Нормобиоты что это рост посев

Обновлено: 08.07.2024

You are using an outdated browser. Please upgrade your browser or activate Google Chrome Frame to improve your experience.

(+373) 22 944 944 (+373) 69 944 944
Blvd. Traian 7/1, Chisinau

Бактериальный вагиноз (БВ) – инфекционный невоспалительный синдром, характеризующийся значительным снижением количества (или отсутствием) нормальной лактофлоры влагалища и ее заменой на полимикробные ассоциации строгих анаэробов. БВ – самая распространенная инфекция нижнего отдела мочеполовой системы у женщин детородного возраста. По данным различных авторов 25-30% женщин страдают этим заболеванием. Бактериальный вагиноз, по последним данным, является одной из причин раннего прерывания беременности, преждевременных родов, хориоамнионита, послеродового эндометрита, послеоперационных осложнений после гинекологических операций, воспалительных заболеваний малого таза у женщин. При бактериальном вагинозе увеличивается риск инфицирования половыми инфекциями, включая ВИЧ. Согласно последним рекомендациям ВОЗ 2005 г. бактериальный вагиноз относится к эндогенным инфекциям репродуктивного тракта человека (RTI).

Диагноз
Диагноз бактериального вагиноза ставится либо при определении клинико-лабораторных критериев Амселя, либо при определении баллов Нугента, либо при обнаружении так называемых высокоспецифичных маркеров (Atopobium vaginae, Clostridium spp.) бактериального вагиноза. В настоящее время, традиционным методом этиологической диагностики любого инфекционного процесса является культуральный метод. Однако этот способ имеет ряд серьезных недостатков:

Длительные сроки культивирования микроорганизмов (в среднем 5 дней).
Анаэробные микроорганизмы (наиболее часто встречаемые при БВ) трудно культивируются, либо не поддаются культивированию вообще.
При доставке материала в лабораторию с использованием транспортных сред продолжается размножение микроорганизмов с изменением их количественного соотношения.
В случае использования сухого тампона для взятия биоматериала, срок транспортировки образца в лабораторию ограничен часами (т.к. необходимо сохранить жизнеспособность).
Культуральный метод не дает точной количественной оценки и используется только для ориентировочной оценки соотношения микроорганизмов между собой.

Объективные и субъективные ограничения методов лабораторной диагностики, применяемых сегодня в мировой медицинской практике, приводят к большому количеству диагностических ошибок: при манифестированном БВ – более чем в 60%, при кандидозном вульвовагините – до 77%; при микст-инфекции – до 87% (Schwiertz A. et al. 2006). С другой стороны, невысокая чувствительность критериев Амселя и наличие бессимптомных форм бактериального вагиноза заставило искать другие методы и критерии подтверждения диагноза.
Достижения молекулярной биологии предоставили новые возможности в изучении микробного состава различных биотопов человека, обеспечивающие принципиально новый подход к исследованию условно-патогенной флоры, основанный на комплексной оценке основных групп микроорганизмов, формирующих урогенитальный биоценоз.
Новый метод исследования микробиоценоза влагалища методом ПЦР – уникальное исследование, позволяющее наиболее полно и точно охарактеризовать качественный и количественный состав биоценоза влагалища. Достоинством нового метода является возможность исследовать нормофлору, наличие, степень и характер дисбаланса условно-патогенной инормальной флоры.
В ходе исследования выполняется количественная оценка общей бактериальной массы, урогенитальной нормофлоры (лактобациллы) и комплекса аэробных и анаэробных микроорганизмов, микоплазм, грибов рода Candida, участвующих в развитии дисбиотических процессов в урогенитальном биоценозе.

Показания к применению метода

Наличие субъективных и/или объективных симптомов, связанных с урогенитальным трактом, у женщин репродуктивного возраста вне беременности
Планирование беременности
Репродуктивные потер
Подготовка к экстракорпоральному оплодотворению
Планируемое оперативное вмешательство в области малого таза

Данная технология предусматривает возможность анализа ряда показателей
Контроль взятия биоматериала
Общая бактериальная масса
Нормобиота

Аэробные микроорганизмы (факультативные анаэробы)

Enterobacterium spp.
Streptococcus spp.
Staphylococcus spp.

Анаэробные микроорганизмы (строгие анаэробы)

Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia
Porphyromonas spp.
Eubacterium spp.
Sneathia spp./Leptotrihia spp.
Fusobacterium spp.
Megasphaera spp.
Veilonella spp./Dialister spp.
Lachnobacterium spp./Clostridium spp.
Mobiluncus spp./Corynebacterium spp.
Peptostreptococcus spp.
Atopobium vaginae

Mycoplasma (hominis +genitalium)
Ureaplasma (urealyticum + parvum)

Интерпретация полученных результатов

НОРМОЦЕНОЗ
Общая бактериальная масса (ОБМ) – показатель, по которому можно судить об общем количестве бактерий, присутствующих в исследуемой биопробе. Основным представителем нормобиоты урогенитального тракта у здоровых женщин репродуктивного возраста являются представители рода Lactobacillus (LB). LB оцениваются как в абсолютных, так и относительных показателях.
В норме LB являются главной составляющей ОБМ, поэтому абсолютный показатель уровня лактобацилл практически не отличается от абсолютного показателя общей бактериальной массы и соответствует 10 6 –10 8 для вагинальных соскобов, для уретры и цервикального канала – на порядок меньше – 10 5 – 10 7 .
Снижение относительного показателя LB служит одним из критериев дисбаланса урогенитальной биоты. Умеренное снижение относительного показателя LB соответствует интервалу значений от -0,3 до -1,0 (70%-10% от ОБМ). Значительное снижение относительного показателя ЛБ соответствует значениям ниже, чем -1,0 (меньше 10% от ОБМ). Снижение ОБМ ниже указанных пороговых значений, соответственно, свидетельствует о недостаточном заселении исследуемого биотопа бактериями, возможно вследствие антибиотикотерапии, гипоэстрогении различного генеза и др.

Аэробные и анаэробные условно-патогенные микроорганизмы
Абсолютный показатель 4 , относительный показатель – меньше -3 (0,1%), отдельные представители условно-патогенной микрофлоры могут иметь относительный показатель от -3 до -2 (0,1%-1%) – слабо увеличенный уровень.

Mycoplasma hominis и Ureaplasma (urealyticum+parvum)
Отсутствуют или их абсолютный показатель 4 .

Грибы рода Candida
Отсутствуют или их абсолютный показатель 3 .

ДИСБАЛАНС I (умеренный)
Общая бактериальная масса
Абсолютный показатель 10 6 -10 8 для влагалища, 10 5 -10 7 – для уретры и цервикального канала.

Нормобиота (Lactobacillus spp.)
Абсолютный показатель 10 6 -10 8 , 10 5 -10 7 – для уретры и цервикального канала; относительный показатель – от -0,3 до -1 (70%-10%).

Аэробные и анаэробные условно-патогенные микроорганизмы
Абсолютный показатель >10 4 , относительные показатели различных условно-патогенной микрофлоры варьируют от -3 до -1 (0,1%-10%).

Mycoplasma hominis и Ureaplasma (urealyticum + parvum)
В норме отсутствуют или абсолютный показатель > 10 4 .

Грибы рода Candida spp.
В норме отсутствуют или абсолютный показатель > 10 3 .

ДИСБАЛАНС II (выраженный)
Общая бактериальная масса
Абсолютный показатель варьирует в широких пределах, он может быть как меньше 10 5 , так и соответствовать норме (10 6 -10 8 ) в зависимости от этиологии и патогенеза урогенитального заболевания. Как правило, во влагалище ОБМ на 1 порядок выше, чем в уретре или цервикальном канале.

Нормобиота (Lactobacillus spp)
Абсолютный показатель может варьировать от полного отсутствия лактобацилл до значений 10 5-6 (как правило во влагалище количество лактобацилл на 1 порядок выше, чем в уретре и цервикальном канале); относительный показатель – меньше -1 (0-10%).

Аэробные и анаэробные условно-патогенные микроорганизмы
В большинстве случаев абсолютный показатель больше >10 5 , относительные показатели различных представителей условно-патогенной микрофлоры могут варьировать от -3 до 0 (0,01%-100%), однако относительные показатели хотя бы её части находятся в пределах от -1 до 0 (10%-100%).

Mycoplasma hominis и Ureaplasma (urealyticum + parvum)
Могут отсутствовать или абсолютный показатель >10 4 .

Грибы рода Candida spp.
Отсутствуют или абсолютный показатель > 10 3 .

Классификация дисбалансов в зависимости от этиологической структуры

Анаэробный
Дисбаланс, вызванный преимущественно анаэробными микроорганизмами: Gardnerella vaginalis /Prevotella bivia/Porphyromonas spp; Atopobium vaginae; Eubacterium spp; Sneathia spp /Leptotrihia spp/Fusobacterium spp; Megasphera spp/Veilonella spp/Dialister spp; Lachnobacterium spp/Clostridium spp; Mobiluncus spp/Corynebacterium spp; Peptostreptococcus spp.

Аэробный
Дисбаланс, вызванный преимущественно аэробными микроорганизмами: Enterobacteraceae, Streptococcus spp и Staphylococcus spp.

Смешанный
Дисбаланс, вызванный сочетанием аэробной и анаэробной бактериальной биоты, возможно в сочетании с дрожжевыми грибами рода Candida.

В методе предусмотрена возможность контроля качества взятия материала. Данный показатель служит для оценки правильности взятия материала врачом-клиницистом и позволяет отличать случаи биоценозов со сниженной бактериальной массой, от случаев некорректного взятия материала. Это исключает также получение ложноотрицательных результатов исследования.
Программное обеспечение позволяет автоматически анализировать полученные данные и выдавать заключение в удобном для интерпретации виде. Метод предназначен как для повседневной лабораторной диагностики, так и в качестве чувствительного и высокоспецифичного инструмента для научных исследований.

Дисбаланс микробиоты урогенитального тракта женщин, обусловленный условно-патогенными микроорганизмами, характеризуется изменением качественного и/или количественного состава нормобиоты, метаболическими и иммунными нарушениями, в ряде случаев клиническими проявлениями. Частным проявлением выраженного дисбаланса биоты является бактериальный вагиноз.

Полное выявление этиологической структуры заболевания позволит своевременно установить диагноз, выявить осложненные формы течения заболевания и, соответственно, провести направленную адекватную терапию, в том числе на ранней стадии, до развития осложнений.

Способ позволяет в короткие сроки объективно оценить:

Качественный и количественный состав биоты;
Дифференцировать состояния физиологического равновесия и дисбаланса;
Контролировать качество взятия биопробы.

Показатели, анализируемые с помощью набора Фемофлор 16:

Контроль взятия материала
Общая бактериальная масса
Lactobacillus spp.
Enterobacteriaceae
Streptococcus spp.
Eubacterium spp.
Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp.
Staphylococcus spp.
Sneathia spp./Leptotrihia spp./Fusobacterium spp.
Megasphaera spp./Veilonella spp./Dialister spp.
Lachnobacterium spp./ Clostridium spp.
Mobiluncus spp./Corynebacterium spp.
Peptostreptococcus spp.
Atopobium vaginae
Ureaplasma (urealyticum + parvum)
Mycoplasma (hominis +genitalium )
Candida spp.

Контроль взятия материала (КВМ).

Необходимым условием количественного анализа урогенитальной биоты является правильная техника взятия соскоба с поверхности соответствующего биотопа (уретра, цервикальный канал, влагалище). Показателем правильного взятия биоматериала является достаточное количество геномной ДНК человека в пробе. Источником этой ДНК являются эпителиальные клетки, попадающие в пробу при правильной технике взятия биоматериала. Оптимальная величина этого показателя должна составлять не менее 105.

Показатель оценивается в абсолютных значениях.

Общая бактериальная масса (ОБМ).

Показатель, по которому можно судить об общем количестве бактерий. Оценивается в абсолютных значениях. Обычно эта величина составляет 106 – 108. Величина ОБМ большая, чем 108, свидетельствует об избыточном микробном обсеменении биоматериала. Чем больше величина ОБМ, тем больше величина микробной массы в образце. Величина показателя ОБМ меньшая, чем 105 соответствует сниженному количеству микроорганизмов в образце, что может быть следствием атрофических процессов или антибиотикотерапии.

Оценка нормобиоты.

Главным представителем нормофлоры урогенитального тракта у женщин репродуктивного возраста являются представители рода Lactobacillus (ЛБ).

Оценка нормобиоты производится как в абсолютных значениях, так и относительно общей бактериальной массы. В норме абсолютное количество лактобацилл практически не отличается от общего количества бактерий, то есть составляет 106–108

Относительное количество лактобацилл – разница между Lg10 общей бактериальной массы (ОБМ) и Lg10 лактобацилл (ЛБ). Например, если общее количество бактерий составляет 107, Lg10 этого количества будет равен 7. В норме разница логарифмов (порядков) ОБМ и ЛБ не должна превышать 0,5, что определяется погрешностью метода.

Умеренно сниженный уровень лактобацилл – при разнице логарифмов (порядков) от 0,5 до 1.

Значительно сниженный уровень лактобацилл–при разнице логарифмов (порядков) больше чем 1.

Чем меньшую долю в ОБМ составляют лактобациллы, тем сильнее угнетена нормальная флора.

Оценка аэробной и анаэробной условно-патогенной микрофлоры.

Количественный уровень аэробной и анаэробной условно-патогенной микрофлоры можно оценить как в абсолютных, так и относительных значениях. Абсолютные количества соответствуют показателям при бактериологичесих исследованиях. Например, количество микроорганизма Gardnerella vaginalis составляет 103.

Относительное количество того или иного микроорганизма вычисляется по отношению к количеству Lactobacillus spp., по разнице между Lg10 лактобацилл и Lg10 конкретного микроорганизма аналогично тому, как вычисляется относительное количество самих лактобацилл по отношению к общему количеству бактерий (ОБМ).

В урогенитальном тракте женщин репродуктивного возраста как аэробные, так и анаэробные условно-патогенные микроорганизмы могут быть причиной патологических процессов в урогенитальном тракте.

Оценка микоплазм, уреаплазм и грибов рода Candida.

Количественную оценку уровня микоуреаплазм (Mycoplasma и Ureaplasma), а также дрожжеподобных грибов рода Candida, проводят только по абсолютному количеству. Клинически значимый уровень Mycoplasma и Ureaplasma составляет 104, дрожжеподобных грибов рода Candida spp - 103.

Показания к назначению анализа

Наличие инфекционно-воспалительного процесса урогенитального тракта у женщин, вызванного изменением количественного и качественного состава условно-патогенной биоты;
Профилактическое обследование на урогенитальные инфекции женщин, ассоциированные с условно-патогенной биотой

Материал для исследования

Для исследования используют соскобы эпителиальных клеток

из влагалища (заднебоковые своды);
уретры;
цервикального канала

Критерии количественной оценки биоты

Абсолютный показатель является ориентировочным, зависит от техники взятия биоматериала и способа выделения ДНК.

Относительный показатель - более точный, чем абсолютный – разница десятичных логарифмов (порядков) между общей бактериальной массой (ОБМ) и лактобациллами (ЛБ), а также между лактобациллами (ЛБ) и условно-патогенными микроорганизмами (УПМ).

Нормоценоз

Состояние нормоценоза характеризуется следующими показателями:

Общая бакмасса имеет нормальный уровень
Нормофлора (Lactobacillus spp) имеет нормальный уровень.
Микоплазмы: Mycoplasma hominis и Ureaplasma (Urealiticum + Parvum) отсутствуют или могут присутствовать в количествах, не имеющих диагностического значения
Аэробная и анаэробная условно-патогенная флора отсутствует, имеет нормальный уровень, единичные представители УПМ могут иметь слабо увеличенный уровень.
Грибы рода Candida отсутствует или может обнаруживаться в количестве, не имеющем диагностического значения.

Умеренный дисбиоз

Состояние умеренного дисбиоза характеризуется следующими показателями:
Общая бакмасса имеет нормальный уровень
Нормофлора (Lactobacillus spp) имеет нормальный или умеренно сниженный уровень.
Микоплазмы: Mycoplasma hominis и Ureaplasma (Urealiticum + Parvum) могут присутствовать в диагностически значимых количествах.
Аэробная и анаэробная условно-патогенная флора: часть условно-патогенной биоты имеет слабо и умеренно повышенный уровень.
Грибы рода Candida могут присутствовать в диагностически значимых количествах.

Выраженный дисбиоз.

Состояние выраженного дисбиоза характеризуется следующими показателями:

Общая бактериальная масса может иметь нормальный, повышенный или пониженный уровень.
Нормофлора (Lactobacillus spp) может отсутствовать, иметь нормальный, умеренно или значительно сниженный уровень.
Микоплазмы: Mycoplasma hominis и Ureaplasma (Urealiticum + Parvum) могут присутствовать в диагностически значимых количествах.
Аэробная и анаэробная условно-патогенная флора: большая часть представителей условно-патогенной микрофлоры имеют умеренно или значительно увеличенный уровень.
Грибы рода Candida могут присутствовать в диагностически значимых количествах.

Этиологическая структура выявленного дисбаланса:

Анаэробный, если дисбаланс вызван анаэробными микроорганизмами: Gardnerella vaginalis /Prevotella bivia/Porphyromonas spp; Atopobium vaginae; Eubacterium spp; Sneathia spp /Leptotrihia spp/Fusobacterium spp; Megasphera spp/Veilonella spp/Dialister spp; Lachnobacterium spp/Clostridium spp; Mobiluncus spp/Corynebacterium spp; Peptostreptococcus spp

Аэробный, если дисбаланс, вызван аэробной микрофлорой: Enterobacteraceae, Streptococcus spp и Staphylococcus spp

Смешанный если дисбаланс, вызван любым сочетанием аэробной, анаэробной флоры и грибами рода Candida.

Инфекционный процесс, вызванный грибами рода Candida, может протекать без дисбиотических нарушений со стороны условно-патогенной флоры, а также может сочетаться с дисбиозом.

Женщинам накануне необходимо воздержаться от туалета половых органов и спринцевания. Проводить исследование через 48 часов после кольпоскопии, через 24 часа после УЗ-исследования с помощью влагалищного датчика, через 2 недели после применения пробиотиков, эубиотиков, через 4 недели после применения антибиотиков, через 10 дней после применения местных антисептических средств. Не рекомендуется сдавать во время менструального цикла.

Lactobacillus spp у женщин – это грамположительные бактерии-анаэробы, необходимые для поддержания защитных функций. Их всегда находят во время исследования вагинального секрета. По количеству лактобацилл можно дать косвенную оценку состоянию организма. При снижении количества колоний требуется восстановительная терапия.

Что такое нормофлора?

В организме каждого человека постоянно присутствуют два вида бактерий:

полезные – обеспечивают работу органов, помогают организму справляться с заболеваниями, поддерживают естественные процессы;
условно-патогенные – не приносят вреда до тех пор, пока количество их колоний мало, но могут вызывать воспалительные процессы при размножении.

Помимо этого, есть третий вид микроорганизмов, которые называются патогенными. Они не присутствуют в организме человека, но при определенных обстоятельствах могут проникать в него и вызывать инфекционно-воспалительные процессы.

Нормофлора – это термин, обозначающий, что в организме человека бактерии присутствуют в правильной пропорции: лидируют полезные, не размножаются условно-патогенные и отсутствуют патогенные. Определить данное состояние можно с помощью лабораторной диагностики.

Норма у женщин

В мазке здоровой женщины должно присутствовать не менее 10 миллионов колоний Lactobacillus spp в одном миллилитре вагинального секрета. У девочек, не ведущих половую жизнь, этот показатель доходит до 10*9 КОЕ/мл.

Lactobacillus spp у женщин: норма

Основные функции

Лактобактерии присутствуют в кишечнике на всем его протяжении. Они помогают переваривать и усваивать белки, жиры, углеводы, не дают размножаться условно-патогенной и патогенной флоре, нормализуют работу кишечника. Нормы для колоний полезных микроорганизмов устанавливаются индивидуально в зависимости от того, где они определяются. Например, в желудке находится не более 10*2 КОЕ на один миллилитр биологической жидкости. В кишечнике этот показатель увеличивается и достигает 10*6–10*7 КОЕ, что является нормой и для женских половых органов.

Матка, главный детородный орган, регулярно подвергается атакам бактерий, вирусов и грибков, которые могут размножаться при несоблюдении личной гигиены (Candida) или передаваться при половом контакте (Chlamydia trachomatis). Лактобациллы подавляют рост патогенной микрофлоры и защищают влагалище от инфекции, предотвращая ее проникновение по цервикальному каналу в матку. Отсутствие защитных функций приводит к развитию воспаления наружных половых органов, которое впоследствии перейдет на шейку, эндометрий и придатки.

Методы диагностики

У женщин даже незначительные изменения количества лактобацилл отражается в мазке. Самостоятельно заподозрить дисбаланс микроорганизмов можно по таким симптомам:

усиление слизистых выделений;
изменение органолептических свойств вагинальной слизи – цвета и запаха;
появление зуда и жжения;
налет на наружных половых органах;
дискомфорт в малом тазу;
боль во время полового акта;
нарушения менструального цикла.

Чтобы определить количество полезных бактерий, необходимо обратиться к гинекологу. Врач проведет мануальное обследование и возьмет вагинальный секрет для анализа. Результаты диагностики можно узнать в этот же день. Норма для выполнения анализа – до двух часов после забора материала.

Если лабораторное исследование показывает, что количество палочек Додерлейна снижено, выполняется расширенный анализ. С его помощью определяются виды бактерий во взятом биологическом материале. Полимеразная-цепная реакция позволяет выделить из микроорганизма его ДНК. Лактобациллус определяется безошибочно, что обеспечивает высокую достоверность анализа.

Методом ПЦР также можно установить присутствие условно-патогенных и патогенных микроорганизмов, определив количество их колоний. Особое внимание уделяется Ureaplasma. По сей день мнения о необходимости лечения при повышении количества уреаплазмы расходятся.

Причины изменения нормальных показателей

Уменьшение количества полезных бактерий говорит о нарушениях в работе организма. Что это такое и чем оно вызвано, разобраться самостоятельно бывает сложно. Узнать о причинах дисбаланса полезной и вредной микрофлоры можно при помощи комплексного обследования, основой которого является определение ДНК лактобациллуса и других микроорганизмов.

Причиной снижения количества lactobacillus spp у женщины становятся следующие факторы:

смена гормонального фона – во второй фазе менструального цикла, при беременности, после родов, во время менопаузы и полового созревания;
несоблюдение личной гигиены - применение щелочного мыла, длительное ношение прокладок, пренебрежение чистотой нижнего белья;
самостоятельные спринцевания отварами трав или водой с целью очищения влагалища;
беспорядочные половые связи, контакты без барьерных контрацептивов;
паразитарные инфекции;
прием антибиотиков, глюкокортикостероидов;
неправильное питание, потребление большого количества простых углеводов и злоупотребление спиртными напитками.

Исследования показывают, что женщины, регулярно употребляющие пиво, чаще страдают от молочницы – Vaginal Candidiasis.

Для повышения количества лактобацилл в мазке нужна лекарственная терапия

Как увеличить количество лактобактерий

При снижении показателей Eubacterium в кишечнике и Lactobacillus во влагалище необходимо принимать меры для коррекции данного состояния. Схема лечения будет зависеть от того, что стало причиной нарушения нормальной микрофлоры. Если результаты анализа показали присутствие патогенных микроорганизмов, женщине назначается курсовой прием противомикробных и противопротозойных препаратов. Также рекомендуются вагинальные антисептики в форме свечей, тампонов и растворов, если нет противопоказаний для их использования. После завершения курса назначается индивидуальная схема для восстановления естественной микрофлоры.

Если причиной нарушений стали экзогенные факторы – питание, вредные привычки, несоблюдение гигиены, – принимаются меры для их устранения. Восстановление микрофлоры влагалища предполагает:

применение вагинальных свечей, содержащих в составе живые колонии лактобактерий;
прием препаратов для нормализации кишечной микрофлоры;
употребление в пищу большого количества кисломолочных продуктов;
полноценное питание, предусматривающее ежедневное потребление овощей, фруктов, клетчатки и белка;
соблюдение интимной гигиены, использование специальных средств с молочной кислотой для подмывания.

Периодическое нарушение микрофлоры влагалища и кишечника у женщин, сопровождающееся снижением колоний лактобацилл, возникает из-за подавленного иммунитета. Для предотвращения подобных нарушений необходимо укреплять защитные свойства организма. Регулярная профилактика позволяет постоянно поддерживать микрофлору в нормальном состоянии.

* Представленная информация не может быть использована для самостоятельной постановки диагноза, определения лечения и не заменяет обращение к врачу!

Проведено комплексное клинико-лабораторное обследование 373 пациенток в возрасте от 18 до 45 лет, включающее идентификацию микробиоты методом масс-спектрометрического профилирования бактерий и исключение возбудителей ИППП. Наиболее часто выделялись: лактобактерии (69,9 %), дрожжеподобные грибы рода Candida (19,1 %), представители семейства Enterobacteriaceae (18,8 %), бактерии рода Staphylococcus (19,1 %), Streptococcus (13,1 %), Enterococcus (10,4 %), а также G. vaginalis (13,7 %). Благодаря применению высокотехнологичного метода MALDI-TOF MS расширился спектр идентифицируемых видов Streptococcus, Corynebacterium, культивируемых лактобактерий. Встречаемость микробных ассоциаций из 2 условно-патогенных агентов наблюдалась почти у каждой четвертой пациентки с воспалительным процессом урогенитального тракта. Показан алгоритм микробиологического исследования микробиоты влагалища.

1. Анкирская А.С. Микроэкология влагалища и профилактика акушерской патологии // Гинекология. – 1999. –№ 3. – С. 80–82.

2. Анкирская А.С. Опыт микробиологической диагностики оппортунистических инфекций влагалища / А.С. Анкирская, В.В. Муравьева // Клин. микробиолог. антимикроб. химиотер. – 2001. – Т. 3, № 2. – С. 190–194.

3. Мелкумян А.Р. Видовой состав лактобактерий при различном состоянии микробиоты влагалища у беременных /А.Р. Мелкумян, Т.В. Припутневич, А.С. Анкирская, Д.Ю. Трофимов, В.В. Муравьева, С.М. Муллабаева, М.Г. Завьялова // Клин. микробиолог. антимикроб. химиотер. – 2013. – Т. 15, № 1. – С. 72–79.

4. Методики клинических лабораторных исследований: Справочное пособие. Том 3. Клиническая микробиология / Под ред. В.В. Меньшикова. – М.: Лабора, 2009. – С. 51–64.

5. Anderson A.C. Rapid species-level identification of vaginal and oral lactobacilli using MALDI-TOF MS analysis and 16S rDNA sequencing / A.C. Anderson, M. Sanunu, C. Schneider, L. Karygiann, A. Clad, E. Hellwig // BMC Microbiology 2014. – Р. 14:312.

6. Backer E. Quantitative determination by real-time PCR of four vaginal Lactobacillus species, Gardnerella vaginalis and Atopobium vaginae indicates an inverse relationship between L. gasseri and L. iners / E. Backer, R. Verhelst, H. Verstraelen, M. Alqumber, J. Burton, J. Tagg, M. Temmerman and M. Vaneechoutte // BMC Microbiology 2007. Р. 7:115.

7. Donders G.G.G. Aerobic vaginitis in pregnancy / Donders G., Bellen G., Rezeberga D. // International Journal of Obstetrics and Gynaecology, 2011.

8. Donders Gilbert G.G. Deﬁnition and classiﬁcation of abnormal vaginal ﬂora / Gilbert G.G. Donders // Best Practice & Research Clinical Obstetrics and Gynaecology. – 2007. – №. 3. – Р. 355–373.

9. Vasquez A. Vaginal Lactobacillus flora of healthy Swedish women / A. Vasquez, T. Jakobsson, S. Ahrne, U. Forsum, G. Molin // J Clin Microbiol. – 2002; 40:2746–49.

Отличительной особенностью инфекционной урогенитальной патологии в настоящее время является возрастающая роль условно-патогенных микроорганизмов. Отсутствие специфической картины воспаления, во многих случаях бессимптомное течение осложняют диагностику этих заболеваний, что приводит к хронизации процесса, неблагоприятно влияет на репродуктивную функцию, снижает качество жизни. Число оппортунистических инфекций генитального тракта у женщин репродуктивного возраста неуклонно увеличивается, динамично меняется их этиологическая структура и чувствительность к антибиотикам [1, 2, 7, 8]. Особенностью микробиологической диагностики в настоящее время является необходимость четкой довидовой идентификации микроорганизмов. Например, показано, что разные виды лактобактерий имеют неодинаковое значение в патологическом процессе во влагалище: одни виды способствуют поддержанию здоровой среды, другие запускают процесс бактериального вагиноза (Lactobacillus iners) [3, 6, 9]. Поэтому внедрение метода MALDI-TOF (время-пролетной мaсс-спектрометрии) рибосомальных белковых фракций в практическую работу бактериологических лабораторий является крайне перспективным и открывает новые возможности диагностики микробиоты (гемофилы, нейссерии, культивируемые лактобактерии, коринебактерии). Данная методика почти не требует затрат на реактивы и расходные материалы. Сроки идентификации сокращаются при этом на 24–72 часа [3].

Выделение условно-патогенной микрофлоры из патологического материала еще не является доказательством их этиологической роли, так как те же самые микроорганизмы колонизируют влагалище в норме (табл. 1).

Нормальная микробиота влагалища женщин репродуктивного возраста [составлено по 1, 2]

Встречаются более чем у 50 % женщин

Встречаемость у 10-50 % женщин

Lactobacillus spp. в титре

Стрептококки группы viridans

При исследовании отделяемого влагалища, в норме имеющего разнообразную микробиоту, большое значение придается оценке видового состава, количественной оценке роста различных видов, выросших при первичном посеве, однотипности результатов при повторных исследованиях, а также клиническим данным. Только учет количественных соотношений отдельных видов микроорганизмов в составе микробиоты может характеризовать состояние вагинального микроценоза и степень его нарушения [1, 2, ].

У женщин бактериологическое исследование на факультативно-анаэробную группу и микроаэрофилы отделяемого влагалища позволяет выявить следующие нарушения в микробиоценозе влагалища: неспецифический (аэробный) вагинит, бактериальный вагиноз (G. vaginalis), вульвовагинальный кандидоз, вагиниты, ассоциированные с уреаплазмами и микоплазмами (табл. 2).

Нарушения в составе микробиоты влагалища у женщин [составлено по 7, 8]

Аэробный вагинит (АВ)

Энтеробактерии: E. coli, Klebsiella spp., Proteus spp.

Бактериальный вагиноз (БВ)

Микоплазмы: M. hominis

Лактобактерии со сниженными протективными свойствами (L. iners)

наличие в любом титре

Вагиниты, ассоциированные с микоплазмами

Цель исследования. Изучить качественный и количественный состав факультативно-анаэробной и микроаэрофильной микробиоты влагалища женщин репродуктивного возраста с жалобами разного характера, включая воспалительную реакцию во влагалище, при комплексном микробиологическом исследовании с идентификацией микроорганизмов методом время-пролетной масс-спектрометрии.

Материалы и методы исследования

Идентификация выделенных культур микроорганизмов проводилась на анализаторе VITEK MS (BioMerieux, Франция) методом MALDI – TOF (матричная лазерная время-пролетная масс-спектрометрия) с последующим анализом спектра с помощью базы данных VITEK MS.

Для выявления микоплазм и уреаплазм использовались коммерческие наборы для полуколичественной оценки Mycoplasma IST 2 с определением чувствительности к антибиотикам (BioMerieux, Франция).

Результаты исследования и их обсуждение

При бактериологическом исследовании микробиоты влагалища у пациенток с жалобами разного характера наиболее часто выделялись: лактобактерии (69,9 %), дрожжеподобные грибы рода Candida (19,1 %), грамотрицательные палочки семейства Enterobacteriaceae (18,8 %), грамположительные, факультативно-анаэробные кокки рода Staphylococcus (19,1 %), Streptococcus (13,1 %), Enterococcus (10,4 %), микро-аэрофильные коккобациллы G.vaginalis (13,7 %), грамположительные палочки рода Corynebacterium (3,6 %), грамотрицательные палочки рода Haemophilus (0,5 %). Ureaplasma spp. были обнаружены у 9,3 % пациенток, M. hominis – 3,6 %, ассоциации Ureaplasma spp. и M. hominis – 3,8 %. Среди отдифференцированных видов лактобактерий в микробиоте пациенток (n = 366) доминировали L.crispatus (9 %), L. jensenii (8,2 %), L.gasseri (5,5 %). В меньшей степени встречались L. acidophillus, L. delbrueckii, L. fermentum, L. salivarius, L. rhamnosus. У 52,9 % пациенток лактобактерии выделялись в высоких титрах (107 КОЕ/т), у 16,7 % в низких титрах (105 КОЕ/т), у трети пациенток (30,4 %) рост культивируемых лактобактерий отсутствовал. Доля пациенток, у которых выделялась только нормобиота, составила 41,5 %.

Полная информация о микробиоте влагалища пациенток, идентифицированной методом масс-спектрометрии, представлена в табл. 3.

У 72,7 % из 366 пациенток при микроскопии нативных мазков обнаружена лейкоцитарная реакция (более 10 лейкоцитов в поле зрения). Умеренное количество лейкоцитов в мазках (10–20 в поле зрения) наблюдалось у 19,9 %, большое количество (20–80 в поле зрения) у 41 % и резко выраженная лейкоцитарная реакция более 80 лейкоцитов в поле зрения) – у 11,7 %. Количество лейкоцитов в мазках в пределах нормы (до 10 в поле зрения) отмечено у 27,3 % пациенток.

Анализ результатов показал, что у пациенток с лейкоцитарной реакцией в микробиоте влагалища достоверно чаще выявлялся S. aureus (3,8 %), инфицирование факультативно-анаэробными бактериями (энтеробактерии, St. agalactiae, E. faecalis) с инфекционным индексом 2 (3,8 %), а также L. gasseri (6,8 %), p ≤ 0,05. У 13,5 % пациенток с лейкоцитарной реакцией выделялись, помимо нормальной микробиоты, только дрожжеподобные грибы рода Candida, преимущественно C. albicans. В 3,8 % грибы рода Candida сочетались с другими УПМ в диагностически значимых титрах (E. coli, Kl. pneumoniae, St. agalactiae, St. aureus, E. faecalis, Citrobacter koseri).

Факультативно-анаэробная и микроаэрофильная микробиота влагалища у женщин репродуктивного возраста с воспалительной реакцией и без нее (n = 366)*

Читайте также: