальных анаэробных микроорганизмов. Аналогичным образом, они показали, что самая высокая скорость восстановления была достигнута при температуре переноса 4 ° C.
Таким образом, делается вывод, что температура транспортировки вагинальных мазков (анаэробных микроорганизмов) должна быть на уровне 4 ° C. В то время как для проб фекалий в поисках факультативных микроорганизмов идеальной температурой является комнатная температура.
QA
Для оценки контроля качества транспортной среды Кэри Блэра штаммы, известные какShigella sonnei ATCC 11060,Salmonella choleraesuis ATCC 14028,Холерный вибрион Y Campylobacter sp.
Среду инокулируют выбранным штаммом и выдерживают при комнатной температуре в течение 24 часов. Затем их высевают в соответствующие питательные среды. Во всех случаях ожидается удовлетворительное выздоровление рассматриваемого микроорганизма.
Транспортная система со средой Кари-Блэйра рекомендована для сбора, транспортировки и хранения фекальных и ректальных проб, содержащих Salmonella spp., Shigella spp., Vibrio spp., Campylobacter spp., Pseudomonas spp., Escherichia coli и другие микроорганизмы. Каждая упаковка содержит 100 стерильных полистироловых пробирок со средой Cary-Blair и стерильным тампоном для взятия мазка на пластиковой палочке, с пробкой
Функциональное назначение
Среда Кэри-Блэра без угля используется для сбора и транспортировки клинического материала. Первоначально транспортная среда была предложена Stuart и соавт. для доставки в лабораторию материала, содержащего гонококки. Позже, для пересылки проб фекалий, Кэри и Блэйр разработали новую среду, в которой было меньше питательных веществ, низкий окислительно-восстановительный потенциал и высокое значение рН. В этой среде минимум питательных веществ, чтобы сохранить максимальное количество живых бактерий без размножения. Тиогликолят натрия введен в состав среды для создания низкого окислительно-восстановительного потенциала. Среда имеет слабощелочное значение рН, что минимизирует гибель бактериальных клеток вследствие закисления среды.
Бактериальные культуры гарантированно сохраняют жизнеспособность до 48 часов при t° 15-22°C.
Технические характеристики
Транспортная среда Кери Блейр представляет собой модификацию базовой транспортной среды Стюарта, предназначенную специально для транспортировки и хранения фекальных и ректальных проб, содержащих Salmonella spp., Shigella spp., Vibrio spp., Campylobacter spp., Pseudomonas spp., Escherichia coli и другие микроорганизмы. Данная среда является стандартной для транспортировки анаэробов. Бактериальные культуры гарантированно сохраняют жизнеспособность до 48 часов при температуре 15-22°С. Тампон-зонд упакован в ударопрочную ПП-пробирку (12*150 мм). Пробирка снабжена этикеткой, на которой указаны: номер партии, дата стерилизации, срок годности, компания-производитель, компания-поставщик, регистрационное удостоверение, а также предусматривает место для нанесения сведений о пациенте и пробе. Край этикетки скреплен с пробкой, закрывающей пробирку с тампоном - этикетка служит контролем первого вскрытия.
Читайте также: