Подготовка среды вильсона блера к посеву включает

Обновлено: 19.09.2024

Этот агар рекомендуют для выделения и первичной идентификации Salmonella typhi из клинического материала.

Состав**:

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 52,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Осторожно подогреть с частым помешиванием до полного растворения частиц. НЕ АВТОКЛАВИРОВАТЬ СРЕДУ. Остудить до 50-55°С. Тщательно перемешать для равномерного растворения преципитата и разлить в стерильные чашки Петри толстым слоем (по 25 мл на чашку). Перед использованием чашки подсушить, не допуская пересушивания.

Принцип и оценка результата:

Этот агар рекомендован Wilson и Blair (1) для выделения сальмонелл, в частности Salmonella typhi, из клинического материала.

Пептический перевар животной ткани и мясной экстракт служат источником азотистых питательных веществ, углерода, серы, витаминов группы В и микроэлементов, необходимых для роста указанных бактерий. Бриллиантовый зеленый подавляет рост всех грамположительных бактерий. Глюкоза является ферментируемым углеводом. Сульфат железа позволяет выявить продукцию сероводорода. Висмут является тяжелым металлом, который подавляет рост большинства грамотрицательных кишечных бактерий, кроме сальмонелл. Сальмонеллы восстанавливают сульфат железа в присутствии глюкозы и сульфита висмута до сульфида железа, который окрашивает их колонии в черный цвет.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий зеленовато-желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 2,0%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет светло-желтую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Инструкция по применению среды Вильсона-Блера для клостридий.

Среда Вильсона-Блера предназначена для выделения из исследуемого материала микроорганизмов рода Clostridium, обладающих способ​ностью восстанавливать сернистокислый натрий (C.histolicum C.perfringens, C.sporogenes, C.tetani). При этом среда приобретает черную окраску.

Среда Вильсона-Блера ФОРМА ВЫПУСКА:

Набор для приготовления среды состоит из флакона с питательной основой (200 мл МПА с 1% глюкозы), флакона с 20 мл 20 % раствора натрия сернистокислого и флакона с 2 мл 8 % раствора хлорида железа.

В асептических условиях заменить резиновую пробку флакона на стерильную ватно-марлевую. На водяной бане расплавить (не кипя​тить!) питательную основу. В охлаждённую до 80 °С питательную осно​ву (200 мл МПА с 1% глюкозы) добавить 20 мл 20 % раствора натрия сернистокислого и 2 мл 8 % раствора хлорида железа, тщательно пе​ремешать. Среда готова к применению.

УСЛОВИЯ И СРОК ХРАНЕНИЯ:

Хранить в прохладном, защищённом от света месте.

Срок годности питательной основы в герметично укупоренном флаконе — 6 месяцев.

Срок годности раствора натрия сернистокислого — 6 месяцев. Срок годности раствора хлорида железа — 6 месяцев. Готовая к применению среда хранению не подлежит.


Из приготовленных почвенных разведений (до 1:10(6)), прогретых при температуре (75 +/- 5) °C в течение 20 минут для исключения вегетативных форм, по 1,0 куб. см переносится в два параллельных ряда пробирок. Затем во все пробирки наливают по 9 - 10 куб. см горячего железосульфитного агара, приготовленного ex tempore и прогретого до 70 - 80 °C (среду заливают по стенке пробирки, избегая образования пузырьков). Для создания анаэробных условий роста пробирки быстро охлаждают, помещая в емкости с холодной водой. Посевы инкубируют при (44 +/- 1) °C в течение 16 - 18 часов. При росте в среде черных крупных колоний (грамположительные, каталазоотрицательные) выдают положительный ответ о присутствии С. perfringens в 1 г почвы.

Определение методом фильтрования в пробирках

Перед посевом пробирки с железосульфитным агаром расплавляют на водяной бане (не кипятить!). В течение посева поддерживают среду нагретой до (70 - 80) °C в водяной бане.

После фильтрования установленного объема мембранный фильтр фламбированным пинцетом берут за два противоположных края и согнутый в виде трубочки помещают в пробирку с горячим агаром. Сторона фильтра с осевшими бактериями обращена внутрь. При этом фильтр распрямляется и располагается по стенке пробирки.

Сразу же после посева пробирку с агаром и фильтром для создания анаэробных условий быстро охлаждают, помещая в емкость с холодной водой. Культивируют посевы при (44 +/- 1) °C в течение (16 - 18) ч.

Определение методом фильтрования в чашках Петри

Чашки Петри заливают тонким слоем железосульфитного агара 4,0 - 5,0 куб. см. После фильтрации фильтр помещают фильтрующей поверхностью вниз на застывшую питательную среду так, чтобы под фильтром не было пузырьков воздуха. Затем заливают расплавленным железосульфитным агаром до верхнего края чашки, чтобы крышка плотно прилегала к среде для создания анаэробных условий. Культивируют посевы при (44 +/- 1) °C в течение (16 - 18) ч.

Подсчитывают черные колонии, выросшие как на фильтрах, так и в толще питательной среды. При отсутствии роста на всех фильтрах - дают отрицательный ответ.

железосульфитный агар для выделения анаэробов. К 100 мл стерильного расплавленного и охлажденного до 80°С щелочного 3% МПА доливают 10 мл 20% свежеприготовленного стерильного (1 ч в текучем паре) р-ра натрия сульфита и 1 мл 8% р-ра железа хлорида, приготовленного на стерильной воде. Среду разливают в пробирки высоким столбиком и без стерилизации ставят в термостат при 37°С на сутки для проверки стерильности. Материал засевают уколом в столбик или в расплавленную и охлажденную среду. Патогенные и условно-патогенные анаэробы образуют в среде колонии черного цвета или дают сплошное почернение среды.

Смотреть что такое "Вильсона Блера среда" в других словарях:

Вильсона-Блера среда — (W. J. Wilson, 1879 1954, англ. бактериолог; Е. М. Blair; син. агар железосульфитный) плотная селективная питательная среда для анаэробных бактерий, содержащая сернистокислый натрий и хлорное железо; анаэробные бактерии образуют колонии черного… … Большой медицинский словарь

питательная среда Вильсона-Блера — см. Вильсона Блера среда … Большой медицинский словарь

Пита́тельная среда́ — ( ые) ( ы) искусственный субстрат, представляющий собой сбалансированную смесь питательных веществ в концентрациях и сочетаниях, необходимых для роста и деления микроорганизмов или клеток высших организмов. Питательная среда Адамса см. Адамса… … Медицинская энциклопедия

Ага́р — (малайск.; син. агар агар) материал, получаемый из некоторых водорослей (в СССР из красной водоросли Ahnfeltia plicata), образующий в водных растворах плотный гель (студень); применяется в микробиологии для приготовления питательных сред, а также … Медицинская энциклопедия

агар железосульфитный — см. Вильсона Блера среда … Большой медицинский словарь

Анаэробные организмы — Аэробные и анаэробные бактерии предварительно идентифицируются в жидкой питательной среде по градиенту концентрации O2: 1. Облигатные аэробные (нуждающиеся в кислороде) бактерии в основном собираются в верхней части пробирки, чтобы поглощать… … Википедия

Анаэробная раневая газовая инфекция — (газовая гангрена, клостридиальный миозит) тяжелое острое поликлостридиальное заболевание людей и животных, осложняющее течение травм (ранений, отморожений, ожогов и др.). Вызывается бактериями рода Clostridium в ассоциации между собой и с… … Словарь микробиологии

агар висмут-сульфитный — плотная селективная питательная среда для выделения возбудителя брюшного тифа и других сальмонелл, содержащая лимоннокислый висмут, сернистокислый натрий и соль Мора; модификация среды Вильсона Блера … Большой медицинский словарь

Читайте также: