Методы посева микроорганизмов на питательные среды презентация

Обновлено: 07.07.2024

Вы можете изучить и скачать доклад-презентацию на тему Питательные среды для медицинской микробиологии. Методы и техники посевов. Презентация на заданную тему содержит 37 слайдов. Для просмотра воспользуйтесь проигрывателем, если материал оказался полезным для Вас - поделитесь им с друзьями с помощью социальных кнопок и добавьте наш сайт презентаций в закладки!

Метаболизм бактерий - совокупность двух противоположных, но взаимосвязанных процессов — катаболизма, или энергетического метаболизма, и анаболизма, или пластического (конструктивного) метаболизма. У прокариот, так же как у эукариот, в процессе ферментативных катаболических реакций происходит выделение энергии, которая аккумулируется в молекулах АТФ. В процессе ферментативных анаболических реакций эта энергия расходуется на синтез многочисленных макромолекул органических соединений, из которых в конечном итоге строятся составные части микробной клетки.

Таблица 1 Приблизительный элементарный состав бактериальных клеток (Р. Стейниер, Э. Эдельберг, Дж. Ингрем,1979)

Источники углерода и азота В микробиологии источником органических веществ являются: 1. Мясной экстракт, настой - продукты специальной обработки мяса животных 2. Пептон – продукт ферментативного (пепсин, трипсин) гидролиза белков мяса 3. Рыбный гидролизат (ГРМ) 4. Дрожжевой автолизат и гидролизат 5. Казеин – фосфорсодержащий белок молока – гидролизат 6. Гидролизаты растительного происхождения (соевый) 7. Другие продукты

Факторы роста бактерий аминокислоты, пуриновые и пиримидиновые основания, липиды, витамины, железопорфирины (гем) и другие соединения.

Питательные среды. Состав Натуральные – состоят из продуктов животного или растительного происхождения и имеют неопределенный химический состав. Например: овощные и фруктовые соки, животные ткани, кровь, молоко, яйца и т.д. (МПА, МПБ). Полусинтетические – в состав входят соединения известной химической природы и вещества неопределенного состава. Например: МПБ с глюкозой, среда Эндо, среда Сабуро. Синтетические – содержат только химически чистые соединения в точных концентрациях. Применяют в лабораторных экспериментах. Например: среда Чапека, Омелянского, Ушинского и т.д.

Питательные среды. Назначение Универсальные (общего назначения)- пригодны для выращивания многих видов микроорганизмов и применяются как основа для специальных питательных сред. Примеры: МПБ, МПА, среда Хоттингера, ГРМ, тиогликолевая среда. Специальные применяют в тех случаях, когда микроорганизмы не растут на простых средах. К ним принадлежит кровяной, сывороточный агар, сывороточный бульон, асцитический бульон, асцит-агар и другие. 1. Элективные среды - на них одни микроорганизмы растут быстрее и более интенсивно, чем другие виды бактерий. Например, 1 % щелочная пептонная вода является элективной средой для холерных вибрионов, среды Ру и Леффлера – для возбудителей дифтерии. 2. Селективные - благодаря селективным добавкам (желчь, краски, антибиотики и др.) способны подавлять развитие одних видов микроорганизмов, но не влияют на другие виды. Примеры: среда Мюллера является селективной для тифо-паратифозных бактерий, фуразолидоно-твиновий агар – для коринебактерий и микрококков. Добавление антибиотиков в состав сред делает их селективными для грибов (напр. среда Сабуро и др.).

Питательные среды. Назначение 3. Дифференциально-диагностические - группа сред, которые позволяют определить биохимические свойства микроорганизмов и провести их дифференциацию. Они разделяются на среды для определения протеолитических, пептолитических, сахаролитических, гемолитических, липолитических, редуцирующих свойств (среды Эндо, Левина, Плоскирева, Гисса). 4. Консервирующие (траспортные)- предназначены для сохранения жизнеспособности микроорганизмов от момента взятия биоматериала до посева для диагностики

Категории питательных сред по консистенции: Жидкие (бульоны) – изучение физиолого-биохимических особенностей и накопление биомассы микроорганизмов Полужидкие (1% агара) – хранение культур и культивирование анаэробов Плотные (3-5% агара)– выделение чистых культур, накопление, количественный учет, изучение культуральных свойств, антагонистические взаимоотношения Сыпучие – хранение посевного материала в промышленности (пшено, отруби) Сухие – выпускаются промышленностью для приготовления питательных сред

№ слайда 1

Питательные среды для медицинской микробиологии. Методы и техники посевов микроорганизмов

№ слайда 2

№ слайда 3

Типы питания бактерий

№ слайда 4

Таблица 1 Приблизительный элементарный состав бактериальных клеток (Р. Стейниер, Э. Эдельберг, Дж. Ингрем,1979)

№ слайда 5

№ слайда 6

№ слайда 7

№ слайда 8

№ слайда 9

№ слайда 10

№ слайда 11

Уплотнители питательных сред

№ слайда 12

№ слайда 13

Транспортная система со средой Стюарта Среда Стюарта представляет собой полужидкий, бедный питательными веществами субстрат для сохранения и транспортировки широкого спектра патогенных микроорганизмов, таких, как Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae, Corynebacterium diphteriae, Trichomonas vaginalis, Streptococcus sp., Salmonella sp., Shigella sp. и др. Наиболее требовательные микроорганизмы сохраняются в данной среде более суток, прочие – до нескольких дней. Наличие в среде тиогликолата подавляет ферментативную активность бактерий, а отсутствие азота предотвращает их размножение.

№ слайда 14

Транспортная система со средой Кери Блэйр Транспортная среда Кери Блейр представляет собой модификацию базовой транспортной среды Стюарта, предназначенную специально для фекальных образцов. Глицерофосфат, являющийся метаболитом некоторых энтеробактерий (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, и др.), заменен неорганическим фосфатом, удален метиленовый синий и рН среды увеличена до 8,4. Среда Кери Блейр позволяет сохранять большинство патогенов, включая требовательные микроорганизмы, такие как Neisseria sp., Haemophilus sp., Streptococcus sp. Данная среда является стандартной для транспортировки анаэробов.

№ слайда 15

Транспортная система со средой Эймса Транспортная среда Эймса представляет собой очередную модификацию базовой транспортной среды Стюарта, в которой глицерофосфат заменен неорганическим фосфатом, поскольку глицерофосфат является метаболитом некоторых энтеробактерий (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, ets.) и может поддерживать рост некоторых грамотрицательных микроорганизмов. Метиленовый синий заменен на активированный уголь фармацевтического качества. В среду добавлены кальций и магний для поддержания проницаемости бактериальных клеток. Эта среда способна более 3 дней поддерживать такие микроорганизмы, как Neisseria sp., Haemophilus sp., Corynebacteria, Streptococci, Enterobacteriaceae и др., однако наилучшие результаты дает культивирование в течение первых 24 часов.

№ слайда 16

Универсальные накопительные среды Мясопептонный агар (МПА) и мясопептонный бульон (МПБ) Являются основными средами для посевов микроорганизмов, для проверки чистоты культур перед биохимическим и серотипированием. Их используют для культивирования и подсчета неприхотливых микроорганизмов. В полужидком виде среда может быть использована для хранения контрольных (эталонных) микроорганизмов.

№ слайда 17

Универсальные накопительные среды Среда Хоттингера Предназначен для культивирования различных микроорганизмов, таких как энтеробактерии, синегнойная палочка, стафилококки, некоторые виды стрептококков. При необходимости может быть обогащен углеводами, солями. Содержит гидролизат Хоттингера, который получают путём ферментативного гидролиза мясного фарша (говяжьего) панкреатином с последующим фильтрованием и добавлением хлороформа в качестве консерванта.

№ слайда 18

Универсальные накопительные среды Среда Мюллера-Хинтона Эту среду используют для культивирования Neisseria sp. и для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным средствам.

№ слайда 19

Специальные дифференциально-диагностические среды

№ слайда 20

Специальные дифференциально-диагностические среды

№ слайда 21

Дифференциально-диагностические среды Среда МакКонки Среды МакКонки в качестве дифференциальных рекомендуют для селективного выделения энтеробактерий и близких к ним грамотрицательных палочек.

№ слайда 22

Дифференциально-диагностические среды Среда Эндо Эту среду рекомендуют для выделения и дифференциации грамотрицательных микроорганизмов кишечной группы. Эта среда разработана Endo как культуральная среда для дифференциации микроорганизмов, ферментирующих и неферментирующих лактозу. Она используется для микробиологического исследования воды, стоков, молочных и других пищевых продуктов. Сульфит натрия и основной фуксин обладают подавляющим эффектом на грамположительные микроорганизмы. Лактоза разлагается микроорганизмами до альдегида и кислоты. Альдегид в свою очередь освобождает фуксин из фуксин-сульфитного комплекса, усиливая красное окрашивание колоний. У кишечных палочек эта реакция очень выражена и сопровождается кристаллизацией фуксина, что проявляется зеленоватым металлическим блеском (фуксиновый глянец) колоний.

№ слайда 23

Дифференциально-диагностические среды Желточно-солевой агар Эту среду используют в качестве селективной для выделения клинически значимых культур стафилококков. Среда содержат протеозопептон и мясной экстракт, что делает ее очень питательной ввиду содержания необходимых ростовых факторов. Вместе с тем рост бактерий, кроме стафилококков, подавляется высокой концентрацией (7,5%) хлорида натрия. Маннит является ферментируемым и дифференцирующим субстратом, а также источником углерода. Добавление (до 5% об/об) эмульсии яичного желтка дает возможность определить липазную активность микроорганизмов. Эмульсия в солевой среде становится прозрачной, поэтому при наличии липазной активности вокруг колоний формируется желтая непрозрачная зона.

№ слайда 24

Дифференциально-диагностические среды Вильсона-Блера или Висмут-сульфитный агар Селективная среда для выделения сальмонелл. Пептический перевар животной ткани и мясной экстракт служат источником азотистых питательных веществ, углерода, серы, витаминов группы В и микроэлементов, необходимых для роста указанных бактерий. Бриллиантовый зеленый подавляет рост всех грамположительных бактерий. Глюкоза является ферментируемым углеводом. Сульфат железа позволяет выявить продукцию сероводорода. Висмут является тяжелым металлом, который подавляет рост большинства грамотрицательных кишечных бактерий, кроме сальмонелл. Сальмонеллы восстанавливают сульфат железа в присутствии глюкозы и сульфита висмута до сульфида железа, который окрашивает их колонии в черный цвет.

№ слайда 25

Специальные элективные среды Среда Леффлера Эту среду с добавлением лошадиной сыворотки используют для культивирования Corynebacterium diphtheriae из клинического материала и пересевов чистых культур этих микроорганизмов. Высокая концентрация сыворотки помогает определить протеолитическую активность микроорганизмов, а также пигментообразование. Пептон и мясной экстракт обеспечивают микроорганизмы важнейшими питательными веществами. Глюкоза является ферментируемым субстратом и источником энергии.

№ слайда 26

Специальные селективные среды Кампилобакагар Селективная среду для кампилобактерий которая состояла из основы кровяного агара с бараньей кровью или лошадиной кровью и антибиотиками . Антимикробные компоненты, существенно подавляют рост нормальной микрофлоры, способствуя росту и выделению из испражнений Campylobacter fetus ssp. jejuni. Присутствие амфотерицина В в добавке существенно или полностью подавляет рост грибов, введенный позже цефалотин усиливает подавление нормальной кишечной микрофлоры . Колонии Campylobacter fetus ssp. jejuni имеют слизистый характер, плоские серые с неправильными очертаниями или приподнятые, округлые, без гемолиза. Некоторые штаммы могут образовывать желто-коричневые или розоватые колонии. На влажной поверхности среды может наблюдаться слияние роста или роение.

№ слайда 27

Техника посева на питательные среды

№ слайда 28

Методы выделения чистой культуры Чистой культурой называют такую культуру, которая содержит микроорганизмы одного вида. Выделение чистых культур бактерий - обязательный этап бактериологического исследования в лабораторной диагностике инфекционных болезней, в изучении микробной загрязненности различных объектов окружающей среды, и, в целом, при любой работе с микроорганизмами. Исследуемый материал (гной, мокрота, фекалии, кровь и другой материал от больных; вода, почва, воздух, пищевые продукты, трупы животных и человека, переносчики) обычно содержит ассоциации микробов. Выделение чистой культуры позволяет изучить морфологические, культуральные, биохимические, антигенные и другие признаки, по совокупности которых определяется видовая и типовая принадлежность возбудителя, то есть производится его идентификация.

№ слайда 29

Посев однократным истощающим штрихом

№ слайда 30

Посев истощающим штрихом секторами

№ слайда 31

Учет результатов посева мочи секторным методом

№ слайда 32

Посев на скошенный агар, метод Шукевича

№ слайда 33

№ слайда 34

№ слайда 35

Метод Коха (метод серийных разведений) последовательное разведение исследуемого материала в жидкой питательной среде до концентрации одной клетки в объеме.

№ слайда 36

Метод мембранных фильтров

№ слайда 37

Первый слайд презентации: Техники посева микроорганизмов

Лекция 14 2019-2020 уч.год Преподаватель Скворцова И.Е.

Слайд 2: Бактериологический метод

Состоит из: 1. посева материала на искусственные питательные среды 2. выделения чистых культур ПБА 3. их последующей идентификации

Слайд 3

Техника посева зависит от: -характера засеваемого материала, консистенции питательной среды, цели исследования

Слайд 4: Для проведения посева необходимы

Подлежащий исследованию материал Питательные среды Инструменты для посева Металлический поддон для переноса засеянных чашек Металлические коробки для переноса пробирок Емкость с крышкой для сброса инфицированного материала Спиртовка

Слайд 5: Инструменты для осуществления посевов:

Бактериологическая петля, Шпатели стеклянные, металлические Шпатель Дригальского, Пастеровские или градуированные пипетки специальный ватный тампон

Слайд 6

Слайд 7

Слайд 8: Техника посевов на плотные и жидкие питательные среды

При посеве в жидкую питательную среду петлю с находящимся на ней материалом погружают в среду. Если материал с петли не снимается, его растирают на стенке пробирки/сосуда, а затем смывают жидкой средой. Материал, набираемый в пастеровскую или градуированную пипетку, вливают в питательную среду

Слайд 9

Слайд 10

Остальными тремя пальцами держат бактериологическую петлю. После вынимания пробки открытую пробирку держат в наклонном положении, чтобы не попала посторонняя микрофлора из воздуха.

Слайд 11

Слайд 12

При посеве на плотную питательную среду из пробирки в чашку Петри пробирку фиксируют II, III и V пальцами левой/нерабочей руки, а крышку чашки Петри приоткрывают I и IV пальцами левой руки так, чтобы проходила петля или шпатель. Исследуемый материал, взятый петлей из пробирки втирают в поверхность ПС у края чашки. Затем петлю прожигают

Слайд 13

Техника посева по Дригальскому. Посев осуществляют стерильным шпателем на три чашки Петри с плотной питательной средой. На середину первой чашки пипеткой или бактериологической петлей вносят исследуемый материал, который распределяют по поверхности чашки круговыми движениями, вращая приоткрытую чашку левой рукой. Не стерилизуя, шпатель переносят во вторую, а затем в третью чашку, проводя распределение истощенного материала по их поверхности

Слайд 14

Слайд 15

Метод Коха (количественный метод). Готовят 10-кратные разведения исследуемого материала в стерильном физиологическом растворе. Отбирают по 1 мл из каждого разведения, которые вносят в пробирки с расплавленным и охлажденным до 45 °С агаром. После перемешивания содержимое пробирки выливают в стерильную чашку Петри.

Слайд 16

Слайд 17

Техника посева петлей секторами. Чашку Петри делят на 4-5 радиальных секторов. Взяв материал стерильной петлей, делают посев одной петлей на всех секторах.

Слайд 18

Слайд 19: Техника посева по Голду

Исследуемый материал отбирают петлей диаметром 2 мм и засевают на чашку Петри с питательной средой. Для этого чашку Петри со стороны дна предварительно расчерчивают на четыре квадрата. В первом квадрате делают посев исследуемого материала 20-30 штрихами. Петлю прожигают и проводят четыре перпендикулярных штриха из материала первого квадрата во второй квадрат. Петлю снова прожигают и проводят четыре перпендикулярных штриха из второго квадрата в третий, захватывая последовательно материал от первого, затем второго штриха, далее - третьего и четвертого штрихов. Посевы помещают в термостат с температурой 37 °С на 24 ч.

Выполнила: ученица 9Б класса

Руководитель: учитель биологии

Изучить классификацию питательных сред, выяснить на каких питательных средах лучше выращивать микроорганизмы в школьных условиях постановки опытов.

Состав питательных сред:

По составу питательные среды подразделяются на две группы: естественные (натуральные) и синтетические. Естественными обычно называют среды, которые состоят из продуктов животного или растительного происхождения, имеющих сложный неопределенный химический состав. Основой таких сред являются различные части зеленых растений, животные ткани, солод, дрожжи, овощи, навоз, почва, вода морей, озер и минеральных источников. Большинство из них используется в виде экстрактов или настоев. На естественных средах хорошо развиваются многие микроорганизмы, так как в этих средах имеются, обычно, все компоненты, необходимые для роста и развития.

(Madurella cinerea) мадурела серая на питательной среде

Зная физиологические особенности соответствующей группы микробов, можно подобрать такие условия культивирования (состав среды, ее активную кислотность, условия аэрации, температуру и др.), при которых будут развиваться лишь микроорганизмы этой группы. Это позволяет вести различные биологические процессы в лаборатории и в производстве без предварительной стерилизации среды. Такие среды применяются главным образом для выделения микроорганизмов из мест их естественного обитания, для получения накопительных культур.

Питательные среды применяют различной консистенции: твердые

Питательные среды применяют различной консистенции: жидкие

Агар-агар — растительный коллоид, получаемый из некоторых морских водорослей. В его состав входят главным образом полисахариды с ничтожным содержанием азотистых веществ .

Читайте также: